Amplification and Insertion of the eGFP Gene into the pLEXSY‐2.1 Vector
2:39
Linearization of the pLEXSY Expression Plasmid
3:26
Transfection of L. panamensis and L. donovani by Electroporation
5:00
Polyclonal Selection in Culture
6:41
Confirmation of Genomic Integration
7:09
Cloning by Limiting Dilution
8:12
Results: Confirmation of eGFP Cassette Expression and Chromosomal Insertion
9:40
Conclusion
Transcript
Detta protokoll är nyckeln till att generera stammar som kan användas i screeninganalyser med hög genomströmning för att utvärdera molekylernas potentiella och traditionella aktivitet Juana Quintero och Laura Pineda, forskningsassistenter från mit
Sign in or start your free trial to access this content
Här beskriver vi den metod som används för att generera L. panamensis och L. donovani-stammar som uttrycker genen för eGFP som en stabil integrerad transgen med hjälp av pLEXSY-systemet. Transfekterade parasiter klonades genom att begränsa utspädningen, och kloner med den högsta fluorescensintensiteten hos båda arterna valdes ut för vidare användning i läkemedelsscreeninganalyser.