종양 재발은 GBM의 외과적 절제의 처방 실패의 주요 원인이다. 우리의 프로토콜은 연구 후 재발에 대한 효과적인 국소 치료 연구를 위한 고유한 GBM 재발 모델을 제공합니다. 이 기술은 GBM 재발 절제 후 모델을 구성하는 편리하고 실현 가능한 방법을 제공하며 GBM 재발에 대한 다양한 연구에 사용할 수 있습니다.
동물을 준비하는 것으로 시작하십시오. 안과 용 가위로 오른쪽 이마의 정중선을 따라 약 1 센티미터 정도 마우스의 두피를 자릅니다. 헤링본 솔기와 앞쪽 폰타넬 포인트가 같은 높이에 위치하도록 입체 장치를 조정하십시오.
제니안 바이올렛에 적신 면봉을 사용하여 앞쪽으로 1mm, 오른쪽으로 1.8mm, 앞쪽 천문에서 3mm 아래에 점을 표시합니다. 직경 1mm의 미니 두개골 드릴을 사용하여 포인트를 뚫습니다. 직경 약 1mm, 깊이 1mm의 기공을 만듭니다.
멸균 면봉으로 삼출 된 뇌척수액을 제거하십시오. 다음으로, 5 마이크로 리터의 종양 세포 현탁액을 미세 주사기로 흡인한다. 마이크로 주사기의 바늘 끝을 두개골 드릴링 구멍에 수직으로 맞추고 바늘 끝이 두개골 평면에 3mm 들어갈 때까지 삽입합니다.
그런 다음 바늘을 0.5mm 후퇴시킵니다. 마이크로 주사기를 열고 분당 1 마이크로 리터의 속도로 용액을 주입하십시오. 주사 후 10 분 동안 바늘을 유지하십시오.
그런 다음 미세 주사기를 천천히 빼내고 멸균된 마른 면봉으로 주입 지점을 누릅니다. 비흡수성 10-0 수술 봉합사로 두피를 봉합하고 절개 부위를 소독합니다. 동물의 건강 상태를 모니터링하고 따뜻한 상태로 유지하십시오.
마우스가 깨어난 후 하우징 케이지로 다시 옮깁니다. 종양 베어링 10 일 후, 이식 된 종양을 검출합니다. 이를 위해 플루오레세인 칼륨을 마우스에 복강 주사하고 11초 후 생체 내 생체 발광 이미징 시스템으로 마우스를 이미지화합니다.
두피 조직과 두개골을 분리하고 동소 두개내 GBM 모델을 구축하는 데 사용된 드릴링 구멍을 확인합니다. 구멍이 치유되면 정위 장치를 사용하여 구멍을 식별하고 앞과 같이 구멍을 뚫습니다. 두개골 드릴로 전체 직경을 5 밀리미터로 확장하고 멸균 면봉으로 삼출 된 뇌척수액을 제거하십시오.
현미경을 마우스 머리에 초점을 맞추고 드릴링 구멍이 시야 중앙에 위치하도록 설정을 조정합니다. 미세 가위로 수막을 자릅니다. 그런 다음 현미경으로 마이크로 큐렛과 마이크로 메스로 종양 조직의 일부를 제거하십시오.
멸균 거즈로 출혈을 멈추고 멸균 생리 식염수로 주사를 씻으십시오. 1 밀리리터 주사기를 사용하여 시중에서 판매되는 하이드로 겔 10 마이크로 리터를 절제 캐비티에 주입합니다. 이 프로토콜을 사용하여, GBM 세포를 마우스의 뇌에 이식하고, 종양 성장을 10일째에 생체내 생체발광 이미징에 의해 시험하였다.
절제술 및 하이드로겔 주사는 11일째에 시행하였다. GBM 재발 절제 후 모델의 종양 크기는 동소 두개내 GBM 모델의 종양보다 유의하게 작았습니다. 25일째에 잔류 종양 성장을 모니터링하여 종양의 재발을 나타내었다.
H&E 염색은 GBM 재발 후 절제 모델이 성공적으로 구성되었고 절제 후 잔류 종양이 유의하게 재발했음을 확인했다. 이 절차에서 기억해야 할 가장 중요한 것은 수막을 절단하고 현미경으로 종양 조직의 일부를 제거하는 것입니다.
