Name: eyestalk ablation to increase ovarian maturation in mud crabs
Uploaded: 2023-03-31T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs at JoVE.com

Deze studie werd ondersteund door het ministerie van Onderwijs, Maleisië, onder het Higher Institution Centre of Excellence (HICoE) -programma, Maleisië, geaccrediteerd bij het Institute of Tropical Aquaculture and Fisheries, Universiti Malaysia Terengganu (Vot No. 63933 & Vot No. 56048). We erkennen de steun van Universiti Malaysia Terengganu en Sayap Jaya Sdn. Bhd. via de Private Partnership Research Grant (Vot. No. 55377). Een adjunct Academic Fellow-positie van Universiti Sains Malaysia naar Khor Waiho en Hanafiah Fazhan wordt ook erkend.

Dit protocol volgt de Maleisische praktijkcode voor de verzorging en het gebruik van dieren voor wetenschappelijke doeleinden, zoals uiteengezet door de Laboratory Animal Science Association of Malaysia. Het offeren van de experimentele monsters werd gedaan volgens de National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH Publications No. 8023, herzien 1978). Seksueel pre-volwassen vrouwelijke modderkrabben (oranje modderkrab S. olivacea) werden verzameld op de lokale markt (5°66′...

Dit protocol is ontwikkeld voor de oogstekelablatie van de modderkrab, Scylla spp., en kan worden toegepast als een efficiënte methode om gonaderijping te induceren. Dit protocol kan gemakkelijk worden gerepliceerd voor de commerciële eierstokrijping van modderkrabben en kan worden geïmplementeerd om de latente periode (tijd van de ene spawning naar de andere) in de productie van modderkrabzaad te verminderen.
De eyestalk ablatie van schaaldieren (d.w.z. zoetwatergarnalen, zeegarna...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65039">Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs</a>. The Introduction, Protocol, Discussion and References were&#160;updated.

Erratum: Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

Alle vier de modderkrabsoorten die tot het geslacht Scylla behoren, zijn commercieel belangrijke schaaldiersoorten in de aquacultuur 1,2. De groei van schaaldieren, waaronder modderkrabben, en hun transformatie van de pre-volwassen (sub-volwassen of puberale) fase naar de geslachtsrijpe (volwassen) fase vindt plaats door een ruiproces waarbij oudere en kleinere exoskeletten periodiek worden afgestoten. Carapaxbreedte (CW), chelipeds en abdominale flapmorfologieën worden veel gebruikt om de geslachtsrijpheid van Scylla spp te bepalen. 3,4,5. Het proces van rui wordt gereguleerd door de werking van verschillende hormonen en vereist een enorme hoeveelheid energie6. Naast het normale ruiproces versnelt het verlies van ledematen, vrijwillig of geïnduceerd door externe factoren, de rui van krabben zonder hun overlevingskans te beïnvloeden 7,8,9. Daarom wordt limb autotomie vaak gebruikt voor ruiinductie in de soft-shell modderkrabkweekindustrie 7,9.
Unilaterale of bilaterale eyestalk ablatie is vooral populair in zoetwatergarnalen en zeegarnalen voor gonadrijping en zaadproductie10,11,12,13. Veel voorkomende eyestalk ablatietechnieken bij schaaldieren omvatten het volgende: (i) ligatie aan de basis van de ogensteel met behulp van een string14,15; ii) cauterisatie van de ogensteel met behulp van een hete tang of elektrocauterie16; iii) verwijdering of direct knijpen van de ogensteel om een open wond achter te laten12; en (iv) verwijdering van de inhoud van de ogensteel door incisie na het snijden van het distale deel van het oog met een scheermes17. De eyestalk X-organen zijn belangrijke endocriene organen in schaaldieren omdat ze schaaldieren hyperglycemische hormonen (CHH), vervellingsremmende hormonen (MIH) en vitellogenese-remmende hormonen (VIH) reguleren, 6,18,19,20,21,22. Eyestalk X-organen (of het sinuskliercomplex) synthetiseren en geven gonade-remmende hormonen (GIH) af, ook bekend als vitellogenese-remmende hormonen (VIH), behorend tot de neuropeptidehormoonfamilie6. Unilaterale of bilaterale eyestalk-ablatie vermindert de GIH-synthese, wat resulteert in de dominantie van stimulerende hormonen (d.w.z. gonadestimulerende hormonen, GSH) en de versnelling van het ovariële rijpingsproces bij schaaldieren23,24,25,26. Zonder de invloed van GIH na ablatie van de ogen, besteden vrouwelijke schaaldieren hun energie aan de ontwikkeling van de eierstokken27. Het is gebleken dat eenzijdige eyestalk-ablatie voldoende is voor de inductie van ovariële rijping bij schaaldieren11 en dat de geableerde ogensteel van garnalen en krabben kan regenereren na verschillende ruien28. Er zijn vier ovariële ontwikkelingsstadia geregistreerd in Scylla spp.: i) onrijp (stadium-1), ii) vroege rijping (stadium-2), iii) pre-rijping (stadium-3) en iv) volledig volwassen (stadium-4) 29,30. Het onrijpe ovariële stadium wordt gevonden bij onvolwassen vrouwtjes. Na puberale rui en paring begint de onrijpe eierstok zich te ontwikkelen en rijpt uiteindelijk (stadium-4) voordat hij31 paait.
Een eyetalk ablatieprotocol is essentieel voor de ontwikkeling van modderkrabbroed en zaadproductie. Op de wereldwijde voedselmarkt hebben volwassen modderkrabben met volledig volwassen eierstokken (stadium-4) in plaats van krabben met een hoger spiergehalte de voorkeur van consumenten en hebben ze dus een hogere commerciële waarde, zelfs hoger dan grote mannetjes. Er is geen volledig protocol voor de oogstekalving van modderkrabben. Het eyestalk ablatieprotocol in dit werk minimaliseert stress door volledig verdoofde krabben te gebruiken en minimaliseert lichamelijk letsel aan personeel door krabbeten. Dit protocol is eenvoudig en kosteneffectief. Hier presenteren we een protocol voor de eyestalk ablatie van Scylla spp. die de rijping van de gonade kan induceren. Twee technieken van eyestalk ablatie (cauterisatie en chirurgie) werden getest en hun efficiëntie vergeleken op basis van de gonadale ontwikkelingssnelheid van vrouwelijke modderkrabben.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aeration tube&#160;</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airstone</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave machine</td>
			<td>HIRAYAMA MANUFACTURING CORPORATION</td>
			<td>N/A</td>
			<td>MADE IN JAPAN</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleaching powder (Hi-Chlon 70%)</td>
			<td>Nippon Soda Co.Ltd,Japan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blow torch&#160;</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circular tank (32L)</td>
			<td>BEST PLASTIC INDUSTRY SDN. BHD.&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton hand gloves (thick)&#160;</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton towel</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital thermometer</td>
			<td>Hanna Instrument</td>
			<td>HI9814</td>
			<td>Hanna&#160;Instruments&#160;GroLine Hydroponics Waterproof pH / EC / TDS / Temp. Portable Meter HI9814</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Vernier Caliper</td>
			<td>INSIZE Co., Ltd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting tray</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dropper bottle/Plastic Pipettes Dropper</td>
			<td>Shopee Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>Thermo Scientific Chemicals</td>
			<td>033361.M1</td>
			<td>Diluted to 70% using double distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiberglass tank (1 ton)</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine sand</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>collected from Sea beach of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>First Aid Kits</td>
			<td>Watsons Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat head nickel steel metal rod (Screw driver)</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Thermo Scientific Chemicals</td>
			<td>119690010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas cylinder (butane gas) for blow&#160; torch</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas lighter gun (long head)</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass beaker (100 mL))</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td>1000-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice bag&#160;</td>
			<td>Watsons Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perforated plastic baskets&#160;</td>
			<td>Eco-Shop Marketing Sdn. Bhd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVC pipe 15mm</td>
			<td>Bina Plastic Industries Sdn Bhd (HQ)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refractometer</td>
			<td>ATAGO CO.,LTD.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>Sharp Corporation Japan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Chest Freezer SHARP 110L - SJC 118</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scoop net</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td></td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seawater</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Siphoning pipe</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spray bottle</td>
			<td>Mr. DIY Sdn Bhd</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless surgical forceps&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless surgical scissors&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Submersible water pump&#160;</td>
			<td>AS</td>
			<td>N/A</td>
			<td>model: Astro 4000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tincture of iodine solution&#160; (Povidone Iodine)</td>
			<td>Farmasi Fajr Sdn Bhd</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue paper&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transparent plastic aquarium</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waterproof table</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

eyestalk ablation to increase ovarian maturation in mud crabs

Modderkrabben (Scylla spp.) zijn commercieel belangrijke schaaldiersoorten die in de hele Indo-West Pacific-regio te vinden zijn. Tijdens de kweek is de inductie van ovariële rijping belangrijk om aan de vraag van de consument naar volwassen modderkrabben te voldoen en de zaadproductie te versnellen. Eyestalk ablatie is een effectief hulpmiddel om de rijping van de eierstokken bij modderkrabben te verbeteren. Er is echter geen standaardprotocol voor de oogsteel-ablatie van modderkrabben. In deze studie worden twee eyestalk ablatietechnieken beschreven: cauterisatie (het gebruik van heet metaal om de ogensteel van een verdoofde krab te aborteren) en chirurgie (het verwijderen van de oogsteel met behulp van een chirurgische schaar). Vóór de ablatie van de ogen werden geslachtsrijpe vrouwtjes (CW > 86 mm) verdoofd met behulp van een ijszak (−20 °C) met zeewater. Toen de watertemperatuur 4 °C bereikte, werd de ijszak uit het water gehaald. Stromend zeewater (omgevingstemperatuur: 28 °C) werd gebruikt voor herstel van de anesthesie onmiddellijk na oogsteelablatie. Mortaliteit trad niet op tijdens of na het proces van oogsteelablatie. Het hier gepresenteerde eyetalk-ablatieprotocol versnelde de rijping van de eierstokken van de modderkrabben.

Gonade rijping Roomwitte eierstokweefsels (onrijpe eierstokken, stadium-1) werden gevonden bij 100% van de ontleedde vrouwtjes (n = 6) voordat de ogensteelablatie werd uitgevoerd (figuur 2). De gonadrijpingssnelheid van de oogsteel-ablated vrouwelijke krabben (n = 63; 31 vrouwtjes met de cauterisatietechniek en 32 vrouwtjes met de operatietechniek) was hoger in vergelijking met vrouwelijke krabben die na 30 dagen individuele opfok niet werden onderworpen aan oogsteelablat...

Watch this Scientific Journal Video about Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs at JoVE.com

Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

Twee eyestalk ablatieprotocollen (d.w.z. cauterisatie en chirurgische benaderingen) werden uitgevoerd op verdoofde vrouwelijke krabben. De oogsteblablatie van modderkrabben versnelde de rijping van eierstokken zonder de overlevingskans te verminderen.

Eyestalk ablatie om de ovariële rijping bij modderkrabben te verhogen

Mud crabs (Scylla spp.) are commercially important crustacean species that can be found throughout the Indo-West Pacific region. During culture, the ...

Het beschreven protocol minimaliseert stress tijdens oogsteelablatie van modderkrabben, waardoor de sterfte als gevolg van oogsteelablatie wordt verminderd. Tijdsefficiëntie is de sleutel tot het minimaliseren van stress voor de dieren. Zorg ervoor dat alles is voorbereid voordat u de procedure uitvoert.Begin met het wassen van de gezonde, actieve en premature vrouwelijke modderkrabben met gechloreerd kraanwater om vuil en parasieten te verwijderen. Week de krabben 30 minuten in formaldehyde. Zorg voor een continue en zachte beluchting met luchtstenen tijdens de formaldehydebehandeling.Gebruik vervolgens stromend zeewater om de krabben te wassen om eventuele resterende formaldehyde te verwijderen. Om de krabogensteel te dichtschroeien, begint u met het verwarmen van de punt van een metalen staaf met een blowtorch totdat de staaf felrood is. Bedek een verdoofde krab met een natte katoenen handdoek en houd een oog van de krab vast met een gesteriliseerde tang.Druk de roodgloeiende metalen punt ongeveer 10 tot 15 seconden op het oog van de krab totdat de ogensteel een oranje of roodachtig oranje kleur krijgt. Desinfecteer de tang met 70% ethanol en reinig ze met steriel tissuepapier om kruisbesmetting tussen krabben te voorkomen. Na het uitvoeren van ablatie op alle krabben, dompelt u de metalen staaf in leidingwater.Om chirurgische ablatie uit te voeren, houdt u de verdoofde krab vast met dikke katoenen handschoenen en bedekt u deze met een natte katoenen handdoek. Gebruik een steriele tang om één oog van de krab vast te houden en knip de ogensteel snel af met een chirurgische schaar. Bereid na de operatie een bovengrondse tank voor met 20 delen per duizend gefilterd zeewater met continue beluchting.Verbind een flexibele buis met de tank voor gravitationele waterstroom. Plaats de krab in een mand en onderwerp hem aan stromend zeewater uit de bovengrondse tank. Houd de krab in de gaten onder stromend zeewater totdat hij spontaan kan bewegen.Plaats de krabben individueel in een ander aquarium met zeewater gedurende 30 minuten voor verdere observatie. Selecteer willekeurig nieuw volwassen vrouwtjes die geen eyestalk-ablatie hebben ondergaan. Na het verwijderen van het bovenste schild en de hepatopancreas, observeer en identificeer het rijpingsstadium van de krab-eierstok.De rijpingsstadia van de eierstokken kunnen worden geïdentificeerd op basis van hun kleuring, waarbij de onrijpe fase één doorschijnend of roomwit is, de vroege rijpingsfase twee bleek tot lichtgeel, de voorrijpe fase drie geel tot lichtoranje en de volledig volwassen fase vier een donkeroranje tot roodachtige kleur heeft. De rijpingssnelheid van de gonaden was hoger bij de vrouwtjes met een oogsteel-ablated in vergelijking met degenen die niet waren geableerd. Het hoogste percentage van stadium-drie eierstokken werd gevonden in oog-ablated vrouwelijke krabben.Eenrichtingsanalyse van variantie toonde significante verschillen tussen de experimentele vrouwelijke krabbenrijpingsstadia van de eierstokken. De controlegroep had een hogere prevalentie van onvolwassen vrouwelijke krabben in vergelijking met de geableerde groepen. Alleen de geableerde groepen waren in staat om stadium-vier vrouwelijke krabben te produceren vanaf een onvolgroeid stadium 30 dagen na de behandeling.Het is belangrijk om ervoor te zorgen dat de oogsteel van modderkrab volledig is geableerd na cauterisatie of operatietechniek. Eyestalk ablatie stelt schaaldierboeren in staat om de rijping en rui van de eierstokken gemakkelijk te induceren. Het stelt onderzoekers ook in staat om de rol van eyestalk bij het reguleren van de voortplanting van modderkrabben verder te onderzoeken.

Research

JoVE Journal

Biology

Using Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) to Develop Diagnostic Tools

Using Micro-Electro-Mechanical Systems MEMS to Develop Diagnostic Tools

Met behulp van Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) voor diagnostische instrumenten te ontwikkelen

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo beeldvorming en therapeutische behandelingen in een orthotope Muis Model van eierstokkanker

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Laser Ablation of the Zebrafish Pronephros to Study Renal Epithelial Regeneration

Laser Ablatie van de zebravis Pronephros renale epitheliale regeneratie Study

Acute kidney injury (AKI) is characterized by high mortality rates from deterioration of renal function over a period of hours or days that culminates in ...

Mouse Oocyte Microinjection, Maturation and Ploidy Assessment

Eicel muis micro-injectie, rijping en ploïdie Assessment

Mistakes in chromosome segregation lead to aneuploid cells.  In somatic cells, aneuploidy is associated with cancer but in gametes, aneuploidy leads to ...

Endothelial Cell Co-culture Mediates Maturation of Human Embryonic Stem Cell to Pancreatic Insulin Producing Cells in a Directed Differentiation Approach

Endotheelcel Co-cultuur Bemiddelt Rijping van menselijke embryonale stamcellen te Pancreatic insuline producerende cellen in een Geregisseerd Differentiatie aanpak

Embryonic stem cells (ESC) have two main characteristics: they can be indefinitely propagated in vitro in an undifferentiated state and they are ...

Benefits of Cardiac Resynchronization Therapy in an Asynchronous Heart Failure Model Induced by Left Bundle Branch Ablation and Rapid Pacing

Voordelen van cardiale synchronisatieprocedure therapie in een Model van de asynchrone hartfalen geïnduceerd door links bundel tak ablatie en snelle Pacing

It is now well recognized that heart failure (HF) patients with left bundle branch block (LBBB) derive substantial clinical benefits from cardiac ...

Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians

Voortplantingstechnieken voor het monitoren en beheersen van de eierstokken in amfibieën

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive ...

Bovine Ovarian Cortex Tissue Culture

Bovine Ovarian Cortex Weefselkweek

Follicle development from the primordial to antral stage is a dynamic process within the ovarian cortex, which includes endocrine and paracrine factors ...

Megakaryocyte Culture in 3D Methylcellulose-Based Hydrogel to Improve Cell Maturation and Study the Impact of Stiffness and Confinement

Megakaryocytencultuur in 3D-hydrogel op basis van methylcellulose om de celrijping te verbeteren en de impact van stijfheid en opsluiting te bestuderen

The 3D environment leading to both confinement and mechanical constraints is increasingly recognized as an important determinant of cell behavior. 3D ...