Name: eyestalk ablation to increase ovarian maturation in mud crabs
Uploaded: 2023-03-31T13:30:00
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이 연구는 말레이시아 테렝가누 대학교(Universiti Malaysia Terengganu)의 열대 양식 및 수산 연구소(Institute of Tropical Aquaculture and Fisheries)의 인증을 받은 말레이시아 HICoE(Higher Institution Centre of Excellence) 프로그램에 따라 말레이시아 교육부의 지원을 받았습니다(투표 번호 63933 및 투표 번호 56048). 우리는 Universiti Malaysia Terengganu 및 Sayap Jaya Sdn. Bhd. 민간 파트너십 연구 보조금 (Vot. No. 55377)을 통해 . Universiti Sains Malaysia에서 Khor Waiho 및 Hanafiah Fazhan에 이르는 겸임 학술 펠로우 직책도 인정됩니다.

이 프로토콜은 말레이시아 실험동물과학협회(Laboratory Animal Science Association of Malaysia)에서 규정한 과학적 목적을 위한 동물 관리 및 사용에 대한 말레이시아 실행 강령을 따릅니다. 실험 샘플의 희생은 National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH Publications No. 8023, revised 1978)에 따라 수행되었다. 성적으로 미성숙한 암컷 머드 크랩(오렌지 머드 크랩 S. olivacea)은 말레이시아 ?...

이 프로토콜은 머드 크랩 Scylla spp.의 안구 절제를 위해 개발되었으며 생식선 성숙을 유도하는 효율적인 방법으로 적용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 머드 크랩의 상업적 난소 성숙을 위해 쉽게 복제할 수 있으며 머드 크랩 종자 생산에서 잠복기(산란에서 다른 산란까지의 시간)를 줄이기 위해 구현할 수 있습니다.
갑각류(즉, 민물 새우, 해양 새우)의 눈썹 절제는 일반?...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65039">Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs</a>. The Introduction, Protocol, Discussion and References were&#160;updated.

Erratum: Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

Scylla 속에 속하는 4 종의 머드 크랩 종은 모두 양식업에서 상업적으로 중요한 갑각류 종입니다 1,2. 진흙 게를 포함한 갑각류의 성장과 미숙 (아성체 또는 사춘기) 단계에서 성적으로 성숙한 (성체) 단계로의 전환은 오래되고 작은 외골격을 주기적으로 흘리는 탈피 과정을 통해 발생합니다. 갑각 너비(CW), chelipeds 및 복부 플랩 형태는 Scyll a spp.의 성적 성숙도를 결정하는 데 널리 사용됩니다. 3,4,5. 털갈이 과정은 다양한 호르몬의 작용에 의해 조절되며 엄청난 양의 에너지가 필요합니다6. 정상적인 털갈이 과정 외에도, 자발적으로 또는 외부 요인에 의해 유발 된 팔다리의 손실은 생존율에 영향을 미치지 않으면 서 게의 털갈이를 촉진합니다 7,8,9. 따라서 사지 자율절제술은 연질 껍질 머드 크랩 양식 산업 7,9에서 털갈이 유도에 일반적으로 사용됩니다.
일방적 또는 양측 눈썹 절제술은 생식선 성숙 및 종자 생산을 위해 민물 새우와 해양 새우에서 주로 인기가 있습니다10,11,12,13. 갑각류의 일반적인 안자 절제 기술은 다음을 포함한다: (i) 끈을 이용한 안자 기저부에서의 결찰14,15; (ii) 고온 집게 또는 전기 소작 장치(16)를 사용한 안자의 소작; (iii) 열린 상처를 남기기 위해 눈썹을 제거하거나 직접 꼬집는 단계(12); 및 (iv) 면도칼로 눈의 말단부를 절단한 후 절개를 통해 안자 내용물을 제거하는 단계(17). 눈썹 X 기관은 갑각류 고혈당 호르몬 (CHH), 털갈이 억제 호르몬 (MIH) 및 vitellogenes-inhibiting hormones (VIH)를 조절하기 때문에 갑각류의 중요한 내분비 기관입니다 6,18,19,20,21,22. 눈줄기 X-기관(또는 부비동 샘 복합체)은 신경펩티드 호르몬 계열에 속하는 성선 형성 억제 호르몬(VIH)이라고도 하는 생식선 억제 호르몬(GIH)을 합성하고 방출한다6. 편측성 또는 양측성 안켠 절제술은 GIH 합성을 감소시켜 자극 호르몬(즉, 생식선 자극 호르몬, GSH)의 우세와 갑각류의 난소 성숙 과정을 가속화한다23,24,25,26. 눈 줄기 절제 후 GIH의 영향이 없는 암컷 갑각류는 난소 발달에 에너지를 쏟는다27. 일방적인 안대 절제술은 갑각류의 난소 성숙을 유도하기에 충분하며11 새우와 게의 절제된 안자즙은 여러 번의 탈피 후에 재생될 수 있음이 밝혀졌다28. Scylla spp.에는 4개의 난소 발달 단계가 기록되어 있습니다: i) 미성숙(1기), ii) 조기 성숙(2기), iii) 미성숙(3단계), iv) 완전 성숙(4단계)29,30. 미성숙 난소 단계는 미성숙 여성에서 발견됩니다. 사춘기 털갈이와 짝짓기 후, 미성숙 난소는 발달을 시작하고 산란하기 전에 마침내 성숙 (4 단계)31.
눈썹 절제 프로토콜은 머드 크랩 어미의 발달과 종자 생산에 필수적입니다. 세계 식품 시장에서는 근육 함량이 높은 게보다는 완전히 성숙한 난소 (4 단계)를 가진 성숙한 머드 크랩이 소비자에 의해 선호되므로 큰 수컷보다 상업적 가치가 높습니다. 진흙 게의 눈썹 절제에 대한 완전한 프로토콜은 없습니다. 이 작업의 안자 절제 프로토콜은 완전히 마취된 게를 사용하여 스트레스를 최소화하고 게에 물린 사람의 신체적 부상을 최소화합니다. 이 프로토콜은 쉽고 비용 효율적입니다. 여기에서 우리는 생식선의 성숙을 유도할 수 있는 Scylla spp.의 안자 절제에 대한 프로토콜을 제시합니다. 두 가지 안자 절제 기술(소작 및 수술)을 테스트하고 암컷 진흙 게의 생식선 발달 속도를 기반으로 효율성을 비교했습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aeration tube&#160;</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airstone</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave machine</td>
			<td>HIRAYAMA MANUFACTURING CORPORATION</td>
			<td>N/A</td>
			<td>MADE IN JAPAN</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleaching powder (Hi-Chlon 70%)</td>
			<td>Nippon Soda Co.Ltd,Japan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blow torch&#160;</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circular tank (32L)</td>
			<td>BEST PLASTIC INDUSTRY SDN. BHD.&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton hand gloves (thick)&#160;</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton towel</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital thermometer</td>
			<td>Hanna Instrument</td>
			<td>HI9814</td>
			<td>Hanna&#160;Instruments&#160;GroLine Hydroponics Waterproof pH / EC / TDS / Temp. Portable Meter HI9814</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Vernier Caliper</td>
			<td>INSIZE Co., Ltd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting tray</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dropper bottle/Plastic Pipettes Dropper</td>
			<td>Shopee Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>Thermo Scientific Chemicals</td>
			<td>033361.M1</td>
			<td>Diluted to 70% using double distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiberglass tank (1 ton)</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine sand</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>collected from Sea beach of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>First Aid Kits</td>
			<td>Watsons Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat head nickel steel metal rod (Screw driver)</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Thermo Scientific Chemicals</td>
			<td>119690010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas cylinder (butane gas) for blow&#160; torch</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas lighter gun (long head)</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass beaker (100 mL))</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td>1000-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice bag&#160;</td>
			<td>Watsons Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perforated plastic baskets&#160;</td>
			<td>Eco-Shop Marketing Sdn. Bhd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVC pipe 15mm</td>
			<td>Bina Plastic Industries Sdn Bhd (HQ)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refractometer</td>
			<td>ATAGO CO.,LTD.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>Sharp Corporation Japan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Chest Freezer SHARP 110L - SJC 118</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scoop net</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td></td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seawater</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Siphoning pipe</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spray bottle</td>
			<td>Mr. DIY Sdn Bhd</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless surgical forceps&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless surgical scissors&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Submersible water pump&#160;</td>
			<td>AS</td>
			<td>N/A</td>
			<td>model: Astro 4000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tincture of iodine solution&#160; (Povidone Iodine)</td>
			<td>Farmasi Fajr Sdn Bhd</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue paper&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transparent plastic aquarium</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waterproof table</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

eyestalk ablation to increase ovarian maturation in mud crabs

머드 크랩(Scylla spp.)은 인도-서태평양 지역에서 볼 수 있는 상업적으로 중요한 갑각류 종입니다. 배양 중에 난소 성숙의 유도는 성숙한 머드 크랩에 대한 소비자 수요를 충족시키고 종자 생산을 촉진하는 데 중요합니다. 눈썹 절제술은 진흙 게의 난소 성숙을 향상시키는 효과적인 도구입니다. 그러나 진흙 게의 눈웍 절제에 대한 표준 프로토콜은 없습니다. 이 연구에서는 소작(마취된 게의 눈줄기를 제거하기 위해 뜨거운 금속을 사용하는 것)과 수술(수술용 가위를 사용하여 눈줄기를 제거하는 것)의 두 가지 안자 절제 기술에 대해 설명합니다. 안자 절제 전에 성적으로 성숙한 여성(CW > 86mm)을 바닷물과 함께 얼음 주머니(-20°C)를 사용하여 마취했습니다. 수온이 4°C에 도달했을 때, 얼음 주머니를 물에서 제거하였다. 흐르는 바닷물(주위온도: 28°C)은 안쌥절제 직후 마취 회복을 위해 사용하였다. 사망률은 안구 절제 과정 중 또는 이후에 발생하지 않았습니다. 여기에 제시된 안대 절제 프로토콜은 진흙 게의 난소 성숙을 가속화했습니다.

생식선 성숙 크림색의 흰색 난소 조직(미성숙 난소, 1기)은 안자 절제술을 수행하기 전에 해부된 암컷(n = 6)의 100%에서 발견되었습니다(그림 2). 눈썹 절제술을 받은 암컷 게(n=63; 소작 기법을 적용한 암컷 31마리, 수술 기법을 사용한 암컷 32마리)의 생식선 성숙률은 개별 사육 30일 후 안대 절제술을 받지 않은 암컷 게(n=31)에 비해 더 높았다(그림 3<...

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Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

마취된 암컷 게에 대해 두 가지 안구 절제 프로토콜(즉, 소작 및 수술 접근법)을 수행했습니다. 진흙 게의 눈썹 절제는 생존율을 감소시키지 않으면서 난소의 숙성을 앞당겼습니다.

머드 크랩의 난소 성숙을 증가시키는 눈썹 절제

Mud crabs (Scylla spp.) are commercially important crustacean species that can be found throughout the Indo-West Pacific region. During culture, the ...

설명된 프로토콜은 진흙 게의 안자 절제 중 스트레스를 최소화하여 안자 절제로 인한 사망 발생을 줄입니다. 시간 효율성은 동물에 대한 스트레스를 최소화하는 열쇠입니다. 절차를 수행하기 전에 모든 것이 준비되었는지 확인하십시오.건강하고 활동적이며 조산한 암컷 머드 크랩을 염소 처리된 수돗물로 세척하여 파편과 기생충을 제거하는 것으로 시작하십시오. 게를 포름알데히드에 30분 동안 담가둡니다. 포름알데히드 처리 동안 공기 돌로 지속적이고 부드러운 통기를 보장합니다.다음으로, 흐르는 바닷물을 사용하여 게를 씻어 잔류 포름알데히드를 제거합니다. 게 눈썹의 소작을 수행하려면 막대가 밝은 빨간색이 될 때까지 토치로 금속 막대의 끝을 가열하여 시작하십시오. 마취 된 게를 젖은 면수건으로 덮고 멸균 된 집게로 게의 한쪽 눈을 잡습니다.눈썹이 주황색 또는 붉은 주황색으로 변할 때까지 약 10-15초 동안 붉고 뜨거운 금속 끝을 게의 눈에 대십시오. 집게를 70 % 에탄올로 소독하고 멸균 티슈 페이퍼로 청소하여 게 사이의 교차 오염이 없도록합니다. 모든 게에 절제를 한 후 금속 막대를 수돗물에 담그십시오.외과 적 절제술을 수행하려면 두꺼운면 장갑을 사용하여 마취 된 게를 잡고 젖은 면 타월로 덮으십시오. 멸균 집게를 사용하여 게의 한쪽 눈을 잡고 수술 용 가위로 눈썹을 재빨리 자릅니다. 수술 후, 지속적인 폭기를 통해 20ppm의 여과 된 바닷물로 오버 헤드 탱크를 준비하십시오.중력 물 흐름을 위해 유연한 파이프를 탱크와 연결하십시오. 게를 바구니에 넣고 머리 위 탱크에서 흐르는 바닷물에 담가둡니다. 게가 자발적으로 움직일 수 있을 때까지 흐르는 바닷물 아래에서 게를 모니터링합니다.추가 관찰을 위해 게를 바닷물이있는 다른 수족관에 30 분 동안 개별적으로 놓습니다. 눈썹 절제술을 받지 않은 새로 성숙한 암컷을 무작위로 선택합니다. 갑각과 간췌장을 제거한 후 게 난소의 성숙 단계를 관찰하고 확인합니다.난소 성숙 단계는 착색에 따라 식별 할 수 있으며, 미성숙 단계 1은 반투명 또는 크림색의 흰색, 초기 성숙 단계 2는 옅은 노란색에서 밝은 노란색, 성숙 전 단계 3은 노란색에서 밝은 주황색, 완전히 성숙한 단계 4는 짙은 주황색에서 붉은 색입니다. 생식선 성숙률은 절제되지 않은 여성에 비해 눈썹이 절제된 여성에서 더 높았습니다. 3기 난소의 가장 높은 비율은 눈썹이 절제된 암컷 게에서 발견되었습니다.분산의 일원 분석은 실험적인 암컷 게의 난소 성숙 단계 간에 유의한 차이를 보였다. 대조군은 절제된 그룹에 비해 미성숙 암컷 게의 유병률이 더 높았습니다. 절제된 그룹만이 처리 후 30일 동안 미성숙 단계에서 4단계 암컷 게를 생산할 수 있었습니다.진흙 게의 눈썹이 소작 또는 수술 기술에 따라 완전히 제거되었는지 확인하는 것이 중요합니다. 눈썹 절제술을 통해 갑각류 농부들은 난소 성숙과 털갈이를 쉽게 유도할 수 있습니다. 또한 연구자들은 머드 크랩 번식을 조절하는 데 눈썹의 역할을 더 자세히 조사할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biology

Using Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) to Develop Diagnostic Tools

Using Micro-Electro-Mechanical Systems MEMS to Develop Diagnostic Tools

진단 도구를 개발하기 위해 마이크로 전자 기계 시스템 (MEMS)를 사용

연구

생물학

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

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생체내 이미징 및 난소암의 Orthotopic 마우스 모델에서 치료 트리 트먼트

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Laser Ablation of the Zebrafish Pronephros to Study Renal Epithelial Regeneration

Zebrafish의 Pronephros의 레이저 절제는 신장 상피 조직이 재생된를 공부

Acute kidney injury (AKI) is characterized by high mortality rates from deterioration of renal function over a period of hours or days that culminates in ...

Mouse Oocyte Microinjection, Maturation and Ploidy Assessment

마우스 Oocyte의 Microinjection, 성숙과 Ploidy 평가

Mistakes in chromosome segregation lead to aneuploid cells.  In somatic cells, aneuploidy is associated with cancer but in gametes, aneuploidy leads to ...

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인간 배아의 내피 세포 공동 배양 Mediates의 성숙은 감독 차별화 접근법에서 췌장 인슐린 생산 세포로 세포를 줄기

Embryonic stem cells (ESC) have two main characteristics: they can be indefinitely propagated in vitro in an undifferentiated state and they are ...

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심장 재 동기화 치료 왼쪽된 번들 지점 제거 및 빠른 속도 의해 유도 된 비동기 심장 마비 모델에서의 장점

It is now well recognized that heart failure (HF) patients with left bundle branch block (LBBB) derive substantial clinical benefits from cardiac ...

Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians

양서류에서 난소 모니터링 및 제어를위한 생식 기술

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive ...

Bovine Ovarian Cortex Tissue Culture

소 난소 피질 조직 배양

Follicle development from the primordial to antral stage is a dynamic process within the ovarian cortex, which includes endocrine and paracrine factors ...

Megakaryocyte Culture in 3D Methylcellulose-Based Hydrogel to Improve Cell Maturation and Study the Impact of Stiffness and Confinement

세포 성숙을 개선하고 강성과 감금의 영향을 연구하기 위해 3D 메틸셀룰로오스 기반 하이드로겔의 메가카요세포 배양

The 3D environment leading to both confinement and mechanical constraints is increasingly recognized as an important determinant of cell behavior. 3D ...