Djurmodeller av centralt navelsträngssyndrom kan senare vara till nytta för preklinisk forskning. Strategin i denna studie är fördelaktig eftersom den har möjliggjort undersökning av skademekanismer genom att producera konsekventa resultat. Det nuvarande protokollet för simulering av central navelsträngssyndrom hos möss har förbättrat repeterbarheten och minimerat operativa skador på försöksdjur.
Undvika störningar i deras anatomiska struktur. Börja med att organisera de kirurgiska instrumenten och ryggmärgsskadans koaxiala plattform. När musen är ordentligt bedövad identifierar du den lilla utbuktningen längs mittlinjen bakom djurets nacke, vilket är ryggradsprocessen i den andra bröstkotan, eller T2. Raka håret som omger T2-taggen bakom nacken och desinficera huden med tre omväxlande omgångar av Iota 4-lösning och 75 % etanol.
Placera sedan musen i bukläge på operationsbordet. Applicera en ögonsalva för att skydda ögonen. Placera en 3 till 4 millimeter tjock dyna under djurets bröstkorg för att underlätta böjningen av halsryggradens kurva, vilket möjliggör exponering av det interlaminära utrymmet och även en obehindrad luftpassage under operationen.
Därefter, medan du arbetar under ett mikroskop, använd en skalpell för att göra ett 1 till 1,5 centimeter längsgående snitt centrerat på T2-ryggradsprocessen och exponera fasciaskiktet. Ta bort en del av fettvävnaden ovanför T2 med hjälp av en mikrosax för att tydligt exponera T2-ryggraden. Använd mikrosaxen för att separera de bilaterala trapezius- och romboidmusklerna från C5 till T2 längs mittlinjen.
Separera sedan musklerna på lamina på C5 till T2-kotorna och använd mikroretraktorer för att dra tillbaka muskellagret åt sidorna. Skär av multifidus och cervikala ryggradsmuskler som finns på ytan av kotorna. Lokalisera T2-kotan genom att identifiera den högsta punkten i ryggradsutskotten.
Fortsätt sedan att undersöka de spinösa utskotten successivt från T2, mot den rostrala änden, tills den sjätte halskotan eller C6 är lokaliserad. Använd en pincett och lyft C6-lamina för att exponera ryggmärgen innan du skär av laminan. Kläm fast facettlederna C6 till C7 med ryggradsstabilisatorn och lås den.
Rikta in viktspetsen med den exponerade ryggmärgen och se till att spetsens botten är parallell med ryggmärgens dorsala yta. Justera hylsan så att vikten komprimerar ryggmärgen. Sluta justera när vikten bibehåller en konstant relativ position med ryggmärgen.
Ta bort vikten och ryggradsstabilisatorn efter att ha tillåtit en fem minuters kompression. Observera eventuella färgförändringar i ryggmärgen till följd av kompressionen under mikroskopet. Skölj operationsstället med steril fosfatbuffrad koksaltlösning.
Använd sedan sug för att rengöra området. Suturera muskler och hud i lager med en icke-absorberbar 6-0-sutur av polypropen. Efter att ha desinficerat operationsområdet, placera musen på en varm dyna tills den återfår fullt medvetande innan du sätter tillbaka den i buren.
Hematoxylin- och eosin- eller H&E-färgningen av ryggmärgens sagittala sektion tydde på att området som skadats i den grå substansen var bredare i gruppen med allvarliga skador än i gruppen med lindriga skador. Korona-HE-snitten visade att i båda grupperna fanns lesionen huvudsakligen i grå substans. I den svåra gruppen, även om strukturen hos den vita substansen som omger den grå substansen påverkades mer, bibehölls dess kontur fortfarande.
Immunofluorescensfärgning avslöjade också att även om den vita substansen som omger grå substans påverkades i den svåra gruppen, var den fortfarande relativt intakt. Inga röda blodkroppar hittades i sagittala HE-snitt sju dagar efter skadan i vare sig den milda eller den svåra gruppen. Den preussiska blåfärgningen avslöjade hemosideros endast i den svåra gruppen.
Immunofluorescens avslöjade områden med förhöjt GFAP- och Iba1-uttryck vid både mild och svår skada, vilket tyder på en inflammatorisk respons och bildning av ett gliaärr. Den svåra gruppen uppvisade också ett större lesionsområde än den milda gruppen. Magnetisk resonanstomografi tydde på att det i båda grupperna fanns en hypointensiv signalförändring i lesionen med en hög signalkontur.
Den svåra gruppen uppvisade ett signifikant större hypointensivt signalområde. Att ta bort de mjuka vävnaderna framför och bakom lamellen så mycket som möjligt underlättar lamellavslappning och bevisad skada på spännvidden vid parallell skärning. Det nuvarande protokollets fasvolym modellerar centralt navelsträngssyndrom och möjliggör ytterligare förståelse och utforskning av signalen.