중심성 탯줄 증후군의 동물 모델은 이후 전임상 연구에 도움이 될 수 있습니다. 이 연구의 전략은 일관된 결과를 도출하여 부상 메커니즘을 조사할 수 있다는 점에서 유리합니다. 마우스에서 중심 탯줄 증후군을 시뮬레이션하는 현재 프로토콜은 반복성을 개선하고 실험 동물에 대한 작동 손상을 최소화했습니다.
해부학적 구조의 파괴를 피합니다. 수술 기구와 척수 손상 동축 플랫폼을 구성하는 것으로 시작합니다. 쥐가 적절하게 마취되면 동물의 목 뒤에 있는 정중선을 따라 작은 돌출부, 즉 두 번째 흉추(T2)의 가시 돌기를 식별합니다. 목 뒤의 T2 가시돌기 주변의 털을 면도하고 Iota 4 용액과 75% 에탄올을 번갈아 3회 번갈아 사용하여 피부를 소독합니다.
그런 다음 마우스를 수술대의 엎드린 위치에 놓습니다. 눈을 보호하기 위해 눈 연고를 바르십시오. 동물의 가슴 아래에 3-4mm 두께의 패드를 배치하여 경추 곡선의 아치형을 용이하게 하여 층간 공간이 노출되고 수술 중 방해받지 않는 공기 통로가 가능합니다.
그런 다음 현미경으로 작업하면서 메스를 사용하여 T2 가시돌기를 중심으로 1∼1.5cm의 세로로 절개하고 근막층을 노출시킵니다. 마이크로 가위를 사용하여 T2 위의 지방 조직 일부를 제거하여 T2 가시 돌기를 명확하게 노출시킵니다. 마이크로 가위를 사용하여 정중선을 따라 양측 승모근과 능형근을 C5에서 T2로 분리합니다.
그런 다음 C5 척추뼈에서 T2 척추뼈의 얇은 판에 있는 근육을 분리하고 마이크로 견인기를 사용하여 근육층을 측면으로 수축시킵니다. 척추 표면에 있는 다열근과 경추 척추 근육을 자릅니다. 가시돌기의 가장 높은 지점을 식별하여 T2 척추를 찾습니다.
그런 다음 여섯 번째 경추 또는 C6이 위치할 때까지 T2에서 연속적으로 가시 돌기를 계속 조사합니다. 집게를 사용하여 C6 라미나를 들어 올려 척수를 노출시킨 후 라미나를 잘라냅니다. 척추 안정 장치로 C6 - C7 패싯 조인트를 고정하고 잠급니다.
웨이트 팁을 노출된 척수에 맞추고 팁의 바닥이 척수의 등쪽 표면과 평행이 되도록 합니다. 체중이 척수를 압박하도록 소매를 조정합니다. 체중이 척수와 일정한 상대적 위치를 유지하면 조정을 중지합니다.
5분 동안 압축한 후 추와 척추 안정 장치를 제거합니다. 현미경으로 압박으로 인한 척수의 색상 변화를 관찰합니다. 멸균 인산염 완충 식염수를 사용하여 수술 부위를 헹굽니다.
그런 다음 흡입을 사용하여 해당 부위를 청소하십시오. 폴리프로필렌 비흡수성 6-0 봉합사를 사용하여 근육과 피부를 층층으로 봉합합니다. 수술 부위를 소독한 후 마우스가 완전히 의식을 회복할 때까지 따뜻한 패드에 올려 놓고 케이지로 되돌립니다.
척수 시상부의 헤마톡실린(hematoxylin)과 에오신(eosin) 또는 H&E 염색은 회백질에서 손상된 부위가 경증 손상 그룹보다 중증 손상 그룹에서 더 넓다는 것을 시사했다. 관상동맥 HE 절편은 두 그룹 모두에서 병변이 주로 회백질에 존재한다는 것을 보여주었다. 중증 그룹에서는 회백질을 둘러싼 백질의 구조가 더 큰 영향을 받았지만 윤곽은 여전히 유지되었습니다.
면역형광 염색 결과, 중증군에서 회백질을 둘러싼 백질이 영향을 받았지만 여전히 비교적 온전한 것으로 나타났다. 경증 또는 중증 그룹의 부상 후 7일째에 시상 HE 절편에서 적혈구가 발견되지 않았습니다. 프러시안 블루 염색은 중증 그룹에서만 혈구증을 나타냈다.
면역형광 검사는 경증 및 중증 손상 모두에서 GFAP 및 Iba1 발현이 증가한 부위를 밝혀냈으며, 이는 염증 반응과 신경교 흉터의 형성을 시사합니다. 또한, 중증군은 경증군보다 더 큰 병변 면적을 보였다. 자기공명영상(MRI)은 두 그룹 모두 병변에 저강도 신호 변화가 있었고 신호 윤곽이 높았다는 것을 시사했습니다.
중증 그룹은 현저하게 더 큰 저강도 신호 영역을 보여주었습니다. 라미나 앞뒤의 연조직을 가능한 한 많이 제거하면 라미나 이완이 촉진되고 평행 절단 시 스팬 절단이 손상되는 것으로 입증되었습니다. 현재 프로토콜 위상 볼륨은 중앙 코드 증후군을 모델링하고 신호에 대한 추가 이해 및 탐색을 가능하게 합니다.
