Amplification and Insertion of the eGFP Gene into the pLEXSY‐2.1 Vector
2:39
Linearization of the pLEXSY Expression Plasmid
3:26
Transfection of L. panamensis and L. donovani by Electroporation
5:00
Polyclonal Selection in Culture
6:41
Confirmation of Genomic Integration
7:09
Cloning by Limiting Dilution
8:12
Results: Confirmation of eGFP Cassette Expression and Chromosomal Insertion
9:40
Conclusion
Transcript
Este protocolo é fundamental para gerar cepas que podem ser usadas em ensaios de triagem de alto rendimento para avaliar o potencial e a atividade tradicional de moléculas Demonstrando o procedimento estarão Juana Quintero e Laura Pineda, assisten
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Aqui, descrevemos a metodologia usada para gerar cepas de L. panamensis e L . donovani expressando o gene para eGFP como um transgene integrado estável usando o sistema pLEXSY. Os parasitas transfectados foram clonados por diluição limitante, e os clones com maior intensidade de fluorescência em ambas as espécies foram selecionados para uso posterior em ensaios de triagem de drogas.