Name: eyestalk ablation to increase ovarian maturation in mud crabs
Uploaded: 2023-03-31T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs at JoVE.com

这项研究得到了马来西亚教育部的支持，在马来西亚高等院校卓越中心（HICoE）计划下，获得了马来西亚登嘉楼大学热带水产养殖和渔业研究所的认可（Vot No. 63933和Vot No. 56048）。我们感谢马来西亚登嘉楼大学和Sayap Jaya私人有限公司通过私人伙伴关系研究基金（Vot.No. 55377） 提供 的支持。马来西亚理科大学到Khor Waiho和Hanafiah Fazhan的兼职学术研究员职位也得到了认可。

该协议遵循马来西亚实验动物科学协会概述的马来西亚科学用途护理和使用动物行为守则。实验样品的牺牲是根据美国国立卫生研究院实验动物护理和使用指南（NIH出版物第8023号，1978年修订）进行的。性早熟雌性泥蟹（橙泥蟹 S. olivacea）是从马来西亚Setiu湿地的当地市场（5°66′62′′N，102°72′33′′E）收集的。根据形态特征鉴定泥蟹种类1.
1. ?...

该方案是为泥蟹 Scylla spp .的眼柄消融而开发的，可以作为诱导性腺成熟的有效方法。该方案可以很容易地复制用于泥蟹的商业卵巢成熟，并且可以实施以减少泥蟹种子生产中的潜伏期（从一个产卵到另一个产卵的时间）。
甲壳类动物（即淡水虾、海虾）的眼柄消融通常是为了诱导性腺成熟和反季节产卵11，12，<sup cla...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65039">Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs</a>. The Introduction, Protocol, Discussion and References were&#160;updated.

Erratum: Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

属于Scylla属的所有四种泥蟹物种都是水产养殖中具有重要商业价值的甲壳类物种1，2。甲壳类动物（包括泥蟹）的生长及其从早熟（亚成体或青春期）阶段到性成熟（成年）阶段的转变是通过蜕皮过程发生的，该过程涉及较老和较小的外骨骼的周期性脱落。甲壳宽度 （CW）、螯部和腹部瓣形态被广泛用于确定镰刀属的性成熟度。3，4，5.蜕皮过程受各种激素的作用调节，需要大量的能量6。除了正常的蜕皮过程外，肢体的丧失，无论是自愿的还是由外部因素引起的，都会加速螃蟹的蜕皮，而不会影响它们的存活率7，8，9。因此，肢体自体切开术常用于软壳泥蟹养殖业的蜕皮诱导7，9。
单侧或双侧眼柄消融术在淡水虾和海虾中最为流行，用于性腺成熟和苗种生产10，11，12，13。甲壳类动物中常见的眼柄消融技术包括：（i）使用绳子14，15在眼柄底部结扎;（ii）使用热镊子或电灼装置烧灼眼柄16;（iii） 去除或直接捏住眼柄以留下开放性伤口12;（iv）用剃刀切开眼睛的远端部分后，通过切口去除眼柄内容物17.眼柄X器官是甲壳类动物中重要的内分泌器官，因为它们调节甲壳类动物的高血糖激素（CHH），蜕皮抑制激素（MIH）和玻璃体生成抑制激素（VIH）6，18，19，20，21，22。眼柄X器官（或窦腺复合物）合成并释放性腺抑制激素（GIH），也称为玻璃体生成抑制激素（VIH），属于神经肽激素家族6。单侧或双侧眼柄消融术可减少GIH合成，导致刺激激素（即促性腺激素，GSH）占主导地位，并加速甲壳类动物卵巢成熟过程23，24，25，26。没有眼柄消融后GIH的影响，雌性甲壳类动物将精力用于卵巢发育27。已经发现，单侧眼柄消融足以诱导甲壳类动物卵巢成熟11，虾和蟹的消融眼柄在几次蜕皮后可以再生28。Scylla spp.记录了四个卵巢发育阶段：i）未成熟（阶段-1），ii）早熟（阶段-2），iii）早熟（阶段-3）和iv）完全成熟（阶段-4）29，30。未成熟的卵巢阶段见于未成熟的女性。在青春期蜕皮和交配后，未成熟的卵巢开始发育并最终成熟（第 4 阶段），然后产卵31。
眼柄消融方案对于泥蟹亲鱼的发育和苗种生产至关重要。在全球食品市场中，具有完全成熟卵巢（第4阶段）的成熟泥蟹而不是肌肉含量较高的螃蟹受到消费者的青睐，因此具有更高的商业价值，甚至高于大型雄性。泥蟹的眼柄消融没有完整的方案。这项工作中的眼柄消融方案通过使用完全麻醉的螃蟹来最大限度地减少压力，并最大限度地减少螃蟹咬伤对人员的身体伤害。该协议简单且具有成本效益。在这里，我们提出了一种可以诱导性腺成熟的 Scylla spp .眼柄消融方案。测试了两种眼柄消融技术（烧灼和手术），并根据雌性泥蟹的性腺发育速度比较了它们的效率。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aeration tube&#160;</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airstone</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave machine</td>
			<td>HIRAYAMA MANUFACTURING CORPORATION</td>
			<td>N/A</td>
			<td>MADE IN JAPAN</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleaching powder (Hi-Chlon 70%)</td>
			<td>Nippon Soda Co.Ltd,Japan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blow torch&#160;</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circular tank (32L)</td>
			<td>BEST PLASTIC INDUSTRY SDN. BHD.&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton hand gloves (thick)&#160;</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton towel</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital thermometer</td>
			<td>Hanna Instrument</td>
			<td>HI9814</td>
			<td>Hanna&#160;Instruments&#160;GroLine Hydroponics Waterproof pH / EC / TDS / Temp. Portable Meter HI9814</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Vernier Caliper</td>
			<td>INSIZE Co., Ltd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting tray</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dropper bottle/Plastic Pipettes Dropper</td>
			<td>Shopee Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>Thermo Scientific Chemicals</td>
			<td>033361.M1</td>
			<td>Diluted to 70% using double distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiberglass tank (1 ton)</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine sand</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>collected from Sea beach of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>First Aid Kits</td>
			<td>Watsons Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat head nickel steel metal rod (Screw driver)</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Thermo Scientific Chemicals</td>
			<td>119690010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas cylinder (butane gas) for blow&#160; torch</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas lighter gun (long head)</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass beaker (100 mL))</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td>1000-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice bag&#160;</td>
			<td>Watsons Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perforated plastic baskets&#160;</td>
			<td>Eco-Shop Marketing Sdn. Bhd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVC pipe 15mm</td>
			<td>Bina Plastic Industries Sdn Bhd (HQ)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refractometer</td>
			<td>ATAGO CO.,LTD.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>Sharp Corporation Japan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Chest Freezer SHARP 110L - SJC 118</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scoop net</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td></td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seawater</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Siphoning pipe</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spray bottle</td>
			<td>Mr. DIY Sdn Bhd</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless surgical forceps&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless surgical scissors&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Submersible water pump&#160;</td>
			<td>AS</td>
			<td>N/A</td>
			<td>model: Astro 4000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tincture of iodine solution&#160; (Povidone Iodine)</td>
			<td>Farmasi Fajr Sdn Bhd</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue paper&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transparent plastic aquarium</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waterproof table</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

eyestalk ablation to increase ovarian maturation in mud crabs

泥蟹（Scylla spp.）是具有重要商业价值的甲壳类动物，遍布印度-西太平洋地区。在养殖过程中，诱导卵巢成熟对于满足消费者对成熟泥蟹的需求和加速种子生产非常重要。眼柄消融术是促进泥蟹卵巢成熟的有效工具。然而，泥蟹的眼柄消融没有标准方案。在这项研究中，描述了两种眼柄消融技术：烧灼（使用热金属消融麻醉蟹的眼柄）和手术（使用手术剪刀去除眼柄）。在眼柄消融术之前，性成熟的雌性（CW > 86 mm）使用装有海水的冰袋（-20°C）麻醉。当水温达到4°C时，将冰袋从水中取出。流海水（环境温度：28°C）用于眼柄消融后立即从麻醉中恢复。在眼柄消融过程中或之后没有发生死亡。这里介绍的眼柄消融方案加速了泥蟹的卵巢成熟。

性腺成熟 在进行眼柄消融术之前，在100%的解剖女性（n = 6）中发现了乳白色的卵巢组织（未成熟的卵巢，1期）（图2）。与未进行眼柄消融的雌蟹相比，眼柄消融的雌蟹（n = 63;烧灼技术为31只雌蟹，手术技术为32只雌蟹）的性腺成熟率高于未进行眼柄消融的雌蟹（n = 31）（图3）。在眼柄消融的雌蟹中发现的早熟卵巢百分比最高（第3阶段?...

Watch this Scientific Journal Video about Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs at JoVE.com

Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

对麻醉的雌蟹进行了两种眼柄消融方案（即烧灼和 手术方法）。泥蟹的眼柄消融加速了卵巢的成熟，而不会降低存活率。

眼柄消融术可增加泥蟹卵巢成熟

Mud crabs (Scylla spp.) are commercially important crustacean species that can be found throughout the Indo-West Pacific region. During culture, the ...

所描述的方案最大限度地减少了泥蟹眼柄消融过程中的压力，从而降低了由于眼柄消融而导致的死亡率。时间效率是减少动物压力的关键。在执行该过程之前，请确保一切准备就绪。首先用氯化自来水清洗健康、活跃和早产的雌性泥蟹，以去除任何碎屑和寄生虫。将螃蟹浸泡在甲醛中30分钟。确保在甲醛处理过程中使用空气结石进行连续温和的曝气。接下来，用流动的海水清洗螃蟹，去除残留的甲醛。要对蟹眼柄进行烧灼，首先用喷灯加热金属棒的尖端，直到杆呈鲜红色。用湿棉巾盖住麻醉的螃蟹，并用消毒的镊子握住螃蟹的一只眼睛。将红色的热金属尖端按在螃蟹的眼睛上约 10 到 15 秒，直到眼柄变成橙色或红橙色。用70%乙醇消毒镊子，并用无菌薄纸清洁，以确保螃蟹之间没有交叉污染。对所有螃蟹进行消融后，将金属棒浸入自来水中。要进行手术消融，请使用厚棉手套握住麻醉的螃蟹，并用湿棉毛巾盖住它。用无菌镊子握住螃蟹的一只眼睛，并用手术剪刀迅速剪断眼柄。手术后，准备一个带有千分之20过滤海水的头顶水箱，并连续曝气。将柔性管道与水箱连接，以实现重力水流。将螃蟹放入篮子中，使其承受来自头顶水箱的流动海水。在流动的海水下监测螃蟹，直到它可以自发移动。将螃蟹单独放入另一个有海水的水族箱中30分钟，以便进一步观察。随机选择未接受眼柄消融术的新成熟雌性。去除顶部甲壳和肝胰腺后，观察并确定蟹卵巢的成熟阶段。卵巢成熟阶段可以根据其颜色进行识别，未成熟阶段一为半透明或乳白色，早熟阶段二为浅黄色，预成熟阶段三为黄色至浅橙色，完全成熟阶段四为深橙色至红色。相对于未消融的雌性，眼柄消融的雌性性腺成熟率更高。在眼柄消融的雌蟹中发现的三期卵巢百分比最高。单因素方差分析显示，实验雌蟹卵巢成熟阶段间差异显著。对照组未成熟雌蟹的患病率高于消融组。只有消融组能够在处理后30天从未成熟阶段产生第四期雌蟹。重要的是要确保泥蟹的眼柄在烧灼或手术技术后已完全消融。眼柄消融使甲壳类动物养殖者能够容易地诱导卵巢成熟和蜕皮。它还允许研究人员进一步研究眼柄在调节泥蟹繁殖中的作用。

Research

JoVE Journal

Biology

Using Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) to Develop Diagnostic Tools

Using Micro-Electro-Mechanical Systems MEMS to Develop Diagnostic Tools

使用微机电系统（MEMS）开发诊断工具

科研

生物学

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

活体成像和治疗卵巢癌的原位小鼠模型

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Laser Ablation of the Zebrafish Pronephros to Study Renal Epithelial Regeneration

激光烧蚀斑马鱼Pronephros研究肾小管上皮再生

Acute kidney injury (AKI) is characterized by high mortality rates from deterioration of renal function over a period of hours or days that culminates in ...

Mouse Oocyte Microinjection, Maturation and Ploidy Assessment

小鼠卵母细胞显微注射，成熟和倍性评估

Mistakes in chromosome segregation lead to aneuploid cells.  In somatic cells, aneuploidy is associated with cancer but in gametes, aneuploidy leads to ...

Endothelial Cell Co-culture Mediates Maturation of Human Embryonic Stem Cell to Pancreatic Insulin Producing Cells in a Directed Differentiation Approach

共培养内皮细胞介导成熟的人类胚胎干细胞向胰腺中胰岛素生成细胞在定向分化的方法

Embryonic stem cells (ESC) have two main characteristics: they can be indefinitely propagated in vitro in an undifferentiated state and they are ...

Benefits of Cardiac Resynchronization Therapy in an Asynchronous Heart Failure Model Induced by Left Bundle Branch Ablation and Rapid Pacing

心脏再同步治疗在左束分支消融和快速起搏诱发的异步心力衰竭模型中的益处

It is now well recognized that heart failure (HF) patients with left bundle branch block (LBBB) derive substantial clinical benefits from cardiac ...

Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians

两栖动物卵巢监测和控制的生殖技术

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive ...

Bovine Ovarian Cortex Tissue Culture

牛卵巢皮质组织培养

Follicle development from the primordial to antral stage is a dynamic process within the ovarian cortex, which includes endocrine and paracrine factors ...

Megakaryocyte Culture in 3D Methylcellulose-Based Hydrogel to Improve Cell Maturation and Study the Impact of Stiffness and Confinement

在3D甲基纤维素基水凝胶中培养巨核细胞，以改善细胞成熟并研究僵硬和禁闭的影响

The 3D environment leading to both confinement and mechanical constraints is increasingly recognized as an important determinant of cell behavior. 3D ...