Tumor tilbagefald er en væsentlig årsag til regime svigt af kirurgisk resektion af GBM. Vores protokol giver en unik GBM-gentagelsesmodel til effektive lokale behandlingsstudier af tilbagefald efter forskning. Denne teknik giver en bekvem og gennemførlig metode til at konstruere GBM tilbagefald post-resektionsmodellen og kan bruges i forskellige undersøgelser af GBM tilbagefald.
Begynd med at forberede dyret. Skær musens hovedbund cirka en centimeter langs midterlinjen på højre pande med oftalmisk saks. Indstil stereotaksapparatet for at sikre, at sildebensømmen og det forreste fontanellepunkt er placeret på samme niveau.
Brug en vatpind dyppet i genisk violet til at markere et punkt på en millimeter foran, 1,8 millimeter til højre og tre millimeter ned fra den forreste fontanelle. Bor punktet ved hjælp af en minikranial boremaskine med en millimeter diameter. Opret en pore på cirka en millimeter i diameter og en millimeter i dybden.
Fjern den udstrålede cerebrale spinalvæske med en steril vatpind. Derefter aspireres fem mikroliter tumorcellesuspension med en mikrosprøjte. Juster kanylespidsen på mikrosprøjten lodret med kranieborehullet, og indsæt, indtil nålespidsen kommer ind i kranieplanet i tre millimeter.
Træk derefter nålen tilbage med 0,5 millimeter. Åbn mikrosprøjten og injicer opløsningen med en hastighed på en mikroliter pr. Minut. Opbevar nålen i 10 minutter efter injektionen.
Træk derefter langsomt mikrosprøjten ud, og tryk på injektionsstedet med en steril, tør vatrondel. Sutur hovedbunden med en ikke-absorberbar 10-0 kirurgisk sutur og desinficer snittet. Overvåg dyrets helbred og hold det under varme forhold.
Når musen vågner op, skal du flytte den tilbage til husburet. 10 dage efter tumorbæring, detektere den transplanterede tumor. Til dette skal du injicere musen intraperitonealt med kaliumfluorescein, og 11 sekunder senere skal du afbilde musen med et in vivo bioluminescerende billeddannelsessystem.
Adskil hovedbundens væv og kraniet, og kontroller borehullet, der bruges til at opbygge den ortopiske intrakranielle GBM-model. Hvis hullet er helet, skal du identificere hullet ved hjælp af stereotaktisk apparat og bore hullet som vist før. Udvid hele diameteren til fem millimeter med en kraniebor og fjern den udstrålede cerebrale spinalvæske med en steril vatpind.
Fokuser mikroskopet på musens hoved og juster indstillingerne for at sikre, at borehullet er placeret i midten af synsfeltet. Klip meninges med mikrosaks. Fjern derefter en del af tumorvævet med en mikrocurette og mikroskalpel under mikroskopet.
Stop blødningen med sterilt gasbind og vask injektionen med steril fysiologisk saltvand. Brug en milliliter sprøjte til at injicere 10 mikroliter af den kommercielt tilgængelige hydrogel i resektionshulrummet. Ved hjælp af denne protokol blev GBM-cellerne implanteret i musenes hjerne, og tumorvæksten blev testet ved in vivo bioluminescerende billeddannelse på dag 10.
Resektion og hydrogelinjektion blev udført på dag 11. Størrelsen af tumorerne i GBM tilbagefald efter resektionsmodellen var signifikant mindre end dem i den ortopiske intrakranielle GBM-model. Overvågning af den resterende tumorvækst på dag 25 viste gentagelse af tumorer.
H&E-farvningen bekræftede, at GBM-tilbagefald efter resektionsmodellen blev konstrueret med succes, og at resterende tumorer signifikant gentog sig efter resektionen. Det vigtigste at huske i denne procedure er at skære meninges og fjerne en del af tumorvævet under mikroskopet.