Tumöråterfall är en viktig orsak till regimfel vid kirurgisk resektion av GBM. Vårt protokoll ger en unik GBM-återfallsmodell för effektiva lokala behandlingsstudier av återfall, efterforskning. Denna teknik ger en bekväm och genomförbar metod för att konstruera GBM-återfallsmodellen efter resektion och kan användas i olika studier på GBM-återfall.
Börja med att förbereda djuret. Skär musens hårbotten ungefär en centimeter längs mittlinjen på höger panna med oftalmisk sax. Ställ in den stereotaxiska apparaten för att säkerställa att fiskbenssömmen och den främre fontanellpunkten ligger på samma nivå.
Använd en bomullspinne doppad i genian violett, markera en punkt på en millimeter framåt, 1,8 millimeter till höger och tre millimeter ner från den främre fontanellen. Borra punkten med en minikranial borr med en millimeter diameter. Skapa en por på cirka en millimeter i diameter och en millimeter djup.
Ta bort den utsöndrade cerebrala spinalvätskan med en steril bomullspinne. Därefter aspirera fem mikroliter tumörcellssuspension med en mikrospruta. Rikta in nålspetsen på mikrosprutan vertikalt mot skallborrhålet och sätt in tills nålspetsen kommer in i skalleplanet i tre millimeter.
Dra sedan tillbaka nålen med 0,5 millimeter. Öppna mikrosprutan och injicera lösningen med en hastighet av en mikroliter per minut. Behåll nålen i 10 minuter efter injektionen.
Dra sedan långsamt ut mikrosprutan och tryck på injektionsstället med en steril, torr bomullstuss. Suturera hårbotten med en icke-absorberbar 10-0 kirurgisk sutur och desinficera snittet. Övervaka djurets hälsa och håll det under varma förhållanden.
När musen vaknar, flytta den tillbaka till husburet. 10 dagar efter tumörlager, detektera den transplanterade tumören. För detta, injicera musen intraperitonealt med kaliumfluorescein och 11 sekunder senare, avbilda musen med ett in vivo bioluminescerande bildsystem.
Separera hårbottenvävnaden och skallen och kontrollera borrhålet som används för att bygga den ortotopiska intrakraniella GBM-modellen. Om hålet har läkt, identifiera hålet med stereotaktisk apparat och borra hålet som visas tidigare. Expandera hela diametern till fem millimeter med en skalleborr och ta bort den utsöndrade cerebrala ryggvätskan med en steril bomullspinne.
Fokusera mikroskopet på musens huvud och justera inställningarna för att säkerställa att borrhålet ligger i mitten av synfältet. Skär hjärnhinnorna med mikrosax. Ta sedan bort en del av tumörvävnaden med en mikrocurette och mikroskalpell under mikroskopet.
Stoppa blödningen med steril gasbindning och tvätta injektionen med steril fysiologisk saltlösning. Använd en milliliter spruta och injicera 10 mikroliter av den kommersiellt tillgängliga hydrogelen i resektionshålan. Med hjälp av detta protokoll implanterades GBM-cellerna i hjärnan hos mössen och tumörtillväxten testades genom in vivo bioluminescerande avbildning på dag 10.
Resektion och hydrogelinjektion utfördes på dag 11. Storleken på tumörerna i GBM-återfallsmodellen efter resektion var signifikant mindre än i den ortotopiska intrakraniella GBM-modellen. Övervakning av kvarvarande tumörtillväxt på dag 25 visade återkommande tumörer.
H&E-färgningen bekräftade att GBM-återfallsmodellen efter resektion konstruerades framgångsrikt och att kvarvarande tumörer återkom signifikant efter resektionen. Det viktigaste att komma ihåg i denna procedur är att skära hjärnhinnorna och ta bort en del av tumörvävnaden under mikroskopet.