Modelos animais de síndrome da medula central poderiam subsequentemente beneficiar a pesquisa pré-clínica. A estratégia deste estudo é vantajosa, pois possibilita a investigação dos mecanismos de lesão ao produzir resultados consistentes. O presente protocolo de simulação da síndrome medular central em camundongos melhorou a repetibilidade e minimizou os danos operacionais aos animais de experimentação.
Evitando ruptura de sua estrutura anatômica. Comece organizando os instrumentos cirúrgicos e a plataforma coaxial da lesão medular. Uma vez que o camundongo esteja devidamente anestesiado, identifique a pequena protrusão ao longo da linha média atrás do pescoço do animal, que é o processo espinhoso da segunda vértebra torácica, ou T2. Raspar o cabelo ao redor do processo espinhoso T2 atrás do pescoço e desinfetar a pele com três rodadas alternadas de solução de Iota 4 e etanol 75%.
Em seguida, coloque o mouse em decúbito ventral na mesa de operação. Aplique uma pomada ocular para proteger os olhos. Posicionar um coxim de 3 a 4 milímetros de espessura abaixo do tórax do animal para facilitar o arqueamento da curvatura da coluna cervical, o que permite a exposição do espaço interlaminar e também uma passagem de ar desimpedida durante a cirurgia.
Em seguida, ao trabalhar ao microscópio, use um bisturi para fazer uma incisão longitudinal de 1 a 1,5 centímetro centrada no processo espinhoso de T2 e expor a camada fascial. Com a ajuda de micro tesouras, remova uma porção do tecido adiposo acima de T2 para expor o processo espinhoso de T2 claramente. Com a microtesoura, separar os músculos trapézio bilateral e romboide de C5 a T2 ao longo da linha média.
Em seguida, separe os músculos da lâmina das vértebras de C5 a T2 e use micro afastadores para retrair a camada muscular para os lados. Cortar os multífidos e músculos da coluna cervical presentes na superfície das vértebras. Localize a vértebra T2 identificando o ponto mais alto dos processos espinhosos.
Em seguida, continuar a sondar os processos espinhosos sucessivamente a partir de T2, movendo-se em direção à extremidade rostral, até que a sexta vértebra cervical ou C6 esteja localizada. Usando pinças, levante a lâmina C6 para expor a medula espinhal antes de cortá-la. Aperte as facetas articulares de C6 a C7 com o estabilizador vertebral e bloqueie-o.
Alinhe a ponta de peso com a medula espinhal exposta, garantindo que a parte inferior da ponta esteja paralela à superfície dorsal da medula espinhal. Ajuste a manga para deixar o peso comprimir a medula espinhal. Pare de ajustar quando o peso mantém uma posição relativa constante com a medula espinhal.
Retirar o peso e o estabilizador vertebral após cinco minutos de compressão. Sob o microscópio, observe quaisquer alterações de cor na medula espinhal resultantes da compressão. Enxágue o local da operação com solução salina tamponada com fosfato estéril.
Em seguida, use sucção para limpar a área. Sutura dos músculos e da pele por planos com fio de polipropileno inabsorvível 6-0. Depois de desinfetar a área cirúrgica, coloque o rato numa almofada quente até recuperar a plena consciência antes de o devolver à sua gaiola.
A coloração hematoxilina e eosina ou H&E do corte sagital da medula espinhal sugeriu que a área lesada na substância cinzenta era mais larga no grupo lesão grave do que no grupo lesão leve. Os cortes coronais de HE mostraram que, em ambos os grupos, a lesão existia principalmente na substância cinzenta. No grupo severo, embora a estrutura da substância branca ao redor da substância cinzenta tenha sido mais impactada, seu contorno ainda foi mantido.
A coloração por imunofluorescência também revelou que, embora a substância branca ao redor da substância cinzenta tenha sido afetada no grupo grave, ela ainda estava relativamente intacta. Não foram encontradas hemácias nos cortes sagitais de HE sete dias após a lesão, tanto no grupo leve quanto no grave. A coloração azul da Prússia revelou hemossiderose apenas no grupo grave.
A imunofluorescência revelou áreas de expressão elevada de GFAP e Iba1 tanto na lesão leve quanto na grave, sugerindo resposta inflamatória e formação de cicatriz glial. Além disso, o grupo grave apresentou maior área de lesão do que o grupo leve. A ressonância magnética sugeriu que, em ambos os grupos, havia uma alteração de sinal hipointensa na lesão com alto sinal.
O grupo grave apresentou área de sinal hipointenso significativamente maior. Remover os tecidos moles na frente e atrás da lâmina tanto quanto possível facilita o relaxamento da lâmina e danos comprovados ao corte de vão ao cortar paralelamente. O presente protocolo modela a síndrome do volume de fase da medula central e permite maior compreensão e exploração do sinal.
