Name: eyestalk ablation to increase ovarian maturation in mud crabs
Uploaded: 2023-03-31T13:30:00
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Este estudo foi apoiado pelo Ministério da Educação, Malásia, no âmbito do programa Higher Institution Centre of Excellence (HICoE), Malásia, acreditado no Instituto de Aquicultura Tropical e Pesca, Universiti Malaysia Terengganu (Vot No. 63933 & Vot No. 56048). Agradecemos o apoio da Universiti Malaysia Terengganu e Sayap Jaya Sdn. Bhd. através da Bolsa de Pesquisa de Parceria Privada (Vot. No. 55377). Uma posição de bolsista acadêmico adjunto da Universiti Sains Malaysia para Khor Waiho e Hanafiah Fazhan também é reconhecida.

Este protocolo segue o Código de Prática da Malásia para o Cuidado e Uso de Animais para Fins Científicos delineado pela Associação de Ciência Animal de Laboratório da Malásia. O sacrifício das amostras experimentais foi feito de acordo com o National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH Publications No. 8023, revisado em 1978). Caranguejos de lama fêmeas sexualmente pré-maduros ( S. olivacea) foram coletados no mercado local (5°66′62′′N, 102°72′33′?...

Este protocolo foi desenvolvido para a ablação do pedúnculo ocular do caranguejo-da-lama, Scylla spp., e pode ser aplicado como um método eficiente para induzir a maturação gonadal. Este protocolo pode ser facilmente replicado para a maturação comercial dos ovários de caranguejos lama e pode ser implementado para reduzir o período latente (tempo de uma desova para outra) na produção de sementes de caranguejo lama.
A ablação do pedúnculo ocular de crustáceos (i.e., cama...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65039">Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs</a>. The Introduction, Protocol, Discussion and References were&#160;updated.

Erratum: Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

Todas as quatro espécies de caranguejos pertencentes ao gênero Scylla são espécies de crustáceos comercialmente importantes na aquicultura 1,2. O crescimento de crustáceos, incluindo caranguejos da lama, e sua transformação da fase pré-madura (sub-adulta ou púbere) para a fase sexualmente madura (adulta) ocorrem através de um processo de muda que envolve a eliminação periódica de exoesqueletos mais velhos e menores. A largura da carapaça (LC), as morfologias dos quelípodos e dos retalhos abdominais são amplamente utilizadas para determinar a maturidade sexual de Scylla spp. 3,4,5. O processo de muda é regulado pela ação de vários hormônios e requer uma enorme quantidade de energia6. Além do processo normal de muda, a perda de membros, voluntária ou induzida por fatores externos, agiliza a muda dos caranguejos sem afetar sua taxa de sobrevivência 7,8,9. Portanto, a autotomia de membros é comumente utilizada para indução de muda na indústria de criação de caranguejos de casca mole 7,9.
A ablação unilateral ou bilateral do pedúnculo ocular é mais popular em camarões de água doce e camarões marinhos para maturação de gônadas e produção de sementes10,11,12,13. Técnicas comuns de ablação de pedúnculo ocular em crustáceos incluem: (i) ligadura na base do pedúnculo ocular com corda14,15; (ii) cauterização do pedúnculo ocular com pinça quente ou eletrocautério16; (iii) remoção ou pinçamento direto do pedúnculo ocular para deixar a ferida aberta12; e (iv) remoção do conteúdo do pedúnculo ocular por incisão após corte da porção distal do olho com navalha17. Os órgãos X do pedúnculo ocular são importantes órgãos endócrinos em crustáceos, pois regulam os hormônios hiperglicêmicos (CHH) dos crustáceos, os hormônios inibidores da muda (MIH) e os hormônios inibidores da vitelogênese (VIH)6,18,19,20,21,22. Os órgãos X do pedúnculo ocular (ou complexo da glândula sinusal) sintetizam e liberam hormônios inibidores das gônadas (GIH), também conhecidos como hormônios inibidores da vitelogênese (VIH), pertencentes à família dos hormônios neuropeptídeos6. A ablação unilateral ou bilateral do pedúnculo ocular reduz a síntese de GIH, resultando na dominância de hormônios estimulantes (i.e., hormônios estimulantes das gônadas, GSH) e na aceleração do processo de maturação ovariana em crustáceos23,24,25,26. Sem a influência do GIH após a ablação do pedúnculo ocular, crustáceos fêmeas dedicam sua energia ao desenvolvimento ovariano27. Verificou-se que a ablação unilateral do pedúnculo ocular é suficiente para a indução da maturação ovariana em crustáceos11 e que o pedúnculo ocular ablado de camarões e caranguejos pode se regenerar após várias mudas28. Há quatro estágios de desenvolvimento ovariano registrados em Scylla spp.: i) imaturo (estágio-1), ii) maturação precoce (estágio-2), iii) pré-maturação (estágio-3) e iv) totalmente maduro (estágio-4)29,30. O estágio ovariano imaturo é encontrado em fêmeas imaturas. Após a muda puberal e o acasalamento, o ovário imaturo começa a se desenvolver e finalmente amadurece (estágio 4) antes da desova31.
Um protocolo de ablação ocular é essencial para o desenvolvimento de matrizes de caranguejo e produção de sementes. No mercado global de alimentos, caranguejos maduros com ovários totalmente maduros (estágio 4) em vez de caranguejos com maior teor muscular são preferidos pelos consumidores e, portanto, têm um valor comercial mais alto, até mesmo maior do que os machos grandes. Não há um protocolo completo para a ablação ocular de caranguejos da lama. O protocolo de ablação do pedúnculo ocular neste trabalho minimiza o estresse com o uso de caranguejos totalmente anestesiados e minimiza os danos físicos causados às mordidas de caranguejos. Este protocolo é fácil e econômico. Apresentamos um protocolo para a ablação do pedúnculo ocular de Scylla spp., que pode induzir a maturação da gônada. Duas técnicas de ablação do pedúnculo ocular (cauterização e cirurgia) foram testadas e suas eficiências comparadas com base na taxa de desenvolvimento gonadal de fêmeas de caranguejos da lama.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aeration tube&#160;</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airstone</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave machine</td>
			<td>HIRAYAMA MANUFACTURING CORPORATION</td>
			<td>N/A</td>
			<td>MADE IN JAPAN</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleaching powder (Hi-Chlon 70%)</td>
			<td>Nippon Soda Co.Ltd,Japan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blow torch&#160;</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circular tank (32L)</td>
			<td>BEST PLASTIC INDUSTRY SDN. BHD.&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton hand gloves (thick)&#160;</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton towel</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital thermometer</td>
			<td>Hanna Instrument</td>
			<td>HI9814</td>
			<td>Hanna&#160;Instruments&#160;GroLine Hydroponics Waterproof pH / EC / TDS / Temp. Portable Meter HI9814</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Vernier Caliper</td>
			<td>INSIZE Co., Ltd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting tray</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dropper bottle/Plastic Pipettes Dropper</td>
			<td>Shopee Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>Thermo Scientific Chemicals</td>
			<td>033361.M1</td>
			<td>Diluted to 70% using double distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiberglass tank (1 ton)</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine sand</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>collected from Sea beach of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>First Aid Kits</td>
			<td>Watsons Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat head nickel steel metal rod (Screw driver)</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Thermo Scientific Chemicals</td>
			<td>119690010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas cylinder (butane gas) for blow&#160; torch</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas lighter gun (long head)</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass beaker (100 mL))</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td>1000-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice bag&#160;</td>
			<td>Watsons Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perforated plastic baskets&#160;</td>
			<td>Eco-Shop Marketing Sdn. Bhd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVC pipe 15mm</td>
			<td>Bina Plastic Industries Sdn Bhd (HQ)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refractometer</td>
			<td>ATAGO CO.,LTD.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>Sharp Corporation Japan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Chest Freezer SHARP 110L - SJC 118</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scoop net</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td></td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seawater</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Siphoning pipe</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spray bottle</td>
			<td>Mr. DIY Sdn Bhd</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless surgical forceps&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless surgical scissors&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Submersible water pump&#160;</td>
			<td>AS</td>
			<td>N/A</td>
			<td>model: Astro 4000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tincture of iodine solution&#160; (Povidone Iodine)</td>
			<td>Farmasi Fajr Sdn Bhd</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue paper&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transparent plastic aquarium</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waterproof table</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

eyestalk ablation to increase ovarian maturation in mud crabs

Caranguejos da lama (Scylla spp.) são espécies de crustáceos comercialmente importantes que podem ser encontrados em toda a região do Pacífico Indo-Ocidental. Durante o cultivo, a indução da maturação ovariana é importante para atender à demanda dos consumidores por caranguejos maduros e acelerar a produção de sementes. A ablação do pedúnculo ocular é uma ferramenta eficaz para melhorar a maturação ovariana em caranguejos da lama. No entanto, não existe um protocolo padrão para a ablação do pedúnculo ocular de caranguejos da lama. Neste estudo, duas técnicas de ablação do pedúnculo ocular são descritas: cauterização (uso de metal quente para abater o pedúnculo ocular de um caranguejo anestesiado) e cirurgia (remoção do pedúnculo ocular com tesoura cirúrgica). Antes da ablação do pedúnculo ocular, fêmeas sexualmente maduras (LC > 86 mm) foram anestesiadas com uma bolsa de gelo (−20 °C) com água do mar. Quando a temperatura da água atingiu 4 °C, a bolsa de gelo foi removida da água. Água do mar corrente (temperatura ambiente: 28 °C) foi usada para recuperação da anestesia imediatamente após a ablação do pedúnculo ocular. A mortalidade não ocorreu durante ou após o processo de ablação do pedúnculo ocular. O protocolo de ablação do pedúnculo ocular aqui apresentado acelerou a maturação ovariana dos caranguejos da lama.

Maturação gonadal Tecidos ovarianos brancos cremosos (ovários imaturos, estágio 1) foram encontrados em 100% das fêmeas dissecadas (n = 6) antes da realização da ablação do pedúnculo ocular (Figura 2). A taxa de maturação gonadal das fêmeas de caranguejos com haste ocular (n = 63; 31 fêmeas com a técnica de cauterização e 32 fêmeas com a técnica cirúrgica) foi maior em comparação com as fêmeas que não foram submetidas à ablação do pedúnculo ocu...

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Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

Dois protocolos de ablação de pedúnculo ocular (isto é, cauterização e abordagens cirúrgicas) foram realizados em caranguejos fêmeas anestesiados. A ablação ocular de caranguejos de lama acelerou o amadurecimento dos ovários sem diminuir a taxa de sobrevivência.

Ablação do Pedúnculo Ocular para Aumentar a Maturação Ovariana em Caranguejos da Lama

Mud crabs (Scylla spp.) are commercially important crustacean species that can be found throughout the Indo-West Pacific region. During culture, the ...

O protocolo descrito minimiza o estresse durante a ablação do pedúnculo ocular de caranguejos da lama, reduzindo a ocorrência de mortalidade por ablação do pedúnculo ocular. A eficiência do tempo é a chave para minimizar o estresse dos animais. Certifique-se de que tudo está preparado antes de realizar o procedimento.Comece lavando os caranguejos fêmeas saudáveis, ativos e prematuros com água da torneira clorada para remover quaisquer detritos e parasitas. Mergulhe os caranguejos em formol por 30 minutos. Garantir aeração contínua e suave com pedras de ar durante o tratamento com formaldeído.Em seguida, use água do mar corrente para lavar os caranguejos para remover qualquer formaldeído residual. Para realizar a cauterização do talo do caranguejo, comece aquecendo a ponta de uma haste de metal com um maçarico até que a haste fique vermelha brilhante. Cubra um caranguejo anestesiado com uma toalha de algodão molhada e segure um olho do caranguejo com pinça esterilizada.Pressione a ponta de metal quente vermelho no olho do caranguejo por cerca de 10 a 15 segundos até que o olho fique com uma cor laranja ou laranja avermelhada. Desinfete as pinças com etanol 70% e limpe-as com papel higiênico estéril para garantir que não haja contaminação cruzada entre caranguejos. Depois de realizar a ablação em todos os caranguejos, mergulhe a haste de metal na água da torneira.Para realizar a ablação cirúrgica, segure o caranguejo anestesiado usando luvas grossas de algodão e cubra-o com uma toalha de algodão molhada. Use pinças estéreis para segurar um olho do caranguejo e corte rapidamente o talo ocular com tesoura cirúrgica. No pós-operatório, prepare um tanque aéreo com 20 partes por mil de água do mar filtrada com aeração contínua.Conecte um tubo flexível com o tanque para fluxo de água gravitacional. Coloque o caranguejo em uma cesta e submeta-o à água do mar fluindo do tanque superior. Monitore o caranguejo sob a água do mar até que ele possa se mover espontaneamente.Coloque os caranguejos individualmente em outro aquário com água do mar por 30 minutos para observação posterior. Selecionar aleatoriamente fêmeas recém-maduras que não tenham sido submetidas à ablação do pedúnculo ocular. Após a remoção da carapaça superior e do hepatopâncreas, observar e identificar o estágio de maturação do ovário do caranguejo.Os estágios de maturação ovariana podem ser identificados com base em sua coloração, sendo o estágio imaturo um branco translúcido ou cremoso, o estágio inicial de maturação dois sendo pálido a amarelo claro, o estágio pré-maturado três sendo amarelo a laranja claro, e o estágio quatro totalmente maduro sendo de cor laranja escura a avermelhada. A taxa de maturação das gônadas foi maior nas fêmeas com haste ocular em relação às que não foram abladas. A maior porcentagem de ovários em estágio três foi encontrada em caranguejos fêmeas com haste ocular.A análise de variância one-way mostrou diferenças significativas entre os estágios de maturação ovariana das fêmeas experimentais. O grupo controle apresentou maior prevalência de fêmeas imaturas em relação aos grupos ablados. Apenas os grupos ablados foram capazes de produzir caranguejos fêmeas estágio quatro a partir de um estágio imaturo 30 dias após o tratamento.É importante garantir que o pedúnculo ocular do caranguejo de lama tenha sido totalmente ablado, após a técnica de cauterização ou cirurgia. A ablação ocular permite que os criadores de crustáceos induzam a maturação e a muda ovariana facilmente. Também permite que os pesquisadores investiguem mais a fundo o papel do pedúnculo ocular na regulação da reprodução do caranguejo da lama.

Research

JoVE Journal

Biology

Using Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) to Develop Diagnostic Tools

Using Micro-Electro-Mechanical Systems MEMS to Develop Diagnostic Tools

Usando Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) para desenvolver ferramentas de diagnóstico

Biologia

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In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo de imagens e tratamentos terapêuticos em um modelo de camundongo ortotópico de câncer de ovário

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

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Ablação a laser da Pronephros Zebrafish para estudo da regeneração epitelial renal

Acute kidney injury (AKI) is characterized by high mortality rates from deterioration of renal function over a period of hours or days that culminates in ...

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Avaliação do mouse microinjeção de oócitos, maturação e ploidia

Mistakes in chromosome segregation lead to aneuploid cells.  In somatic cells, aneuploidy is associated with cancer but in gametes, aneuploidy leads to ...

Endothelial Cell Co-culture Mediates Maturation of Human Embryonic Stem Cell to Pancreatic Insulin Producing Cells in a Directed Differentiation Approach

Células endoteliais em co-cultura Maturação media de células estaminais humanas embrionárias a células pancreáticas produtoras de insulina em uma abordagem diferenciada Direção

Embryonic stem cells (ESC) have two main characteristics: they can be indefinitely propagated in vitro in an undifferentiated state and they are ...

Benefits of Cardiac Resynchronization Therapy in an Asynchronous Heart Failure Model Induced by Left Bundle Branch Ablation and Rapid Pacing

Benefícios da terapia de ressincronização cardíaca em um modelo assíncrono de insuficiência cardíaca induzida por ablação de ramo esquerdo e ritmo rápido

It is now well recognized that heart failure (HF) patients with left bundle branch block (LBBB) derive substantial clinical benefits from cardiac ...

Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians

Técnicas reprodutivas para monitoramento e controle ovariano em anfíbios

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive ...

Bovine Ovarian Cortex Tissue Culture

Cultura do tecido do córtex ovariano bovino

Follicle development from the primordial to antral stage is a dynamic process within the ovarian cortex, which includes endocrine and paracrine factors ...

Megakaryocyte Culture in 3D Methylcellulose-Based Hydrogel to Improve Cell Maturation and Study the Impact of Stiffness and Confinement

Cultura de megacariócito em hidrogel baseado em metilcelulose 3D para melhorar a maturação celular e estudar o impacto da rigidez e confinamento

The 3D environment leading to both confinement and mechanical constraints is increasingly recognized as an important determinant of cell behavior. 3D ...