Tumorrecidief is een belangrijke oorzaak van regimefalen van chirurgische resectie van GBM. Ons protocol biedt een uniek GBM-recidiefmodel voor effectieve lokale behandelingsstudies van terugval, post-onderzoek. Deze techniek biedt een handige en haalbare methode om het GBM-terugvalpost-resectiemodel te construeren en kan worden gebruikt in verschillende onderzoeken naar GBM-terugval.
Begin met het voorbereiden van het dier. Knip de hoofdhuid van de muis ongeveer een centimeter langs de middellijn op het rechter voorhoofd met een oogheelkundige schaar. Stem het stereotaxische apparaat af om ervoor te zorgen dat de visgraatnaad en het voorste fontanelpunt zich op hetzelfde niveau bevinden.
Gebruik een wattenstaafje gedrenkt in geniaal violet en markeer een punt op één millimeter naar voren, 1,8 millimeter naar rechts en drie millimeter naar beneden vanaf de voorste fontanel. Boor de punt met een mini-schedelboor met een diameter van één millimeter. Maak een porie van ongeveer een millimeter in diameter en een millimeter diep.
Verwijder het uitgestoten hersenvocht met een steriel wattenstaafje. Zuig vervolgens vijf microliter tumorcelsuspensie op met een microspuit. Lijn de naaldpunt van de microsyring verticaal uit met het schedelboorgat en breng in totdat de naaldpunt drie millimeter in het schedelvlak komt.
Trek vervolgens de naald 0,5 millimeter in. Open de microspuit en injecteer de oplossing met een snelheid van één microliter per minuut. Houd de naald 10 minuten na injectie vast.
Trek vervolgens de microspuit langzaam terug en druk met een steriel, droog watje op het injectiepunt. Hecht de hoofdhuid met een niet-absorbeerbare 10-0 chirurgische hechting en desinfecteer de incisie. Controleer de gezondheid van het dier en houd het in warme omstandigheden.
Nadat de muis wakker is geworden, verplaatst u deze terug naar de behuizingskooi. 10 dagen na het dragen van de tumor, detecteer de getransplanteerde tumor. Injecteer hiervoor de muis intraperitoneaal met kaliumfluoresceïne en 11 seconden later beeldt u de muis af met een in vivo bioluminescent beeldvormingssysteem.
Scheid het hoofdhuidweefsel en de schedel en controleer het boorgat dat is gebruikt om het orthotopische intracraniële GBM-model te bouwen. Als het gat is genezen, identificeert u het gat met behulp van stereotactische apparatuur en boort u het gat zoals eerder getoond. Breid de hele diameter uit tot vijf millimeter met een schedelboor en verwijder het uitgestoten hersenvocht met een steriel wattenstaafje.
Richt de microscoop op de kop van de muis en pas de instellingen aan om ervoor te zorgen dat het boorgat zich in het midden van het gezichtsveld bevindt. Knip de hersenvliezen af met een microschaar. Verwijder vervolgens een deel van het tumorweefsel met een microcurette en microscalpel onder de microscoop.
Stop het bloeden met steriel gaas en was de injectie met steriele fysiologische zoutoplossing. Injecteer met een spuit van één milliliter 10 microliter van de in de handel verkrijgbare hydrogel in de resectieholte. Met behulp van dit protocol werden de GBM-cellen geïmplanteerd in de hersenen van de muizen en de tumorgroei werd getest door in vivo bioluminescente beeldvorming op dag 10.
De resectie en hydrogelinjectie werden uitgevoerd op dag 11. De grootte van de tumoren in het GBM-recidiefpost-resectiemodel was significant kleiner dan die in het orthotopische intracraniële GBM-model. Monitoring van de resterende tumorgroei op dag 25 toonde de herhaling van tumoren.
De H&E-kleuring bevestigde dat het GBM-recidiefpost-resectiemodel met succes was geconstrueerd en dat resterende tumoren significant terugkeerden na de resectie. Het belangrijkste om te onthouden bij deze procedure is om de hersenvliezen te snijden en een deel van het tumorweefsel onder de microscoop te verwijderen.