肿瘤复发是GBM手术切除方案失败的主要原因。我们的方案为复发、研究后的有效局部治疗研究提供了独特的 GBM 复发模型。该技术为构建GBM复发术后模型提供了一种方便可行的方法，可用于GBM复发的各种研究。
首先准备动物。用眼科剪刀沿右额头中线切开小鼠的头皮约一厘米。调整立体定位装置，以确保人字形接缝和前囟门点位于同一水平面。
使用蘸有吉尼亚紫的棉签，在前方 1 毫米、右侧 1.8 毫米和前囟门下方 3 毫米处标记一个点。使用直径为一毫米的迷你颅钻头钻孔该点。创建一个直径约一毫米，深度约一毫米的孔。
用无菌棉签清除渗出的脑脊液。接下来，用微量注射器吸出五微升肿瘤细胞悬液。将微量注射器的针尖垂直对准颅骨钻孔并插入，直到针尖进入颅面三毫米。
然后，将针缩回 0.5 毫米。打开微量注射器，以每分钟一微升的速度注入溶液。注射后将针头保留10分钟。
然后，慢慢取出微量注射器，并用无菌干燥的棉球按压注射点。用不可吸收的10-0手术缝合线缝合头皮并对切口进行消毒。监测动物的健康状况并将其保持在温暖的条件下。
鼠标醒来后，将其移回外壳笼子。荷瘤10天后，检测移植肿瘤。为此，腹膜内注射荧光素钾，11秒后，用体内生物发光成像系统对小鼠进行成像。
分离头皮组织和颅骨，并检查用于构建原位颅内GBM模型的钻孔。如果孔已经愈合，请使用立体定向设备识别孔并如前所示钻孔。用颅骨钻将整个直径扩大到五毫米，并用无菌棉签去除渗出的脑脊液。
将显微镜对准鼠标头并调整设置，以确保钻孔位于视野中心。用微型剪刀剪断脑膜。然后，在显微镜下用微刮匙和微手术刀去除部分肿瘤组织。
用无菌纱布止血，并用无菌生理盐水清洗注射液。使用一毫升注射器，将10微升市售水凝胶注入切除腔。使用该协议，将GBM细胞植入小鼠的大脑中，并在第10天通过体内生物发光成像测试肿瘤生长。
第11天进行切除和水凝胶注射。GBM复发术后模型的肿瘤大小显著小于原位颅内GBM模型。在第25天监测残留肿瘤生长显示肿瘤复发。
H&E染色证实GBM复发术后模型构建成功，切除后残留肿瘤明显复发。在这个过程中要记住的最重要的事情是在显微镜下切割脑膜并去除部分肿瘤组织。
