Name: eyestalk ablation to increase ovarian maturation in mud crabs
Uploaded: 2023-03-31T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs at JoVE.com

מחקר זה נתמך על ידי משרד החינוך, מלזיה, במסגרת תוכנית מרכז המצוינות של המוסד הגבוה (HICoE), מלזיה, מוכר למכון לחקלאות ימית טרופית ודיג, אוניברסיטת מלזיה טרנגאנו (הצבעה מס '63933 והצבעה מס '56048). אנו מכירים בתמיכתם של Universiti Malaysia Terengganu ו- Sayap Jaya Sdn. Bhd. באמצעות מענק המחקר לשותפות פרטית (הצבעה מס '55377). כמו כן מוכרת משרת עמית אקדמי נספח מאוניברסיטת סאיינס מלזיה לח'ור וואיהו וחנפיה פאז'אן.

פרוטוקול זה עוקב אחר קוד העיסוק המלזי לטיפול ושימוש בבעלי חיים למטרות מדעיות שנקבע על ידי האגודה למדעי חיות מעבדה של מלזיה. הקרבת דגימות הניסוי נעשתה על פי מדריך המכונים הלאומיים לבריאות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה (פרסומי NIH מס '8023, מתוקן 1978). סרטני בוץ נקביים פגים מינית (סרטן בוץ כתום S. oliva...

פרוטוקול זה פותח עבור אבלציה של סרטן הבוץ, Scylla spp., וניתן ליישם אותו כשיטה יעילה לגרימת התבגרות הגונד. פרוטוקול זה ניתן לשכפול בקלות להבשלה מסחרית של סרטני בוץ וניתן ליישם אותו כדי להפחית את התקופה הסמויה (הזמן מהשרצה אחת לאחרת) בייצור זרעי סרטני בוץ.
אבלציה של סרטנים (כל?...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65039">Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs</a>. The Introduction, Protocol, Discussion and References were&#160;updated.

Erratum: Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

כל ארבעת מיני סרטני הבוץ השייכים לסוג Scylla הם מיני סרטנים בעלי חשיבות מסחרית בחקלאות ימית 1,2. גדילתם של סרטנים, כולל סרטני בוץ, והפיכתם משלב הפג (תת-בוגר או התבגרות מינית) לשלב הבוגר מינית (בוגר) מתרחשים בתהליך התכה הכולל נשירה תקופתית של שלד חיצוני ישן וקטן יותר. רוחב קרפצ'ה (CW), כלפידים ומורפולוגיה של דש הבטן נמצאים בשימוש נרחב כדי לקבוע את הבגרות המינית של Scylla spp. 3,4,5. תהליך ההתכה מוסדר על ידי פעולה של הורמונים שונים ודורש כמות עצומה של אנרגיה6. בנוסף לתהליך ההתכה הרגיל, אובדן הגפיים, בין אם מרצון או על ידי גורמים חיצוניים, מזרז את ההתכה של סרטנים מבלי להשפיע על שיעור ההישרדות שלהם 7,8,9. לכן, אוטוטומיה של הגפיים משמשת בדרך כלל להשראת מותך בתעשיית גידול סרטני הבוץ הרכים 7,9.
אבלציה חד צדדית או דו-צדדית פופולרית בעיקר בסרטני מים מתוקים ושרימפס ימיים להבשלת גונאד וייצור זרעים10,11,12,13. טכניקות אבלציה נפוצות בסרטנים כוללות את הדברים הבאים: (i) קשירה בבסיס העין באמצעות מחרוזת14,15; (2) צריבת העיניים באמצעות מלקחיים חמים או מכשירים חשמליים16; (3) הסרה או צביטה ישירה של העיניים כדי להשאיר פצע פתוח12; ו-(4) הסרת תוכן העיניים דרך חתך לאחר חיתוך החלק הדיסטלי של העין בתער17. איברי X הם איברים אנדוקריניים חשובים בסרטנים, שכן הם מווסתים הורמונים היפרגליקמיים סרטניים (CHH), הורמונים מעכבי מותך (MIH) והורמונים מעכבי ויטלוגנזה (VIH)6,18,19,20,21,22. איברי X של Eyestalk (או קומפלקס בלוטת הסינוס) מסנתזים ומשחררים הורמונים מעכבי גונאד (GIH), הידועים גם בשם הורמונים מעכבי ויטלוגנזה (VIH), השייכים למשפחת ההורמונים הנוירופפטידים6. אבלציה חד צדדית או דו-צדדית מפחיתה את סינתזת GIH, וכתוצאה מכך דומיננטיות של הורמונים מעוררים (כלומר, הורמונים מעוררי גונאד, GSH) והאצת תהליך ההתבגרות השחלתית בסרטנים23,24,25,26. ללא השפעת GIH לאחר אבלציה של דיבור עיניים, נקבות סרטנים מקדישות את האנרגיה שלהן להתפתחות השחלה27. נמצא כי אבלציה חד צדדית בעיניים מספיקה להשראת הבשלה שחלתית בסרטנים11 וכי העיניים האבלטיות של שרימפס וסרטנים יכולות להתחדש לאחר מספר התכות28. ישנם ארבעה שלבי התפתחות שחלות שתועדו ב- Scylla spp.: i) לא בשלים (שלב 1), ii) הבשלה מוקדמת (שלב -2), iii) טרום הבשלה (שלב -3), ו- iv) הבשלה מלאה (שלב 4)29,30. השלב השחלתי הלא בשל נמצא אצל נקבות לא בוגרות. לאחר ההתכה המינית וההזדווגות, השחלה הלא בשלה מתחילה להתפתח ולבסוף מבשילה (שלב 4) לפני ההשרצה31.
פרוטוקול אבלציה של Eyestalk חיוני להתפתחות סרטני בוץ ולייצור זרעים. בשוק המזון העולמי, סרטני בוץ בוגרים עם שחלות בשלות לחלוטין (שלב 4) על פני סרטנים עם תכולת שרירים גבוהה יותר מועדפים על ידי הצרכנים, ולכן יש להם ערך מסחרי גבוה יותר, אפילו גבוה יותר מאשר זכרים גדולים. אין פרוטוקול מלא לאבלציה של סרטני בוץ בעיניים. פרוטוקול אבלציה של דיבור עיניים בעבודה זו ממזער מתח על ידי שימוש בסרטנים מורדמים לחלוטין וממזער את הפגיעה הפיזית באנשי צוות מעקיצות סרטנים. פרוטוקול זה קל וחסכוני. כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור אבלציה עיניים של Scylla spp. שיכול לגרום להבשלה של הגונדה. נבדקו שתי טכניקות של אבלציה של דיבור עיניים (צריבה וניתוח) ויעילותן הושוותה בהתבסס על קצב התפתחות הגונדל של נקבות סרטני הבוץ.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aeration tube&#160;</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airstone</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave machine</td>
			<td>HIRAYAMA MANUFACTURING CORPORATION</td>
			<td>N/A</td>
			<td>MADE IN JAPAN</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleaching powder (Hi-Chlon 70%)</td>
			<td>Nippon Soda Co.Ltd,Japan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blow torch&#160;</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circular tank (32L)</td>
			<td>BEST PLASTIC INDUSTRY SDN. BHD.&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton hand gloves (thick)&#160;</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton towel</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital thermometer</td>
			<td>Hanna Instrument</td>
			<td>HI9814</td>
			<td>Hanna&#160;Instruments&#160;GroLine Hydroponics Waterproof pH / EC / TDS / Temp. Portable Meter HI9814</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Vernier Caliper</td>
			<td>INSIZE Co., Ltd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting tray</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dropper bottle/Plastic Pipettes Dropper</td>
			<td>Shopee Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>Thermo Scientific Chemicals</td>
			<td>033361.M1</td>
			<td>Diluted to 70% using double distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiberglass tank (1 ton)</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine sand</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>collected from Sea beach of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>First Aid Kits</td>
			<td>Watsons Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat head nickel steel metal rod (Screw driver)</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Thermo Scientific Chemicals</td>
			<td>119690010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas cylinder (butane gas) for blow&#160; torch</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas lighter gun (long head)</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass beaker (100 mL))</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td>1000-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice bag&#160;</td>
			<td>Watsons Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perforated plastic baskets&#160;</td>
			<td>Eco-Shop Marketing Sdn. Bhd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVC pipe 15mm</td>
			<td>Bina Plastic Industries Sdn Bhd (HQ)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refractometer</td>
			<td>ATAGO CO.,LTD.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>Sharp Corporation Japan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Chest Freezer SHARP 110L - SJC 118</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scoop net</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td></td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seawater</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Siphoning pipe</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spray bottle</td>
			<td>Mr. DIY Sdn Bhd</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless surgical forceps&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless surgical scissors&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Submersible water pump&#160;</td>
			<td>AS</td>
			<td>N/A</td>
			<td>model: Astro 4000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tincture of iodine solution&#160; (Povidone Iodine)</td>
			<td>Farmasi Fajr Sdn Bhd</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue paper&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transparent plastic aquarium</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waterproof table</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

eyestalk ablation to increase ovarian maturation in mud crabs

סרטני בוץ (Scylla spp.) הם מיני סרטנים בעלי חשיבות מסחרית שניתן למצוא בכל אזור הודו-מערב האוקיינוס השקט. במהלך התרבות, השראת הבשלת השחלות חשובה כדי לענות על הביקוש הצרכני לסרטני בוץ בוגרים ולהאיץ את ייצור הזרעים. אבלציה של Eyestalk היא כלי יעיל לשיפור התבגרות השחלות בסרטני בוץ. עם זאת, אין פרוטוקול סטנדרטי לאבלציה של סרטני בוץ. במחקר זה מתוארות שתי טכניקות אבלציה של דיבור עיניים: צריבה (שימוש במתכת חמה כדי לעבד את העיניים של סרטן מורדם) וניתוח (הסרת העיניים באמצעות מספריים כירורגיים). לפני אבלציה של דיבור עיניים, נקבות בוגרות מינית (CW > 86 מ"מ) הורדמו באמצעות שקית קרח (-20 מעלות צלזיוס) עם מי ים. כאשר טמפרטורת המים הגיעה ל -4 מעלות צלזיוס, שקית הקרח הוסרה מהמים. מי ים זורמים (טמפרטורת סביבה: 28 מעלות צלזיוס) שימשו להתאוששות מההרדמה מיד לאחר אבלציה של דיבור עיניים. התמותה לא התרחשה במהלך או אחרי תהליך אבלציה של דיבור עיניים. פרוטוקול האבלציה של שיחות העיניים שהוצג כאן האיץ את ההבשלה השחלתית של סרטני הבוץ.

התבגרות גונאד רקמות שחלה לבנות וקרמיות (שחלות לא בשלות, שלב 1) נמצאו ב-100% מהנקבות שנותחו (n = 6) לפני ביצוע אבלציה של דיבור עיניים (איור 2). שיעור ההבשלה של נקבות סרטנים עם דיבור עיניים (n = 63; 31 נקבות עם טכניקת הצריבה ו-32 נקבות עם טכניקת הניתוח) היה גבוה יותר בהשוואה לנקב?...

Watch this Scientific Journal Video about Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs at JoVE.com

Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

שני פרוטוקולי אבלציה של דיבור עיניים (כלומר, גישות צריבה וניתוח) בוצעו על נקבות סרטנים מורדמות. אבלציה של סרטני בוץ זירזה את הבשלת השחלות מבלי להפחית את שיעור ההישרדות.

אבלציה של דיבור עיניים להגברת התבגרות השחלות בסרטני בוץ

Mud crabs (Scylla spp.) are commercially important crustacean species that can be found throughout the Indo-West Pacific region. During culture, the ...

הפרוטוקול המתואר ממזער את הלחץ במהלך אבלציה של סרטני בוץ, ובכך מפחית את התרחשות התמותה כתוצאה מאבלציה של דיבור עיניים. יעילות בזמן היא המפתח למזעור הלחץ לבעלי החיים. ודא שהכל מוכן לפני ביצוע ההליך.התחילו בשטיפת סרטני הבוץ הבריאים, הפעילים והפגים במי ברז עם כלור כדי להסיר פסולת וטפילים. משרים את הסרטנים בפורמלדהיד למשך 30 דקות. יש להקפיד על אוורור רציף ועדין עם אבני אוויר במהלך הטיפול בפורמלדהיד.לאחר מכן, השתמשו במי ים זורמים כדי לשטוף את הסרטנים כדי להסיר שאריות פורמלדהיד. כדי לבצע צריבה של עיני הסרטן, התחל על ידי חימום קצה של מוט מתכת עם blowtorch עד המוט הוא אדום בוהק. מכסים סרטן מורדם במגבת כותנה רטובה ומחזיקים עין אחת של הסרטן במלקחיים מעוקרים.לחצו על קצה המתכת האדום והחם על עין הסרטן למשך כ-10 עד 15 שניות עד שצבע העיניים יהפוך לכתום או כתום אדמדם. יש לחטא את המלקחיים באתנול 70% ולנקות אותם בנייר טישו סטרילי כדי להבטיח שאין זיהום צולב בין סרטנים. לאחר ביצוע אבלציה על כל הסרטנים, טובלים את מוט המתכת במי ברז.לביצוע אבלציה כירורגית, החזיקו את הסרטן המורדם באמצעות כפפות כותנה עבות וכסו אותו במגבת כותנה רטובה. השתמשו במלקחיים סטריליים כדי להחזיק עין אחת של הסרטן וגזרו במהירות את העיניים עם מספריים כירורגיים. לאחר הניתוח, להכין מיכל תקורה עם 20 חלקים לאלף מי ים מסוננים עם אוורור רציף.חבר צינור גמיש עם המיכל לזרימת מים כבידתית. הכניסו את הסרטן לסלסלה וחשפו אותו למי ים זורמים מהמיכל שמעליו. עקבו אחר הסרטן תחת מי ים זורמים עד שהוא יכול לנוע באופן ספונטני.הניחו את הסרטנים בנפרד באקווריום אחר עם מי ים למשך 30 דקות לתצפית נוספת. בחר באופן אקראי נקבות בוגרות חדשות שלא עברו אבלציה של דיבור עיניים. לאחר הסרת השריון העליון ואת hepatopancreas, להתבונן ולזהות את שלב ההתבגרות של השחלה סרטנים.ניתן לזהות את שלבי ההבשלה של השחלות על פי צבען, כאשר השלב הראשון הלא בוגר הוא לבן שקוף או שמנת, שלב ההבשלה המוקדמת השני הוא חיוור עד צהוב בהיר, שלב שלוש לפני ההבשלה הוא צהוב עד כתום בהיר, והשלב הרביעי הבוגר לחלוטין הוא בצבע כתום כהה עד אדמדם. שיעור ההבשלה של הגונד היה גבוה יותר אצל הנקבות בעלות ה-ablated בעיניים בהשוואה לאלו שלא היו ablated. האחוז הגבוה ביותר של שחלות שלב שלוש נמצא אצל נקבות סרטנים עם דיבור עיניים.ניתוח חד-כיווני של השונות הראה הבדלים משמעותיים בין שלבי ההבשלה השחלתיים של נקבות הסרטנים הניסיוניות. בקבוצת הביקורת הייתה שכיחות גבוהה יותר של נקבות סרטנים לא בוגרות ביחס לקבוצות האבלטיות. רק הקבוצות שעברו אבלאט הצליחו לייצר נקבות סרטנים בשלב ארבע משלב לא בוגר 30 יום לאחר הטיפול.חשוב לוודא כי העיניים של סרטן הבוץ כבר ablated מלא לאחר צריבה או טכניקת ניתוח. אבלציה של Eyestalk מאפשרת לחקלאים סרטנים לגרום להבשלת השחלות ולהתכה בקלות. זה גם מאפשר לחוקרים לחקור עוד יותר את התפקיד של דיבור העיניים בוויסות רבייה של סרטני בוץ.

Research

JoVE Journal

Biology

Using Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) to Develop Diagnostic Tools

Using Micro-Electro-Mechanical Systems MEMS to Develop Diagnostic Tools

שימוש Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) לפתח כלים לאבחון

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

בשנת vivo ההדמיה לטיפולים במודל עכבר orthotopic של סרטן השחלות

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Laser Ablation of the Zebrafish Pronephros to Study Renal Epithelial Regeneration

אבלציה בלייזר של דג הזברה כלית ראשית לחקר התחדשות אפיתל הכליה

Acute kidney injury (AKI) is characterized by high mortality rates from deterioration of renal function over a period of hours or days that culminates in ...

Mouse Oocyte Microinjection, Maturation and Ploidy Assessment

הביצית Microinjection עכבר, הבשלה ו Ploidy הערכה

Mistakes in chromosome segregation lead to aneuploid cells.  In somatic cells, aneuploidy is associated with cancer but in gametes, aneuploidy leads to ...

Endothelial Cell Co-culture Mediates Maturation of Human Embryonic Stem Cell to Pancreatic Insulin Producing Cells in a Directed Differentiation Approach

תא האנדותל שיתוף תרבות מתווכת ההבשלה של עובריים אנושיים לתאי גזע לאינסולין בתאי לבלב הפקת בגישה הבחנה בימוי

Embryonic stem cells (ESC) have two main characteristics: they can be indefinitely propagated in vitro in an undifferentiated state and they are ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

אימות של מודל עכבר לשבש מכלולי LINC באופן ספציפי בתא

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Benefits of Cardiac Resynchronization Therapy in an Asynchronous Heart Failure Model Induced by Left Bundle Branch Ablation and Rapid Pacing

היתרונות של טיפול מחדש הלב במודל אי ספיקת לב אסינכרוני המושרה על ידי צרור השמאלי ענף אבלציה ו צועד מהירה

It is now well recognized that heart failure (HF) patients with left bundle branch block (LBBB) derive substantial clinical benefits from cardiac ...

Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians

טכניקות הרבייה ניטור ובקרה של השחלות

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive ...

Bovine Ovarian Cortex Tissue Culture

תרבית רקמת קליפת המוח השחלות

Follicle development from the primordial to antral stage is a dynamic process within the ovarian cortex, which includes endocrine and paracrine factors ...

Megakaryocyte Culture in 3D Methylcellulose-Based Hydrogel to Improve Cell Maturation and Study the Impact of Stiffness and Confinement

תרבות Megakaryocyte בהידרוג'ל מבוסס מתילצלולוז תלת מימדי לשיפור התבגרות התאים וחקר ההשפעה של נוקשות וכליאה

The 3D environment leading to both confinement and mechanical constraints is increasingly recognized as an important determinant of cell behavior. 3D ...