Name: eyestalk ablation to increase ovarian maturation in mud crabs
Uploaded: 2023-03-31T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs at JoVE.com

Это исследование было поддержано Министерством образования Малайзии в рамках программы Центра передового опыта высших учебных заведений (HICoE), Малайзия, аккредитованной при Институте тропической аквакультуры и рыболовства, Университет Малайзии Теренггану (Vot No 63933 и Vot No 56048). Мы выражаем признательность за поддержку Universiti Malaysia Terengganu и Sayap Jaya Sdn. Bhd. в рамках исследовательского гранта частного партнерства (Vot. No 55377). Также признана должность адъюнкт-научного сотрудника Университета Сайнс Малайзии для Хор Вайхо и Ханафии Фажан.

Этот протокол соответствует Малайзийскому кодексу практики по уходу за животными и их использованию в научных целях, изложенным Ассоциацией лабораторных животных Малайзии. Принесение в жертву экспериментальных образцов было сделано в соответствии с Руководством Национального инст?...

Этот протокол был разработан для абляции глазного стебля грязевого краба Scylla spp. и может применяться в качестве эффективного метода для стимуляции созревания гонад. Этот протокол может быть легко воспроизведен для коммерческого созревания яичников грязевых крабов и может быть ре...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65039">Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs</a>. The Introduction, Protocol, Discussion and References were&#160;updated.

Erratum: Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

Все четыре вида грязевых крабов, принадлежащие к роду Scylla, являются коммерчески важными видами ракообразных в аквакультуре 1,2. Рост ракообразных, в том числе грязевых крабов, и их трансформация из преждевременной (субвзрослой или пубертатной) фазы в половозрелую (взрослую) фазу происходят в процессе линьки, который включает периодическое сбрасывание старых и меньших экзоскелетов. Ширина панциря (CW), хелипеды и морфология брюшного лоскута широко используются для определения половой зрелости Scylla spp. 3,4,5. Процесс линьки регулируется действием различных гормонов и требует огромного количестваэнергии6. В дополнение к нормальному процессу линьки, потеря конечностей, добровольно или вызванная внешними факторами, ускоряет линьку крабов, не влияя на их выживаемость 7,8,9. Поэтому аутотомия конечностей обычно используется для индукции линьки в индустрии разведения грязевых крабовс мягким панцирем 7,9.
Односторонняя или двусторонняя абляция глазного стебля в основном популярна у пресноводных креветок и морских креветок для созревания гонад и производства семян 10,11,12,13. Распространенные методы абляции глазного стебля у ракообразных включают следующее: (i) лигирование у основания глазного стебля с использованием нити14,15; (ii) прижигание глазного стебля с помощью горячих щипцов или электрокоагуляционных устройств16; (iii) удаление или прямое защемление глазного стебля, чтобы оставить открытую рану12; и (iv) удаление содержимого глазного стебля через разрез после разрезания дистальной части глаза бритвой17. Х-органы глазного стебля являются важными эндокринными органами у ракообразных, поскольку они регулируют гипергликемические гормоны ракообразных (CHH), гормоны, ингибирующие линьку (MIH), и гормоны, ингибирующие вителлогенез (VIH)6,18,19,20,21,22. Х-органы глазного стебля (или комплекс синусовых желез) синтезируют и высвобождают гормоны, ингибирующие гонады (GIH), также известные как гормоны, ингибирующие вителлогенез (VIH), принадлежащие к семейству нейропептидных гормонов6. Односторонняя или двусторонняя абляция глазных стебельков снижает синтез GIH, что приводит к доминированию стимулирующих гормонов (т.е. гонадстимулирующих гормонов, GSH) и ускорению процесса созревания яичников у ракообразных23,24,25,26. Без влияния ГИГ после абляции глазных стебельков самки ракообразных посвящают свою энергию развитию яичников27. Было обнаружено, что односторонняя абляция глазных стебельков достаточна для индукции созревания яичников у ракообразных11 и что абляция глазного стебля креветок и крабов может восстанавливаться после нескольких линьк28. У Scylla spp. зарегистрировано четыре стадии развития яичников: i) незрелая (стадия-1), ii) раннеспелая (стадия-2), iii) предзрелая (стадия-3) и iv) полностью зрелая (стадия-4)29,30. Незрелая стадия яичников встречается у неполовозрелых самок. После пубертатной линьки и спаривания незрелая завязь начинает развиваться и, наконец, созревает (стадия-4) до нереста31.
Протокол абляции глазного стебля необходим для развития маточного стада грязевых крабов и производства семян. На мировом продовольственном рынке потребители предпочитают зрелых грязевых крабов с полностью зрелыми яичниками (стадия 4), а не крабов с более высоким содержанием мышц и, таким образом, имеют более высокую коммерческую ценность, даже выше, чем крупные самцы. Не существует полного протокола абляции глазного стебля грязевых крабов. Протокол абляции глазных стебельков в этой работе сводит к минимуму стресс за счет использования полностью анестезированных крабов и сводит к минимуму физические травмы персонала от укусов крабов. Этот протокол прост и экономичен. Здесь мы представляем протокол абляции глазных стебельков Scylla spp., который может вызвать созревание гонады. Были протестированы два метода абляции глазных стекол (прижигание и хирургическое вмешательство), и их эффективность сравнивалась на основе скорости развития гонад самок грязевых крабов.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aeration tube&#160;</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airstone</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave machine</td>
			<td>HIRAYAMA MANUFACTURING CORPORATION</td>
			<td>N/A</td>
			<td>MADE IN JAPAN</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleaching powder (Hi-Chlon 70%)</td>
			<td>Nippon Soda Co.Ltd,Japan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blow torch&#160;</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circular tank (32L)</td>
			<td>BEST PLASTIC INDUSTRY SDN. BHD.&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton hand gloves (thick)&#160;</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton towel</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital thermometer</td>
			<td>Hanna Instrument</td>
			<td>HI9814</td>
			<td>Hanna&#160;Instruments&#160;GroLine Hydroponics Waterproof pH / EC / TDS / Temp. Portable Meter HI9814</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Vernier Caliper</td>
			<td>INSIZE Co., Ltd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting tray</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dropper bottle/Plastic Pipettes Dropper</td>
			<td>Shopee Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>Thermo Scientific Chemicals</td>
			<td>033361.M1</td>
			<td>Diluted to 70% using double distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiberglass tank (1 ton)</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine sand</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>collected from Sea beach of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>First Aid Kits</td>
			<td>Watsons Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat head nickel steel metal rod (Screw driver)</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Thermo Scientific Chemicals</td>
			<td>119690010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas cylinder (butane gas) for blow&#160; torch</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas lighter gun (long head)</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass beaker (100 mL))</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td>1000-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice bag&#160;</td>
			<td>Watsons Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perforated plastic baskets&#160;</td>
			<td>Eco-Shop Marketing Sdn. Bhd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVC pipe 15mm</td>
			<td>Bina Plastic Industries Sdn Bhd (HQ)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refractometer</td>
			<td>ATAGO CO.,LTD.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>Sharp Corporation Japan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Chest Freezer SHARP 110L - SJC 118</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scoop net</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td></td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seawater</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Siphoning pipe</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spray bottle</td>
			<td>Mr. DIY Sdn Bhd</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless surgical forceps&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless surgical scissors&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Submersible water pump&#160;</td>
			<td>AS</td>
			<td>N/A</td>
			<td>model: Astro 4000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tincture of iodine solution&#160; (Povidone Iodine)</td>
			<td>Farmasi Fajr Sdn Bhd</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue paper&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transparent plastic aquarium</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waterproof table</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

eyestalk ablation to increase ovarian maturation in mud crabs

Грязевые крабы (Scylla spp.) являются коммерчески важными видами ракообразных, которые можно найти по всему Индо-Западному Тихоокеанскому региону. Во время культивирования индукция созревания яичников важна для удовлетворения потребительского спроса на зрелых грязевых крабов и ускорения производства семян. Абляция глазного стебля является эффективным инструментом для ускорения созревания яичников у грязевых крабов. Тем не менее, не существует стандартного протокола для абляции глазного стебля грязевых крабов. В этом исследовании описаны два метода абляции глазных стебельков: прижигание (использование горячего металла для удаления глазного стебля анестезированного краба) и хирургическое вмешательство (удаление глазного стебля с помощью хирургических ножниц). Перед абляцией глазного стебля половозрелые самки (CW > 86 мм) были анестезированы с помощью пакета со льдом (-20 ° C) с морской водой. Когда температура воды достигала 4 °C, мешок со льдом вынимали из воды. Проточная морская вода (температура окружающей среды: 28 °C) использовалась для восстановления после анестезии сразу после абляции глазного стебля. Смертность не наступала ни во время, ни после процесса абляции глазных стебельков. Представленный здесь протокол абляции глазных стебельков ускорил созревание яичников грязевых крабов.

Созревание гонад Кремово-белые ткани яичников (незрелые яичники, стадия-1) были обнаружены у 100% рассеченных самок (n = 6) до проведения абляции глазных стебельков (рис. 2). Скорость созревания гонад у самок крабов с удаленным глазным стеблем (n = 63; 31 самка с техникой...

Watch this Scientific Journal Video about Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs at JoVE.com

Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

Два протокола абляции глазных стебельков (т.е. прижигание и хирургическое вмешательство) были выполнены на анестезированных самках крабов. Абляция глазного стебля грязевых крабов ускорила созревание яичников без снижения выживаемости.

Абляция глазных стебельков для увеличения созревания яичников у грязевых крабов

Mud crabs (Scylla spp.) are commercially important crustacean species that can be found throughout the Indo-West Pacific region. During culture, the ...

Описанный протокол минимизирует стресс во время абляции глазных стекол грязевых крабов, тем самым снижая смертность из-за абляции глазных стекол. Экономия времени является ключом к минимизации стресса для животных. Перед выполнением процедуры убедитесь, что все подготовлено.Начните с мытья здоровых, активных и преждевременных самок грязевых крабов хлорированной водопроводной водой, чтобы удалить мусор и паразитов. Замочите крабов в формальдегиде на 30 минут. Обеспечьте непрерывную и щадящую аэрацию воздушными камнями во время обработки формальдегидом.Затем используйте проточную морскую воду, чтобы промыть крабов, чтобы удалить остатки формальдегида. Чтобы выполнить прижигание крабового глазного стебля, начните с нагревания кончика металлического стержня паяльной лампой до тех пор, пока стержень не станет ярко-красным. Накройте обезболивающего краба влажным хлопчатобумажным полотенцем и зажмите один глазок краба стерилизованными щипцами.Прижмите раскаленный металлический наконечник к глазу краба примерно на 10-15 секунд, пока стебель не приобретет оранжевый или красновато-оранжевый цвет. Продезинфицируйте щипцы 70% этанолом и очистите их стерильной папиросной бумагой, чтобы избежать перекрестного загрязнения между крабами. После проведения абляции на всех крабах опустите металлический стержень в водопроводную воду.Для проведения хирургической абляции держите обезболивающего краба в плотных хлопчатобумажных перчатках и накройте его влажным хлопчатобумажным полотенцем. Используйте стерильные щипцы, чтобы удерживать один глаз краба, и быстро разрежьте глазной стебель хирургическими ножницами. После операции подготовьте верхний резервуар с фильтрованной морской водой на 20 частей на тысячу с непрерывной аэрацией.Соедините гибкую трубу с баком для гравитационного потока воды. Поместите краба в корзину и подвергните его проточной морской воде из верхнего резервуара. Следите за крабом под проточной морской водой, пока он не сможет двигаться самопроизвольно.Поместите крабов по отдельности в другой аквариум с морской водой на 30 минут для дальнейшего наблюдения. Случайным образом отбирают только что половозрелых самок, которые не подвергались абляции глазного стебля. После удаления верхнего панциря и гепатопанкреаса понаблюдайте и определите стадию созревания яичника краба.Стадии созревания яичников могут быть идентифицированы на основе их окраски: первая стадия незрелости - полупрозрачная или кремово-белая, вторая стадия раннего созревания - от бледно-желтого до светло-желтого цвета, третья стадия созревания - от желтого до светло-оранжевого, а четвертая стадия полного созревания - от темно-оранжевого до красноватого цвета. Скорость созревания гонад была выше у самок с удаленным глазным стеблем по сравнению с теми, которые не были удалены. Самый высокий процент яичников третьей стадии был обнаружен у самок крабов с удаленным глазным стеблем.Односторонний дисперсионный анализ показал значительные различия между стадиями созревания яичников экспериментальных самок крабов. Контрольная группа имела более высокую распространенность неполовозрелых самок крабов по сравнению с группами, подвергшимися абляции. Только группы, подвергшиеся абляции, смогли произвести самок крабов четвертой стадии из незрелой стадии через 30 дней после обработки.Важно убедиться, что глазной стебель грязевого краба был полностью удален после прижигания или хирургического вмешательства. Абляция глазного стебля позволяет фермерам, выращивающим ракообразных, легко вызывать созревание яичников и линьку. Это также позволяет исследователям глубже исследовать роль глазного стебля в регулировании размножения грязевых крабов.

Research

JoVE Journal

Biology

Using Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) to Develop Diagnostic Tools

Using Micro-Electro-Mechanical Systems MEMS to Develop Diagnostic Tools

Использование Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) для разработки средств диагностики

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

В естественных изображений и лечебных процедур в Ортотопическая мышиной модели рака яичников

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Laser Ablation of the Zebrafish Pronephros to Study Renal Epithelial Regeneration

Лазерной абляции предпочки данио рерио по изучению почечных эпителиальных Регенерация

Acute kidney injury (AKI) is characterized by high mortality rates from deterioration of renal function over a period of hours or days that culminates in ...

Mouse Oocyte Microinjection, Maturation and Ploidy Assessment

Микроинъекция мыши ооцитов, созревание и Плоидность Оценка

Mistakes in chromosome segregation lead to aneuploid cells.  In somatic cells, aneuploidy is associated with cancer but in gametes, aneuploidy leads to ...

Endothelial Cell Co-culture Mediates Maturation of Human Embryonic Stem Cell to Pancreatic Insulin Producing Cells in a Directed Differentiation Approach

Эндотелиальных клеток со-культуры посредником Созревание эмбриональных стволовых клеток человека в поджелудочной железы инсулин продуцирующих клеток в направленной дифференцировки подход

Embryonic stem cells (ESC) have two main characteristics: they can be indefinitely propagated in vitro in an undifferentiated state and they are ...

Benefits of Cardiac Resynchronization Therapy in an Asynchronous Heart Failure Model Induced by Left Bundle Branch Ablation and Rapid Pacing

Преимущества ресинхронизирующей терапии в модели асинхронного сердечной недостаточности, индуцированных левой расслоение филиал абляции и быстрых темпов

It is now well recognized that heart failure (HF) patients with left bundle branch block (LBBB) derive substantial clinical benefits from cardiac ...

Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians

Репродуктивные методы мониторинга и контроля яичников у амфибий

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive ...

Bovine Ovarian Cortex Tissue Culture

Культура ткани коры яичников крупного рогатого скота

Follicle development from the primordial to antral stage is a dynamic process within the ovarian cortex, which includes endocrine and paracrine factors ...

Megakaryocyte Culture in 3D Methylcellulose-Based Hydrogel to Improve Cell Maturation and Study the Impact of Stiffness and Confinement

Культура мегакариоцитов в 3D-гидрогеле на основе метилцеллюлозы для улучшения созревания клеток и изучения влияния жесткости и удержания

The 3D environment leading to both confinement and mechanical constraints is increasingly recognized as an important determinant of cell behavior. 3D ...