ट्यूमर पुनरावृत्ति जीबीएम के सर्जिकल रिसेक्शन की आहार विफलता का एक प्रमुख कारण है। हमारा प्रोटोकॉल रिलैप्स, पोस्ट-रिसर्च के प्रभावी स्थानीय उपचार अध्ययनों के लिए एक अद्वितीय जीबीएम पुनरावृत्ति मॉडल प्रदान करता है। यह तकनीक जीबीएम रिलैप्स पोस्ट-रिसेक्शन मॉडल के निर्माण के लिए एक सुविधाजनक और व्यवहार्य विधि प्रदान करती है, और इसका उपयोग जीबीएम रिलैप्स पर विभिन्न अध्ययनों में किया जा सकता है।
जानवर तैयार करके शुरू करें। नेत्र कैंची से दाहिने माथे पर मध्य रेखा के साथ माउस की खोपड़ी को लगभग एक सेंटीमीटर काट लें। यह सुनिश्चित करने के लिए स्टीरियोटैक्सिक उपकरण को ट्यून करें कि हेरिंगबोन सीम और फ्रंट फोंटेनेल बिंदु एक ही स्तर पर स्थित हैं।
जेनियन वायलेट में डूबे हुए कॉटन स्वैब का उपयोग करके, सामने की ओर एक मिलीमीटर, दाईं ओर 1.8 मिलीमीटर और सामने के फोंटनेल से तीन मिलीमीटर नीचे एक बिंदु चिह्नित करें। एक मिलीमीटर व्यास के मिनी-क्रैनियल ड्रिल का उपयोग करके बिंदु को ड्रिल करें। व्यास में लगभग एक मिलीमीटर और गहराई में एक मिलीमीटर का छिद्र बनाएं।
एक बाँझ कपास के फाहे के साथ बाहर निकले सेरेब्रल स्पाइनल तरल पदार्थ को हटा दें। इसके बाद, एक माइक्रोसिरिंज के साथ ट्यूमर सेल निलंबन के पांच माइक्रोलीटर को एस्पिरेट करें। माइक्रोसिरिंज की सुई की नोक को खोपड़ी ड्रिलिंग छेद के साथ लंबवत रूप से संरेखित करें और तब तक डालें जब तक कि सुई की नोक तीन मिलीमीटर के लिए खोपड़ी के विमान में प्रवेश न कर जाए।
फिर, सुई को 0.5 मिलीमीटर से पीछे हटा दें। माइक्रोसिरिंज खोलें और घोल को एक माइक्रोलीटर प्रति मिनट की गति से इंजेक्ट करें। इंजेक्शन के बाद सुई को 10 मिनट तक रखें।
फिर, माइक्रोसिरिंज को धीरे-धीरे वापस लें और इंजेक्शन बिंदु को बाँझ, सूखी कपास की गेंद से दबाएं। खोपड़ी को एक गैर-अवशोषित 10-0 सर्जिकल सीवन के साथ सीवन करें और चीरे को कीटाणुरहित करें। जानवर के स्वास्थ्य की निगरानी करें और इसे गर्म परिस्थितियों में रखें।
माउस जागने के बाद, इसे वापस आवास पिंजरे में ले जाएं। ट्यूमर असर के 10 दिन बाद, प्रत्यारोपित ट्यूमर का पता लगाएं। इसके लिए, पोटेशियम फ्लोरेसिन के साथ माउस इंट्रापरिटोनियल रूप से इंजेक्ट करें, और 11 सेकंड बाद, माउस को इन विवो बायोल्यूमिनेसेंट इमेजिंग सिस्टम के साथ छवि दें।
खोपड़ी के ऊतकों और खोपड़ी को अलग करें और ऑर्थोटोपिक इंट्राक्रैनील जीबीएम मॉडल बनाने के लिए उपयोग किए जाने वाले ड्रिलिंग छेद की जांच करें। यदि छेद ठीक हो गया है, तो स्टीरियोटैक्टिक उपकरण का उपयोग करके छेद की पहचान करें और छेद को ड्रिल करें जैसा कि पहले दिखाया गया है। खोपड़ी ड्रिल के साथ पूरे व्यास को पांच मिलीमीटर तक विस्तारित करें और बाँझ कपास के फाहे के साथ बाहर निकले सेरेब्रल स्पाइनल तरल पदार्थ को हटा दें।
माउस के सिर पर माइक्रोस्कोप पर ध्यान केंद्रित करें और यह सुनिश्चित करने के लिए सेटिंग्स को समायोजित करें कि ड्रिलिंग छेद दृष्टि के क्षेत्र के केंद्र में स्थित है। मेनिंगेस को माइक्रोकैंची से काट लें। फिर, माइक्रोस्कोप के नीचे एक माइक्रोक्यूरेट और माइक्रोस्केलपेल के साथ ट्यूमर ऊतक के हिस्से को हटा दें।
बाँझ धुंध के साथ रक्तस्राव को रोकें और इंजेक्शन को बाँझ शारीरिक लवण से धो लें। एक-मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करके, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हाइड्रोजेल के 10 माइक्रोलीटर को रिसेक्शन कैविटी में इंजेक्ट करें। इस प्रोटोकॉल का उपयोग करते हुए, जीबीएम कोशिकाओं को चूहों के मस्तिष्क में प्रत्यारोपित किया गया था और ट्यूमर के विकास का परीक्षण 10 वें दिन विवो बायोल्यूमिनेसेंट इमेजिंग में किया गया था।
11 वें दिन रिसेक्शन और हाइड्रोजेल इंजेक्शन किया गया था। जीबीएम रिलैप्स पोस्ट-रिसेक्शन मॉडल में ट्यूमर का आकार ऑर्थोटोपिक इंट्राक्रैनील जीबीएम मॉडल की तुलना में काफी छोटा था। 25 वें दिन अवशिष्ट ट्यूमर के विकास की निगरानी ने ट्यूमर की पुनरावृत्ति दिखाई।
एच एंड ई धुंधला होने से पुष्टि हुई कि जीबीएम रिलैप्स पोस्ट-रिसेक्शन मॉडल का सफलतापूर्वक निर्माण किया गया था और यह कि रिसेक्शन के बाद अवशिष्ट ट्यूमर काफी पुनरावृत्ति करते हैं। इस प्रक्रिया में याद रखने वाली सबसे महत्वपूर्ण बात यह है कि मेनिंगेस को काटना और माइक्रोस्कोप के तहत ट्यूमर ऊतक के हिस्से को हटाना है।