Name: analysis of extracellular vesicle-mediated vascular calcification using in vitro and in vivo models
Uploaded: 2023-01-27T14:50:00
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Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse des National Heart, Lung and Blood Institute der National Institutes of Health (NIH) (1R01HL160740 und 5 T32GM132054-04) und der Florida Heart Research Foundation unterstützt. Wir danken Kassandra Gomez für ihre Hilfe bei der Synthese und Bildgebung der Hydrogele.

Die In-vivo-Arbeit wurde vom Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) der Florida International University genehmigt und beaufsichtigt und entsprach den aktuellen Richtlinien der National Institutes of Health (NIH). Bei diesem Protokoll unterscheidet sich das Verfahren nicht je nach Belastung, Gewicht, Alter und Geschlecht der Maus. Die Art der untersuchten Verkalkung, Diäten und Behandlungen können die Dauer der Studie und das Gewicht der verwendeten Maus verändern und können von einem bestimmten...

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	<li>Bakhshian Nik, A., Hutcheson, J. D., Aikawa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+as+mediators+of+cardiovascular+calcification.">Extracellular vesicles as mediators of cardiovascular calcification.</a> Frontiers in Cardiovascular Medicine. 4, 78 (2017).</li><li>Ho, C. Y., Shanahan, C. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phosphate+feeding+induces+arterial+medial+calcification+in+uremic+mice:+role+of+serum+phosphorus,+fibroblast+growth+factor-23,+and+osteopontin.">Phosphate feeding induces arterial medial calcification in uremic mice: role of serum phosphorus, fibroblast growth factor-23, and osteopontin.</a> Kidney International. 75 (12), 1297-1307 (2009).</li><li>Veseli, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+atherosclerosis.">Animal models of atherosclerosis.</a> European Journal of Pharmacology. 816, 3-13 (2017).</li><li>Chen, N. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transglutaminase+2+accelerates+vascular+calcification+in+chronic+kidney+disease.">Transglutaminase 2 accelerates vascular calcification in chronic kidney disease.</a> American Journal of Nephrology. 37 (3), 191-198 (2013).</li><li>Wu, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physicochemical+characterization+of+the+nucleational+core+of+matrix+vesicles.">Physicochemical characterization of the nucleational core of matrix vesicles.</a> Journal of Biological Chemistry. 272 (7), 4404-4411 (1997).</li><li>Hutcheson, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genesis+and+growth+of+extracellular-vesicle-derived+microcalcification+in+atherosclerotic+plaques.">Genesis and growth of extracellular-vesicle-derived microcalcification in atherosclerotic plaques.</a> Nature Materials. 15 (3), 335-343 (2016).</li></ol>

Bei der Durchführung des Protokolls ist es wichtig, die kritischen Schritte zu beachten, um erfolgreiche Ergebnisse zu erzielen. Während der Isolierung der murinen Aorta ist es wichtig, dass die Perfusion richtig durchgeführt wird. Bei der Injektion des PBS muss darauf geachtet werden, dass der rechte Ventrikel nicht punktiert wird. Dies würde dazu führen, dass die Flüssigkeit direkt aus dem Ventrikel austritt und nicht durch die Lunge zirkuliert, wodurch Blut in der Aorta zurückbleibt. Sobald die Perfusion ordnun...

Die Verkalkung ist der wichtigste Prädiktor für die Mortalität und Morbidität von Herz-Kreislauf-Erkrankungen1. Die Verkalkung verändert die Mechanik der Arterienwände aufgrund der Ansammlung von Calcium- und Phosphatmineralien2. Bei Arteriosklerose kann die Verkalkung den lokalen Stress verschlimmern und zu einer Plaqueruptur führen, die die Hauptursache für Herzinfarkte ist. Die mediale Verkalkung, die häufig auf eine chronische Nierenerkrankung zurückzuführen ist, ist weiter verbreitet und führt zu einer erheblichen arteriellen Versteifung, Funktionsstörung und Herzüberlastung 2,3. Derzeit gibt es keine therapeutischen Möglichkeiten zur Behandlung oder Vorbeugung von Gefäßverkalkungen.
Vaskuläre glatte Muskelzellen (VSMCs) nehmen einen Osteoblasten-ähnlichen Phänotyp an und setzen kalkifizierende extrazelluläre Vesikel (EVs) frei, die entstehende Mineralien keimen und so die Verkalkung vorantreiben 4,5,6. Dieser Prozess ähnelt der physiologischen Mineralisierung von Osteoblasten im Knochen7. Obwohl der Endpunkt der Mineralisierung in der Gefäßwand und der Knochenmatrix ähnlich ist, unterscheiden sich die Mechanismen, durch die die kalzifizierenden EVs entstehen, in den beiden Geweben8. Es gibt viele Arten von Modellen, die zur Untersuchung der Gefäßverkalkung verwendet werden. In vitro ahmen Zellkulturmodelle den osteogenen Übergang von VSMCs und die anschließende Mineralbildung mit spezialisierten Medien nach.
Bei der Untersuchung der In-vivo-Verkalkung hängt das verwendete Modell von der Art der zu untersuchenden Verkalkung ab. Hyperlipidämische Mausmodelle werden häufig verwendet, um atherosklerotische Verkalkungen zu untersuchen, die in lipidreichen Plaques fokaler erscheinen9. Im Gegensatz dazu ist die mediale Verkalkung im gesamten Gefäßsystem weiter verbreitet und wird häufig unter Verwendung von Modellen für chronische Nierenerkrankungen untersucht, die eine adeninreiche Diät verwenden, um Nierenversagen zu induzieren, oder chirurgische Techniken, um signifikante Teile der Nieren zu entfernen10,11. Aggressive Modelle der Gefäßverkalkung haben eine Kombination aus hyperlipidämischen und chronischen Nierenerkrankungsmodellen verwendet12. Dieses Protokoll bietet eine Methode zur Beurteilung der Gefäßverkalkung in murinen Aorten sowohl für die mediale als auch für die atherosklerotische Verkalkung, die Extraktion von EVs aus der Aortenwand und die Beobachtung des Mineralisierungspotenzials in den EVs, die aus In-vitro-Zellkulturmodellen gewonnen wurden. Zukünftige Studien können diese Verfahren in mechanistischen Analysen von Gefäßverkalkungen und zur Bewertung potenzieller therapeutischer Interventionen einsetzen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>8-well chambered coverglass</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>155409PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>302995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 G 1 inch Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen, High Concentraion, Rat Tail</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase</td>
			<td>Worthington Biochemical</td>
			<td>LS004174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-8254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection Dish</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>DD-90-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection Pan and Wax</td>
			<td>United Scientific Supplies</td>
			<td>DSPA01-W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>SH30022.FS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>26675-46-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LI-COR Odyssey</td>
			<td>LI-COR</td>
			<td>DLx</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Curved Scissors (24 mm Blade)&#160;</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-5913</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Spring Scissors (13 mm Blade)</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-5677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Spring Scissors (5 mm Blade)</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-5600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Tweezers (0.10 x 0.06 mm Tip)</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-4976</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optima MAX-TL Ultracentrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>B11229</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OsteoSense 680EX</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>NEV10020EX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce Protease Inhibitor</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A32963</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Fischer Chemical</td>
			<td>P217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RIPA Lysis and Extraction Buffer</td>
			<td>G Biosciences</td>
			<td>786-489</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fischer Chemical</td>
			<td>BP358</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A4782602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S0751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synergy HTX Multimode Reader</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture plate, 96-well</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>167008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-Pins</td>
			<td>United Scientific Supplies</td>
			<td>TPIN02-PK/100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Hydrochloride</td>
			<td>Fischer Chemical</td>
			<td>BP153</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of extracellular vesicle-mediated vascular calcification using in vitro and in vivo models

Herz-Kreislauf-Erkrankungen sind die häufigste Todesursache der Welt, und Gefäßverkalkung ist der wichtigste Prädiktor für kardiovaskuläre Ereignisse. Derzeit gibt es jedoch keine Behandlungs- oder Therapiemöglichkeiten für die Gefäßverkalkung. Die Verkalkung beginnt in spezialisierten extrazellulären Vesikeln (EVs), die durch die Aggregation von Calcium- und Phosphationen als Keimbildungsherde dienen. Dieses Protokoll beschreibt Methoden zur Gewinnung und Bewertung der Verkalkung in murinen Aorten und zur Analyse der zugehörigen extrahierten EVs. Zunächst wird eine grobe Dissektion der Maus durchgeführt, um relevante Organe wie Nieren, Leber und Lunge zu entnehmen. Dann wird die murine Aorta isoliert und von der Aortenwurzel bis zur Oberschenkelarterie herausgeschnitten. Zwei bis drei Aorten werden dann gepoolt und in einer Verdauungslösung inkubiert, bevor sie einer Ultrazentrifugation unterzogen werden, um die interessierenden EVs zu isolieren. Als nächstes wird das Mineralisierungspotenzial der EVs durch Inkubation in einer phosphatreichen Lösung und Messung der Lichtabsorption bei einer Wellenlänge von 340 nm bestimmt. Schließlich werden Kollagen-Hydrogele verwendet, um die Bildung und Reifung von verkalkten Mineralien zu beobachten, die von den EVs in vitro erzeugt werden.

Sobald die Aorten extrahiert sind, zeigt die Bildgebung mit einem optischen Nahinfrarot-Scanner eine visuelle Darstellung der Aorta sowie der Gefäßverkalkung (Abbildung 1). Die Pixelintensitätswerte innerhalb des gescannten Fluoreszenzbildes stellen die Verteilung der Verkalkung dar und werden hier mit einer farbigen Heatmap dargestellt. Zu den Quantifizierungsmethoden gehören die Identifizierung eines positiven Schwellenwerts und die Angabe der prozentualen Fläche der Aorta mit Werten,...

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Analysis of Extracellular Vesicle-Mediated Vascular Calcification Using In Vitro and In Vivo Models

In diesem Artikel wird die Methodik zur Gewinnung und Bewertung der Gefäßverkalkung durch Isolierung von murinen Aorten und anschließender Extraktion verkalkter extrazellulärer Vesikel zur Beobachtung des Mineralisierungspotenzials vorgestellt.

Analyse der extrazellulären Vesikel-vermittelten Gefäßverkalkung mittels In-vitro- und In-vivo-Modellen

Cardiovascular disease is the leading cause of death in the world, and vascular calcification is the most significant predictor of cardiovascular events; ...

Dieses Protokoll bietet eine Methode, die verwendet werden kann, um Behandlungen für Gefäßverkalkungen, die der wichtigste Prädiktor für Herz-Kreislauf-Erkrankungen sind, zu bewerten und in Zukunft zu entwickeln. Die Fähigkeit, EVs zu isolieren, ermöglicht es uns, die Mechanismen, die zur Gefäßverkalkung führen, und die phänotypische Veränderung der glatten Gefäßmuskelzellen weiter zu untersuchen. Diese Technik gibt Einblick in frühe molekulare Mechanismen der durch Gefäßzellen vermittelten Verkalkung glatter Muskelzellen.Wenn man dies versteht, können therapeutische Optionen für den verstandenen Mechanismus untersucht werden. Alle EVs von Interesse können mit dieser Methode untersucht werden. Es ist nicht exklusiv für glatte Gefäßmuskelzellen, Osteoblasten oder Gefäßverkalkungen.Nachdem Sie die Maus eingeschläfert haben, heben Sie die Haut mit einer Pinzette an und machen Sie einen Einschnitt entlang der Mittellinie. Entfernen Sie überschüssige Haut oder Fett. Entfernen Sie dann die Fortpflanzungsorgane, die Blase und das Fett außerhalb der Mittellinie.Bewegen Sie dann die Magen-Darm-Organe auf die rechte Seite und folgen Sie dem Darm in der Mittellinie. Sobald Sie gefunden sind, heben Sie die Mittellinie an und schneiden Sie den Magen-Darm-Trakt bis zum Magen heraus. Schneiden Sie die Nieren aus, indem Sie sie von der Mittellinie wegheben.Schneiden Sie so nah wie möglich an der Niere. Entfernen Sie die Leber, indem Sie die Lappen anheben und von der Mittellinie abschneiden. Dann perfusionieren Sie das Herz und die Aorta, indem Sie mit einer 10-Milliliter-Spritze kaltes PBS in den rechten Ventrikel injizieren.Warten Sie, bis sich die Lunge aufgeblasen hat und weiß wird. Entfernen Sie die Lunge und überschüssiges Zwerchfell oder Brustkorb. Um den Knochen zu entfernen, öffnen Sie eine Schere weit und platzieren Sie sie im unteren Bereich der Maus über dem Schwanz.Schneiden Sie nach unten, heben Sie die Wirbelsäule von der Haut ab und entfernen Sie das Fett von den Seiten der Mittellinie. Sobald sich die Haut gelöst hat, entfernen Sie die Wirbelsäule und die intakten Organe, indem Sie direkt über dem Herzen schneiden. Legen Sie die Wirbelsäule und die intakten Organe in ein Becherglas PBS im Eiskübel, wenn Sie sie zu einem Stereoskop transportieren.Nachdem Sie die Wirbelsäule und die Organe in die Sezierschale bewegt haben, füllen Sie sie mit eiskaltem PBS und fixieren Sie die Wirbelsäule und den Brustkorb mit Nadeln. Heben Sie das Herz unter dem Präpariermikroskop vorsichtig mit einer Pinzette an und beginnen Sie mit dem Schneiden über der Wirbelsäule und unter der Aorta. Fahren Sie damit fort, bis die Unterseite der Wirbelsäule erreicht ist.Entfernen Sie die Wirbelsäule von der Sezierschale und stecken Sie das Herz und jegliches Fremdfett oder Muskel fest. Beginnen Sie mit dem Bereich direkt unter dem Herzen, identifizieren Sie die Speiseröhre, die Hohlvene und die Aorta. Entfernen Sie die Speiseröhre und die Hohlvene, um ein klares Gesichtsfeld der Aorta zu haben.Beginnen Sie mit der Mikrodissektionszezange und der Schere mit dem Anheben des Fettgewebes und schneiden Sie so nah wie möglich an der Aorta. Setzen Sie dies entlang der medialen Linie fort, bis alle Aorta und die Oberschenkelarterien freigelegt sind. Entfernen Sie am Herzen das gesamte Fettgewebe, das die drei Äste am Aortenbogen freilegt.Entfernen Sie die Aortenwurzel aus dem linken Ventrikel, indem Sie die Mikrodissektionsschere in den linken Ventrikel einführen und den Muskel um die Aorta herum durchtrennen. Sobald die Aorta isoliert und gereinigt ist, bilden Sie die Aorta mit einem Nahinfrarotscanner ab, um die Gefäßverkalkung sichtbar zu machen. Quantifizieren Sie mit dem benutzerdefinierten MATLAB-Skript das Gesamtsignal des Calcium-Tracers, normalisiert auf die gesamte gescannte Aortenfläche.Leiten Sie das MATLAB aus dem Nahinfrarot-Scan der Aorten an den Speicherort der TIF-Dateien, öffnen Sie die einzelnen Dateien und extrahieren Sie die Pixelintensitätswerte aus den TIF-Dateien. Wählen Sie die Aorta mit der größten Verkalkung als Skalenmaximum auf dem farbig abgebildeten Bild aus. Wenn der Befehl Wie viele Proben befinden sich im Bild im Fenster angezeigt wird, geben Sie die Anzahl der Aorten im aktuellen Bild ein, und wählen Sie jede Aorta einzeln aus.Sobald eine Aorta ausgewählt ist, erstellt MATLAB Binärbilder mit einer Maske der Gesamtfläche und der verkalkten Fläche der Aorta. Die Werte aus diesen maskierten Bildern werden dann verwendet, um die gesamte verkalkte Fläche, die Gesamtfläche der Aorta, die prozentuale Fläche, die für die Verkalkung positiv ist, und die mittlere Intensität der verkalkten Fläche zu bestimmen. Unmittelbar nach dem Scannen der Aorten werden zwei bis drei Aorten gepoolt, um eine ausreichende Proteinkonzentration zu erhalten.Inkubieren Sie zwei bis drei gepoolte Aorten in 1,5 Millilitern Verdauungslösung für zwei Stunden bei 37 Grad Celsius. Sammeln Sie die Lösung und zentrifugieren Sie sie 15 Minuten lang bei 1.000 g, um Zelltrümmer zu entfernen. Um die Mikrovesikel zu entfernen, zentrifugieren Sie den Überstand erneut 30 Minuten lang bei 33.000 g.Sammeln und bewerten Sie den Überstand auf Verkalkungspotenzial. Nachdem Sie die Zelltrümmer durch Zentrifugation aus dem konditionierten gesammelten Medium entfernt haben, schleudern Sie den gesammelten Überstand 30 Minuten lang bei 33.000 g. Sammeln Sie den Überstand und füllen Sie ihn in ein neues Röhrchen um.Dann fügen Sie 1% von 300 Millimol Natriumdihydrogenphosphat zu den extrazellulären Vesikelproben hinzu und mischen Sie die Lösung durch Pipettieren. Übertragen Sie 200 Mikroliter der Mischungslösung auf eine 96-Well-Platte und inkubieren Sie die 96-Well-Platte im Mikroplatten-Reader bei 37 Grad Celsius. Stellen Sie den Plattenleser so ein, dass er jede Minute die Absorption bei einer Wellenlänge von 340 Nanometern aufzeichnet.Pipettieren Sie 300 Mikroliter der Kollagenlösung in jede Vertiefung eines Kammerglases mit acht Vertiefungen und inkubieren Sie 72 Stunden lang bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid. Nach der Inkubation 300 Mikroliter DMEM als Kontrolle in die Vertiefungen geben. Fügen Sie 300 Mikroliter der zuvor gesammelten extrazellulären Vesikelmediumproben zu den verbleibenden Vertiefungen hinzu und inkubieren Sie sechs Tage lang, wie zuvor gezeigt.Am 10. Tag pipettieren Sie 2,5 Mikroliter der Mischung aus OsteoSense und DMEM in jede Vertiefung und inkubieren Sie sie 24 Stunden lang. Am Ende der Inkubation werden die Hydrogele mit Filtern für die OsteoSense-Fluoreszenz mit einem inversen Mikroskop durch den Boden einer Deckglaskammer oder von oben mit einem Objektiv mit großem Arbeitsabstand abgebildet. Beurteilen Sie die Anzahl der Verkalkungen und die Verkalkungsgröße sowie die gesammelten Bilder mit den in ImageJ verfügbaren Partikelanalyseoptionen.Navigieren Sie dann zu Bild, wählen Sie Anpassen und klicken Sie auf Schwellenwert, um die Bilder so zu binarisieren, dass nur das OsteoSense-Signal weiß angezeigt wird. Verwenden Sie dann den Befehl "Analysieren" und klicken Sie auf "Partikel analysieren", um Informationen zu jeder Verkalkung im Bild abzurufen. Verwenden Sie für jedes analysierte Bild dieselben Schwellenwertparameter, um die Konsistenz zu gewährleisten.Die optische Nahinfrarot-Scanner-Bildgebung der präparierten Aorten zeigte ein höheres OsteoSense-Signal in der gesamten Aorta einer Maus mit chronischer Nierenerkrankung als die beiden Aorten von Kontrollmäusen. Das konditionierte Medium, das aus glatten Gefäßmuskelzellen gewonnen wurde, die in einem prokalzifizierenden Medium kultiviert wurden, zeigte bei 340 Nanometern eine höhere Absorption als das Kontrollmedium. Der Absorptionsanstieg trat in der Pro-Kalk-Probe 1,5-fach schneller auf als in einer Kontrollprobe.Das konditionierte Medium aus Zellen, die unter kalknahen Bedingungen kultiviert wurden, enthielt mineralische Ablagerungen. Bei der Mikrodissektion der Aorta ist es wichtig, das Fett, das die Aorta umgibt, sorgfältig zu schneiden. Sie möchten, dass so viel wie möglich von der Aorta analysiert wird, aber das kann ziemlich mühsam sein.Sobald EVs isoliert sind, könnten zusätzliche Tests, wie z. B. ein alkalischer Phosphatase-Aktivitätstest oder ein Immunkörper, durchgeführt werden. Diese Tests würden die Mechanismen und Proteine, die in EVs vorhanden sind, weiter aufzeigen.

Research

JoVE Journal

Biology

Analysis of Extracellular Vesicle-Mediated Vascular Calcification Using In Vitro and In Vivo Models

Analysis of Schwann-astrocyte Interactions Using In Vitro Assays

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Analyse von Schwann-Astrozyten Wechselwirkungen mit In Vitro Assays

Schwann cells are one of the commonly used cells in repair strategies following spinal cord injuries. Schwann cells are capable of supporting axonal ...

Forschung

Biologie

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction

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A major endocytic pathway initiates with the formation of clathrin-coated vesicles (CCVs) that transport cargo from the cell surface to endosomes1-6. CCVs ...

Visualization of MG53-mediated Cell Membrane Repair Using in vivo and in vitro Systems

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Visualisierung der MG53-vermittelte Cell Membrane Repair mit In vivo Und In-vitro- Systems

Repair of acute injury to the cell membrane is an elemental process of normal cellular physiology, and defective membrane repair has been linked to many ...

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In Vitro Synthesis of Modified mRNA for Induction of Protein Expression in Human Cells

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