Name: analysis of extracellular vesicle-mediated vascular calcification using in vitro and in vivo models
Uploaded: 2023-01-27T14:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Extracellular Vesicle-Mediated Vascular Calcification Using In Vitro and In Vivo Models at JoVE.com

Эта работа была поддержана грантами Национального института сердца, легких и крови Национальных институтов здравоохранения (NIH) (1R01HL160740 и 5 T32GM132054-04) и Фонда исследований сердца Флориды. Мы хотели бы поблагодарить Кассандру Гомес за ее помощь в синтезе и визуализации гидрогелей.

Работа in vivo была одобрена и контролировалась Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC) в Международном университете Флориды и соответствовала текущим рекомендациям Национальных институтов здравоохранения (NIH). Для этого протокола процедура не отл...

<ol>
	<li>Bakhshian Nik, A., Hutcheson, J. D., Aikawa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+as+mediators+of+cardiovascular+calcification.">Extracellular vesicles as mediators of cardiovascular calcification.</a> Frontiers in Cardiovascular Medicine. 4, 78 (2017).</li><li>Ho, C. Y., Shanahan, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medial+arterial+calcification:+an+overlooked+player+in+peripheral+arterial+disease.">Medial arterial calcification: an overlooked player in peripheral arterial disease.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 36 (8), 1475-1482 (2016).</li><li>Marinelli, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+arterial+media+calcification+in+chronic+kidney+disease.">Diagnosis of arterial media calcification in chronic kidney disease.</a> Cardiorenal Medicine. 3 (2), 89-95 (2013).</li><li>Moe, S. M., Chen, N. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+vascular+calcification+in+chronic+kidney+disease.">Mechanisms of vascular calcification in chronic kidney disease.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 19 (2), 213-216 (2008).</li><li>Mir, B., Goettsch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+as+delivery+vehicles+of+specific+cellular+cargo.">Extracellular vesicles as delivery vehicles of specific cellular cargo.</a> Cells. 9 (7), 1601 (2020).</li><li>Ruiz, J. L., Hutcheson, J. D., Aikawa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+calcification:+Current+controversies+and+novel+concepts.">Cardiovascular calcification: Current controversies and novel concepts.</a> Cardiovascular Pathology. 24 (4), 207-212 (2015).</li><li>New, S. E., Aikawa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+extracellular+vesicles+in+de+novo+mineralization:+An+additional+novel+mechanism+of+cardiovascular+calcification.">Role of extracellular vesicles in de novo mineralization: An additional novel mechanism of cardiovascular calcification.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 33 (8), 1753-1758 (2013).</li><li>Aikawa, E., Hutcheson, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cardiovascular Calcification and Bone Mineralization. , (2020).</li><li>Johnson, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+P-407-induced+murine+model+of+dose-controlled+hyperlipidemia+and+atherosclerosis:+A+review+of+findings+to+date.">The P-407-induced murine model of dose-controlled hyperlipidemia and atherosclerosis: A review of findings to date.</a> Journal of Cardiovascular Pharmacology. 43 (4), 595-606 (2004).</li><li>Shobeiri, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+calcification+in+animal+models+of+CKD:+A+review.">Vascular calcification in animal models of CKD: A review.</a> American Journal of Nephrology. 31 (6), 471-481 (2010).</li><li>El-Abbadi, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phosphate+feeding+induces+arterial+medial+calcification+in+uremic+mice:+role+of+serum+phosphorus,+fibroblast+growth+factor-23,+and+osteopontin.">Phosphate feeding induces arterial medial calcification in uremic mice: role of serum phosphorus, fibroblast growth factor-23, and osteopontin.</a> Kidney International. 75 (12), 1297-1307 (2009).</li><li>Veseli, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+atherosclerosis.">Animal models of atherosclerosis.</a> European Journal of Pharmacology. 816, 3-13 (2017).</li><li>Chen, N. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transglutaminase+2+accelerates+vascular+calcification+in+chronic+kidney+disease.">Transglutaminase 2 accelerates vascular calcification in chronic kidney disease.</a> American Journal of Nephrology. 37 (3), 191-198 (2013).</li><li>Wu, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physicochemical+characterization+of+the+nucleational+core+of+matrix+vesicles.">Physicochemical characterization of the nucleational core of matrix vesicles.</a> Journal of Biological Chemistry. 272 (7), 4404-4411 (1997).</li><li>Hutcheson, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genesis+and+growth+of+extracellular-vesicle-derived+microcalcification+in+atherosclerotic+plaques.">Genesis and growth of extracellular-vesicle-derived microcalcification in atherosclerotic plaques.</a> Nature Materials. 15 (3), 335-343 (2016).</li></ol>

При выполнении протокола важно отметить критические шаги для получения успешных результатов. Во время изоляции мышиной аорты жизненно важно, чтобы перфузия выполнялась должным образом. При введении PBS необходимо соблюдать осторожность, чтобы не проколоть правый желудочек. Это привед?...

Кальцификация является наиболее значимым предиктором смертности и заболеваемости сердечно-сосудистыми заболеваниями1. Кальцификация изменяет механику артериальной стенки из-за накопления кальциевых и фосфатных минералов2. При атеросклерозе кальцификация может усугубить местный стресс и привести к разрыву бляшек, что является основной причиной сердечных приступов. Медиальная кальцификация, часто возникающая в результате хронического заболевания почек, более распространена и приводит к значительной артериальной жесткости, дисфункции и перегрузке сердца 2,3. В настоящее время не существует терапевтических вариантов лечения или профилактики кальцификации сосудов.
Сосудистые гладкомышечные клетки (VSMC) принимают остеобластоподобный фенотип и высвобождают кальцифицирующие внеклеточные везикулы (EV), которые зарождают зарождающиеся минералы, тем самым вызывая кальцификацию 4,5,6. Этот процесс напоминает физиологическую минерализацию остеобластов в кости7. Хотя конечная точка минерализации одинакова в сосудистой стенке и костном матриксе, механизмы, с помощью которых возникают кальцифицирующие EV, различаются в двух тканях8. Существует множество типов моделей, которые используются для изучения кальцификации сосудов. Модели клеточных культур in vitro имитируют остеогенный переход VSMC и последующее образование минералов со специализированными средами.
При изучении кальцификации in vivo используемая модель зависит от типа изучаемой кальцификации. Модели гиперлипидемических мышей часто используются для изучения атеросклеротической кальцификации, которая проявляется более фокальной в богатых липидами бляшках9. Напротив, медиальная кальцификация более распространена по всей сосудистой сети и часто изучается с использованием моделей хронической болезни почек, в которых используется режим диеты, богатый аденином, чтобы вызвать почечную недостаточность, или хирургические методы удаления значительных частей почек10,11. Агрессивные модели кальцификации сосудов использовали комбинацию моделей как гиперлипидемической, так и хронической болезни почек12. Этот протокол предоставляет метод оценки кальцификации сосудов в мышиных аортах как для медиальной, так и для атеросклеротической кальцификации, извлечения EV из стенки аорты и наблюдения за потенциалом минерализации в EV, полученных из моделей клеточных культур in vitro. Будущие исследования могут использовать эти процедуры в механистическом анализе кальцификации сосудов и для оценки потенциальных терапевтических вмешательств.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>8-well chambered coverglass</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>155409PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>302995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 G 1 inch Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen, High Concentraion, Rat Tail</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase</td>
			<td>Worthington Biochemical</td>
			<td>LS004174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-8254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection Dish</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>DD-90-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection Pan and Wax</td>
			<td>United Scientific Supplies</td>
			<td>DSPA01-W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>SH30022.FS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>26675-46-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LI-COR Odyssey</td>
			<td>LI-COR</td>
			<td>DLx</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Curved Scissors (24 mm Blade)&#160;</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-5913</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Spring Scissors (13 mm Blade)</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-5677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Spring Scissors (5 mm Blade)</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-5600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Tweezers (0.10 x 0.06 mm Tip)</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-4976</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optima MAX-TL Ultracentrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>B11229</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OsteoSense 680EX</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>NEV10020EX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce Protease Inhibitor</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A32963</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Fischer Chemical</td>
			<td>P217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RIPA Lysis and Extraction Buffer</td>
			<td>G Biosciences</td>
			<td>786-489</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fischer Chemical</td>
			<td>BP358</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A4782602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S0751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synergy HTX Multimode Reader</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture plate, 96-well</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>167008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-Pins</td>
			<td>United Scientific Supplies</td>
			<td>TPIN02-PK/100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Hydrochloride</td>
			<td>Fischer Chemical</td>
			<td>BP153</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of extracellular vesicle-mediated vascular calcification using in vitro and in vivo models

Сердечно-сосудистые заболевания являются основной причиной смерти в мире, а кальцификация сосудов является наиболее значимым предиктором сердечно-сосудистых событий; Тем не менее, в настоящее время нет лечения или терапевтических вариантов кальцификации сосудов. Кальцификация начинается в специализированных внеклеточных везикулах (ВВ), которые служат очагами зарождения путем агрегации ионов кальция и фосфата. В этом протоколе описываются методы получения и оценки кальцификации в мышиных аортах и анализа связанных с ними извлеченных ВВ. Во-первых, грубое вскрытие мыши выполняется для сбора любых соответствующих органов, таких как почки, печень и легкие. Затем мышиная аорта изолируется и иссекается от корня аорты до бедренной артерии. Затем две-три аорты объединяют и инкубируют в пищеварительном растворе перед ультрацентрифугированием для выделения интересующих ВВ. Затем потенциал минерализации электромобилей определяют путем инкубации в растворе с высоким содержанием фосфатов и измерения поглощения света на длине волны 340 нм. Наконец, коллагеновые гидрогели используются для наблюдения за образованием и созреванием кальцинированных минералов, производимых EV in vitro.

После извлечения аорты визуализация с использованием оптического сканера ближнего инфракрасного диапазона показывает визуальное представление аорты, а также кальцификации сосудов (рис. 1). Значения интенсивности пикселей в отсканированном флуоресцентном изображени?...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Extracellular Vesicle-Mediated Vascular Calcification Using In Vitro and In Vivo Models at JoVE.com

Analysis of Extracellular Vesicle-Mediated Vascular Calcification Using In Vitro and In Vivo Models

В данной работе представлена методика получения и оценки кальцификации сосудов путем выделения мышиных аорт с последующим извлечением кальцинированных внеклеточных везикул для наблюдения за потенциалом минерализации.

Анализ внеклеточной везикуло-опосредованной кальцификации сосудов с использованием моделей in vitro и in vivo

Cardiovascular disease is the leading cause of death in the world, and vascular calcification is the most significant predictor of cardiovascular events; ...

Этот протокол предоставляет метод, который может быть использован для оценки, а в будущем и для разработки методов лечения кальцификации сосудов, которая является наиболее значимым предиктором сердечно-сосудистых заболеваний. Возможность выделения ЭВ позволяет дополнительно изучить механизмы, приводящие к кальцификации сосудов, и фенотипическое изменение клеток гладкой мускулатуры сосудов. Этот метод дает представление о ранних молекулярных механизмах кальцификации, опосредованной клетками гладких мышц сосудов.Понимание этого позволяет изучить терапевтические варианты для понимаемого механизма. С помощью этого метода можно изучить любые интересующие электромобили. Он не является исключительным для клеток гладких мышц сосудов, остеобластов или кальцификации сосудов.После усыпления мыши поднимите кожу пинцетом и сделайте надрез по средней линии. Удалите лишнюю кожу или жир. Затем удалите репродуктивные органы, мочевой пузырь и жир за пределами средней линии.Затем переместите органы желудочно-кишечного тракта вправо и следуйте по кишечнику по средней линии. После обнаружения поднимите среднюю линию и иссеките желудочно-кишечный тракт до желудка. Иссекайте почки, отрывая их от средней линии.Разрежьте как можно ближе к почкам. Удалите печень, приподняв доли и отрезав от средней линии. Затем перфузируют сердце и аорту, вводя холодный PBS в правый желудочек с помощью 10-миллилитрового шприца.Подождите, пока легкие надуются и побелеют. Удалите легкие и лишнюю диафрагму или грудную клетку. Чтобы удалить кость, широко раскройте ножницы и поместите их в нижнюю часть мыши над хвостом.Срежьте вниз, приподнимите позвоночник от кожи и удалите жир с боков средней линии. Как только кожа отслоится, иссеките позвоночник и неповрежденные органы, разрезав прямо над сердцем. Поместите позвоночник и неповрежденные органы в стакан PBS в ведре со льдом при транспортировке к стереоскопу.Переместив позвоночник и органы в рассекающую чашку, наполните ее ледяным PBS и придавите позвоночник и грудную клетку с помощью игл. Под диссекционным микроскопом осторожно поднимите сердце с помощью пинцета и начните разрезать над позвоночником и под аортой. Продолжайте это до тех пор, пока не достигнете нижней части позвоночника.Удалите позвоночник из рассекающей чашки и прижмите сердце и любой посторонний жир или мышцу. Начиная с области прямо под сердцем, определите пищевод, полую вену и аорту. Удалите пищевод и полую вену, чтобы иметь четкое поле зрения аорты.Используя щипцы и ножницы для микрорассечения, начните поднимать жировую ткань и резать как можно ближе к аорте. Продолжайте это вниз по медиальной линии, пока не обнажятся все аорта и бедренные артерии. В сердце удалите всю жировую ткань, обнажив три ветви дуги аорты.Удалите корень аорты из левого желудочка, вставив ножницы для микрорассечения в левый желудочек и разрезав мышцу, окружающую аорту. После того, как аорта изолирована и очищена, визуализируйте аорту с помощью сканера ближнего инфракрасного диапазона, чтобы визуализировать кальцификацию сосудов. Используя пользовательский сценарий MATLAB, количественно определите общий сигнал кальциевого индикатора, нормализованный к общей просканированной площади аорты.Направьте MATLAB к местоположению файлов TIF из ближнего инфракрасного сканирования аорты, откройте отдельные файлы и извлеките значения интенсивности пикселей из файлов TIF. Выберите аорту с наибольшей кальцификацией в качестве максимального масштаба на изображении цветовой карты. Когда в окне появится команда «Сколько образцов на изображении», введите количество аорт на текущем изображении и выберите каждую аорту одну за другой.После того, как аорта выбрана, MATLAB создаст двоичные изображения с маской общей площади и кальцинированной области аорты. Значения из этих замаскированных изображений затем используются для определения общей кальцинированной площади, общей площади аорты, процентной площади, положительной для кальцификации, и средней интенсивности кальцинированной области. Сразу после сканирования аорты объедините две-три аорты, чтобы получить достаточную концентрацию белка.Инкубируйте две-три объединенные аорты в 1,5 миллилитрах пищеварительного раствора в течение двух часов при температуре 37 градусов по Цельсию. Соберите раствор и центрифугу по 1 000 г в течение 15 минут удалите клеточный мусор. Затем, чтобы удалить микровезикулы, снова центрифугируйте надосадочную жидкость в течение 30 минут при 33 000 г.Соберите и оцените надосадочную жидкость на потенциал кальцификации. После удаления клеточного мусора из кондиционированной собранной среды центрифугированием отжимают собранную надосадочную жидкость при 33 000 г в течение 30 минут. Соберите надосадочную жидкость и перенесите ее в новую пробирку.Затем добавьте 1% от 300 миллимолярного дигидрофосфата натрия к образцам внеклеточных везикул и перемешайте раствор пипеткой. Перелейте 200 микролитров раствора смеси в 96-луночную пластину и инкубируйте 96-луночную пластину в считывателе микропланшетов при 37 градусах Цельсия. Настройте считыватель пластин на регистрацию поглощения на длине волны 340 нанометров каждую минуту.Пипеткой налейте 300 микролитров раствора коллагена в каждую лунку восьмилуночного стакана и инкубируйте при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа в течение 72 часов. После инкубации добавьте в лунки 300 микролитров DMEM в качестве контроля. Добавьте 300 микролитров образцов внеклеточной везикуловой среды, собранных ранее, в оставшиеся лунки и инкубируйте в течение шести дней, как показано ранее.На 10-й день в каждую лунку насыпают пипеткой по 2,5 микролитра смеси OsteoSense и DMEM и выдерживают в течение 24 часов. В конце инкубации визуализируйте гидрогели с фильтрами для флуоресценции OsteoSense через нижнюю часть камеры из покровного стекла с помощью инвертированного микроскопа или сверху с объективом с большим рабочим расстоянием. Оцените количество кальцификатов, размер кальцификации и собранные изображения, используя параметры анализа частиц, доступные в ImageJ.Затем перейдите в раздел «Изображение», выберите «Настроить» и нажмите «Пороговое значение», чтобы двоичные изображения отображались таким образом, чтобы белый цвет был только сигналом OsteoSense. Затем используйте команду «Анализировать» и нажмите команду «Анализировать частицы», чтобы получить информацию о каждой кальцификации на изображении. Используйте одни и те же пороговые параметры для согласованности для каждого анализируемого изображения.Оптический сканер ближнего инфракрасного диапазона рассеченных аорт показал более высокий сигнал OsteoSense по всей аорте мыши с хроническим заболеванием почек, чем две аорты контрольных мышей. Кондиционированная среда, полученная из клеток гладких мышц сосудов, культивируемых в прокальцифицирующей среде, показала более высокую абсорбцию на глубине 340 нанометров, чем контрольная среда. Увеличение абсорбции происходило в 1,5 раза быстрее в прокальцифицирующем образце по сравнению с контрольным образцом.Кондиционированная среда из клеток, культивируемых в прокальцифицирующих условиях, содержала минеральные отложения. При микрорассечении аорты важно осторожно срезать жир, окружающий аорту. Вы хотите, чтобы как можно больше аорты было проанализировано, но это может быть довольно утомительно.После выделения ЭВ могут быть завершены дополнительные тесты, такие как анализ активности щелочной фосфатазы или иммунологический анализ. Эти тесты дополнительно покажут механизмы и белки, присутствующие в электромобилях.

Research

JoVE Journal

Biology

Analysis of Extracellular Vesicle-Mediated Vascular Calcification Using In Vitro and In Vivo Models

Analysis of Schwann-astrocyte Interactions Using In Vitro Assays

Analysis of Schwann-astrocyte Interactions Using In Vitro Assays

Анализ Шванн-астроцитов взаимодействий с использованием In Vitro Анализы

Schwann cells are one of the commonly used cells in repair strategies following spinal cord injuries. Schwann cells are capable of supporting axonal ...

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction

В естественных условиях и в пробирке исследования Адаптер-клатрин Взаимодействие

A major endocytic pathway initiates with the formation of clathrin-coated vesicles (CCVs) that transport cargo from the cell surface to endosomes1-6. CCVs ...

Visualization of MG53-mediated Cell Membrane Repair Using in vivo and in vitro Systems

Visualization of MG53-mediated Cell Membrane Repair Using in vivo and in vitro Systems

Визуализация MG53-опосредованной клеточной мембраны Ремонт Использование В естественных условиях И В пробирке Системы

Repair of acute injury to the cell membrane is an elemental process of normal cellular physiology, and defective membrane repair has been linked to many ...

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the I&middot;Cryo Kit

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the IÃƒâ€šÃ‚Â·Cryo Kit

Мышь Криоконсервация спермы и восстановление использованием I · Cryo Kit

Thousands of new genetically modified (GM) strains of mice have been created since the advent of transgenesis and knockout technologies.  Many of these ...

In Vitro Synthesis of Modified mRNA for Induction of Protein Expression in Human Cells

In Vitro Synthesis of Modified mRNA for Induction of Protein Expression in Human Cells

Экстракорпоральное синтеза модифицированных мРНК для индукции экспрессии белка в клетках человека

The exogenous delivery of coding synthetic messenger RNA (mRNA) for induction of protein synthesis in desired cells has enormous potential in the fields ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Измерение Жесткость<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Аорте при помощи мыши атомно-силовой микроскопии

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Micron-scale Phenotyping Techniques of Maize Vascular Bundles Based on X-ray Microcomputed Tomography

Мкм шкала фенотипирование методы кукурузы сосудистых пучков, основанный на Microcomputed рентгеновская томография

It is necessary to accurately quantify the anatomical structures of maize materials based on high-throughput image analysis techniques. Here, we provide a ...

Measurement of Energy Metabolism in Explanted Retinal Tissue Using Extracellular Flux Analysis

Измерение энергии метаболизма в описаны ткани сетчатки, с помощью анализа внеклеточного Flux

High acuity vision is a heavily energy-consuming process, and the retina has developed several unique adaptations to precisely meet such demands while ...

Microbiota Analysis Using Two-step PCR and Next-generation 16S rRNA Gene Sequencing

Анализ микробиоты с использованием двухступенчатого ПЦР и секвенирования гена нового поколения 16S rRNA

The human gut is colonized by trillions of bacteria that support physiologic functions such as food metabolism, energy harvesting, and regulation of the ...

In Vitro Analysis of E3 Ubiquitin Ligase Function

In Vitro Analysis of E3 Ubiquitin Ligase Function

В пробирке Анализ функции E3 убиквитин лигазы

The covalent attachment of ubiquitin (Ub) to internal lysine residue(s) of a substrate protein, a process termed ubiquitylation, represents one of the ...