Tumorresidiv er en viktig årsak til regimesvikt ved kirurgisk reseksjon av GBM. Vår protokoll gir en unik GBM-tilbakefallsmodell for effektive lokale behandlingsstudier av tilbakefall, etter forskning. Denne teknikken gir en praktisk og gjennomførbar metode for å konstruere GBM-tilbakefallet etter reseksjonsmodellen, og kan brukes i ulike studier på GBM-tilbakefall.
Begynn med å forberede dyret. Klipp musens hodebunn omtrent en centimeter langs midtlinjen på høyre panne med oftalmisk saks. Still inn det stereotaktiske apparatet for å sikre at fiskebensømmen og det fremre fontanellepunktet er plassert på samme nivå.
Bruk en bomullspinne dyppet i genian fiolett, merk et punkt på en millimeter foran, 1,8 millimeter til høyre og tre millimeter ned fra den fremre fontanellen. Bor punktet ved hjelp av et minikranialbor med en millimeterdiameter. Lag en pore på omtrent en millimeter i diameter og en millimeter i dybden.
Fjern det utstrålede cerebrale spinalvæsken med en steril bomullspinne. Deretter aspirerer du fem mikroliter tumorcellesuspensjon med en mikrosprøyte. Juster nålespissen på mikrosprøyten vertikalt med skalleborehullet og sett inn til nålespissen kommer inn i skalleplanet i tre millimeter.
Trekk deretter nålen inn med 0,5 millimeter. Åpne mikrosprøyten og injiser løsningen med en hastighet på en mikroliter per minutt. Behold nålen i 10 minutter etter injeksjon.
Trekk deretter mikrosprøyten sakte ut og trykk på injeksjonspunktet med en steril, tørr bomullsdott. Sutur hodebunnen med en ikke-absorberbar 10-0 kirurgisk sutur og desinfiser snittet. Overvåk dyrets helse og hold den under varme forhold.
Når musen våkner, flytter du den tilbake til boligburet. 10 dager etter tumorlager, oppdag den transplanterte svulsten. For dette, injiser musen intraperitonealt med kaliumfluorescein, og 11 sekunder senere, avbilde musen med et in vivo bioluminescerende bildesystem.
Separer hodebunnsvev og hodeskalle og sjekk borehullet som brukes til å bygge den ortotopiske intrakranielle GBM-modellen. Hvis hullet har helbredet, identifiser hullet ved hjelp av stereotaktisk apparat og bor hullet som vist før. Utvid hele diameteren til fem millimeter med en skallebor og fjern det utstrålede cerebrale spinalvæsken med en steril bomullspinne.
Fokuser mikroskopet på musens hode og juster innstillingene for å sikre at borehullet ligger i midten av synsfeltet. Klipp meningene med mikrosaks. Fjern deretter en del av tumorvevet med en mikrocurette og mikroskalpell under mikroskopet.
Stopp blødningen med sterilt gasbind og vask injeksjonen med sterilt fysiologisk saltvann. Bruk en milliliter sprøyte til å injisere 10 mikroliter av den kommersielt tilgjengelige hydrogelen i reseksjonshulen. Ved hjelp av denne protokollen ble GBM-cellene implantert i hjernen til musene, og tumorveksten ble testet ved in vivo bioluminescerende avbildning på dag 10.
Reseksjon og hydrogelinjeksjon ble utført dag 11. Størrelsen på svulstene i GBM-modellen for tilbakefall etter reseksjon var signifikant mindre enn i den ortotopiske intrakraniale GBM-modellen. Overvåking av resttumorvekst dag 25 viste residiv av svulster.
H&E-fargingen bekreftet at GBM-modellen for tilbakefall etter reseksjon var vellykket konstruert, og at restsvulster i betydelig grad kom tilbake etter reseksjonen. Det viktigste å huske i denne prosedyren er å kutte meningene og fjerne en del av tumorvevet under mikroskopet.