Name: eyestalk ablation to increase ovarian maturation in mud crabs
Uploaded: 2023-03-31T13:30:00
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Este estudio fue apoyado por el Ministerio de Educación, Malasia, bajo el programa del Centro de Excelencia de la Institución Superior (HICoE), Malasia, acreditado ante el Instituto de Acuicultura y Pesca Tropical, Universiti Malaysia Terengganu (Vot No. 63933 & Vot No. 56048). Reconocemos el apoyo de Universiti Malaysia Terengganu y Sayap Jaya Sdn. Bhd. a través de la Beca de Investigación de Asociación Privada (Vot. No. 55377). También se reconoce un puesto de becario académico adjunto de la Universidad Sains de Malasia a Khor Waiho y Hanafiah Fazhan.

Este protocolo sigue el Código de Prácticas de Malasia para el Cuidado y Uso de Animales con Fines Científicos descrito por la Asociación de Ciencia de Animales de Laboratorio de Malasia. El sacrificio de las muestras experimentales se realizó de acuerdo con la Guía de los Institutos Nacionales de Salud para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (NIH Publications No. 8023, revisada en 1978). Los cangrejos de fango hembra sexualmente prematuros (cangrejo de fango naranja S. olivacea) fueron recolectad...

Este protocolo fue desarrollado para la ablación del tallo ocular del cangrejo de fango, Scylla spp., y se puede aplicar como un método eficiente para inducir la maduración de las gónadas. Este protocolo se puede replicar fácilmente para la maduración comercial de los ovarios de los cangrejos de fango y se puede implementar para reducir el período latente (tiempo de un desove a otro) en la producción de semillas de cangrejo de fango.
La ablación del tallo ocular de los crust?...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65039">Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs</a>. The Introduction, Protocol, Discussion and References were&#160;updated.

Erratum: Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

Las cuatro especies de cangrejo de fango pertenecientes al género Scylla son especies de crustáceos comercialmente importantes en la acuicultura 1,2. El crecimiento de crustáceos, incluidos los cangrejos de fango, y su transformación de la fase prematura (subadulta o pubertal) a la fase sexualmente madura (adulto) ocurre a través de un proceso de muda que implica el desprendimiento periódico de exoesqueletos más viejos y más pequeños. El ancho del caparazón (CW), los quelípedos y las morfologías del colgajo abdominal se usan ampliamente para determinar la madurez sexual de Scylla spp. 3,4,5. El proceso de muda está regulado por la acción de varias hormonas y requiere una gran cantidad de energía6. Además del proceso normal de muda, la pérdida de extremidades, ya sea voluntaria o inducida por factores externos, acelera la muda de los cangrejos sin afectar su tasa de supervivencia 7,8,9. Por lo tanto, la autotomía de extremidades se utiliza comúnmente para la inducción de muda en la industria de cultivo de cangrejo de fango de caparazónblando 7,9.
La ablación unilateral o bilateral del tallo ocular es más popular en camarones de agua dulce y camarones marinos para la maduración de las gónadas y la producción de semillas10,11,12,13. Las técnicas comunes de ablación del tallo ocular en crustáceos incluyen las siguientes: (i) ligadura en la base del tallo ocular usando una cuerda14,15; (ii) cauterización del tallo ocular utilizando fórceps calientes o dispositivos de electrocauterio16; (iii) extracción o pellizco directo del tallo ocular para dejar una herida abierta12; y (iv) extracción del contenido del tallo ocular a través de la incisión después de cortar la porción distal del ojo con una navaja de afeitar17. Los órganos X del tallo ocular son órganos endocrinos importantes en los crustáceos, ya que regulan las hormonas hiperglucémicas (CHH) de los crustáceos, las hormonas inhibidoras de la muda (MIH) y las hormonas inhibidoras de la vitelogénesis (VIH)6,18,19,20,21,22. Los órganos X de Eyestalk (o el complejo de glándulas sinusales) sintetizan y liberan hormonas inhibidoras de las gónadas (GIH), también conocidas como hormonas inhibidoras de la vitelogénesis (VIH), pertenecientes a la familia de hormonas neuropeptídicas6. La ablación unilateral o bilateral del tallo ocular reduce la síntesis de GIH, resultando en el predominio de hormonas estimulantes (es decir, hormonas estimulantes de gónadas, GSH) y la aceleración del proceso de maduración ovárica en crustáceos23,24,25,26. Sin la influencia de la GIH después de la ablación ocular, las hembras de crustáceo dedican su energía al desarrollo de los ovarios27. Se ha encontrado que la ablación unilateral del tallo ocular es suficiente para la inducción de la maduración ovárica en crustáceos11 y que el tallo ocular ablacionado de camarones y cangrejos puede regenerarse después de varias mudas28. Hay cuatro etapas de desarrollo ovárico registradas en Scylla spp.: i) inmadura (etapa-1), ii) maduración temprana (etapa-2), iii) premaduración (etapa-3) y iv) completamente madura (etapa-4)29,30. La etapa ovárica inmadura se encuentra en mujeres inmaduras. Después de la muda puberal y el apareamiento, el ovario inmaduro comienza a desarrollarse y finalmente madura (etapa 4) antes de desovar31.
Un protocolo de ablación del tallo ocular es esencial para el desarrollo de reproductores de cangrejo de fango y la producción de semillas. En el mercado mundial de alimentos, los consumidores prefieren los cangrejos de fango maduros con ovarios completamente maduros (etapa 4) en lugar de cangrejos con mayor contenido muscular y, por lo tanto, tienen un valor comercial más alto, incluso más alto que los machos grandes. No existe un protocolo completo para la ablación ocular de los cangrejos de fango. El protocolo de ablación del tallo ocular en este trabajo minimiza el estrés mediante el uso de cangrejos completamente anestesiados y minimiza las lesiones físicas al personal por mordeduras de cangrejo. Este protocolo es fácil y rentable. Aquí, presentamos un protocolo para la ablación ocular de Scylla spp. que puede inducir la maduración de la gónada. Se probaron dos técnicas de ablación del tallo ocular (cauterización y cirugía) y se compararon sus eficiencias en función de la tasa de desarrollo gonadal de las hembras de cangrejo de fango.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aeration tube&#160;</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airstone</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave machine</td>
			<td>HIRAYAMA MANUFACTURING CORPORATION</td>
			<td>N/A</td>
			<td>MADE IN JAPAN</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleaching powder (Hi-Chlon 70%)</td>
			<td>Nippon Soda Co.Ltd,Japan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blow torch&#160;</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circular tank (32L)</td>
			<td>BEST PLASTIC INDUSTRY SDN. BHD.&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton hand gloves (thick)&#160;</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton towel</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital thermometer</td>
			<td>Hanna Instrument</td>
			<td>HI9814</td>
			<td>Hanna&#160;Instruments&#160;GroLine Hydroponics Waterproof pH / EC / TDS / Temp. Portable Meter HI9814</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Vernier Caliper</td>
			<td>INSIZE Co., Ltd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting tray</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dropper bottle/Plastic Pipettes Dropper</td>
			<td>Shopee Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>Thermo Scientific Chemicals</td>
			<td>033361.M1</td>
			<td>Diluted to 70% using double distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiberglass tank (1 ton)</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine sand</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>collected from Sea beach of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>First Aid Kits</td>
			<td>Watsons Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat head nickel steel metal rod (Screw driver)</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Thermo Scientific Chemicals</td>
			<td>119690010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas cylinder (butane gas) for blow&#160; torch</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas lighter gun (long head)</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass beaker (100 mL))</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td>1000-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice bag&#160;</td>
			<td>Watsons Malaysia</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perforated plastic baskets&#160;</td>
			<td>Eco-Shop Marketing Sdn. Bhd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVC pipe 15mm</td>
			<td>Bina Plastic Industries Sdn Bhd (HQ)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refractometer</td>
			<td>ATAGO CO.,LTD.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>Sharp Corporation Japan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Chest Freezer SHARP 110L - SJC 118</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scoop net</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td></td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seawater</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Siphoning pipe</td>
			<td>MR D.I.Y. Group Berhad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spray bottle</td>
			<td>Mr. DIY Sdn Bhd</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless surgical forceps&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless surgical scissors&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Submersible water pump&#160;</td>
			<td>AS</td>
			<td>N/A</td>
			<td>model: Astro 4000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tincture of iodine solution&#160; (Povidone Iodine)</td>
			<td>Farmasi Fajr Sdn Bhd</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue paper&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transparent plastic aquarium</td>
			<td>Ming Yu Three</td>
			<td>N/A</td>
			<td>aquarium and pet shop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waterproof table</td>
			<td>Hatcheri AKUATROP&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

eyestalk ablation to increase ovarian maturation in mud crabs

Los cangrejos de fango (Scylla spp.) son especies de crustáceos comercialmente importantes que se pueden encontrar en toda la región del Indo-Pacífico occidental. Durante el cultivo, la inducción de la maduración ovárica es importante para satisfacer la demanda de los consumidores de cangrejos de fango maduros y acelerar la producción de semillas. La ablación del tallo ocular es una herramienta eficaz para mejorar la maduración ovárica en cangrejos de fango. Sin embargo, no existe un protocolo estándar para la ablación ocular de los cangrejos de fango. En este estudio, se describen dos técnicas de ablación del tallo ocular: cauterización (el uso de metal caliente para extirpar el tallo ocular de un cangrejo anestesiado) y cirugía (la eliminación del tallo ocular con tijeras quirúrgicas). Antes de la ablación del tallo ocular, las hembras sexualmente maduras (CW > 86 mm) fueron anestesiadas usando una bolsa de hielo (-20 ° C) con agua de mar. Cuando la temperatura del agua alcanzó los 4 °C, la bolsa de hielo se retiró del agua. El agua de mar que fluye (temperatura ambiente: 28 ° C) se utilizó para la recuperación de la anestesia inmediatamente después de la ablación del tallo ocular. La mortalidad no ocurrió durante o después del proceso de ablación del tallo ocular. El protocolo de ablación del tallo ocular presentado aquí aceleró la maduración ovárica de los cangrejos de fango.

Maduración de las gónadas Se encontraron tejidos ováricos blancos cremosos (ovarios inmaduros, estadio-1) en el 100% de las hembras disecadas (n = 6) antes de realizar la ablación del tallo ocular (Figura 2). La tasa de maduración de las gónadas de los cangrejos hembras ablacionados (n = 63; 31 hembras con la técnica de cauterización y 32 hembras con la técnica quirúrgica) fue mayor en comparación con las hembras de cangrejo que no fueron sometidas a ablación ...

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Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

Se realizaron dos protocolos de ablación del tallo ocular (es decir, enfoques de cauterización y cirugía) en cangrejos hembra anestesiados. La ablación ocular de los cangrejos de barro aceleró la maduración de los ovarios sin disminuir la tasa de supervivencia.

Ablación del tallo ocular para aumentar la maduración ovárica en cangrejos de fango

Mud crabs (Scylla spp.) are commercially important crustacean species that can be found throughout the Indo-West Pacific region. During culture, the ...

El protocolo descrito minimiza el estrés durante la ablación ocular de los cangrejos de fango, reduciendo así la aparición de mortalidad debido a la ablación del tallo ocular. La eficiencia del tiempo es la clave para minimizar el estrés de los animales. Asegúrese de que todo esté preparado antes de realizar el procedimiento.Comience lavando los cangrejos de fango hembras saludables, activos y prematuros con agua del grifo clorada para eliminar cualquier residuo y parásito. Remoje los cangrejos en formaldehído durante 30 minutos. Asegurar la aireación continua y suave con piedras de aire durante el tratamiento con formaldehído.A continuación, use agua de mar que fluye para lavar los cangrejos para eliminar cualquier formaldehído residual. Para realizar la cauterización del tallo ocular del cangrejo, comience calentando la punta de una varilla de metal con un soplete hasta que la varilla esté de color rojo brillante. Cubra un cangrejo anestesiado con una toalla de algodón húmeda y sostenga un ojo del cangrejo con fórceps esterilizados.Presione la punta de metal rojo caliente sobre el ojo del cangrejo durante unos 10 a 15 segundos hasta que el tallo ocular se vuelva de color naranja o naranja rojizo. Desinfecte las pinzas con etanol al 70% y límpielas con papel de seda estéril para garantizar que no haya contaminación cruzada entre cangrejos. Después de realizar la ablación en todos los cangrejos, sumerja la varilla de metal en agua del grifo.Para realizar la ablación quirúrgica, sostenga el cangrejo anestesiado con guantes gruesos de algodón y cúbralo con una toalla de algodón húmeda. Use fórceps estériles para sostener un ojo del cangrejo y corte rápidamente el tallo ocular con tijeras quirúrgicas. Después de la cirugía, prepare un tanque superior con agua de mar filtrada de 20 partes por mil con aireación continua.Conecte una tubería flexible con el tanque para el flujo de agua gravitacional. Coloque el cangrejo en una canasta y sométalo al agua de mar que fluye desde el tanque superior. Controle el cangrejo bajo el agua de mar que fluye hasta que pueda moverse espontáneamente.Coloque los cangrejos individualmente en otro acuario con agua de mar durante 30 minutos para una mayor observación. Seleccione al azar hembras recién maduras que no se hayan sometido a ablación ocular. Después de retirar el caparazón superior y el hepatopáncreas, observe e identifique la etapa de maduración del ovario de cangrejo.Las etapas de maduración ovárica se pueden identificar en función de su coloración, siendo la etapa inmadura uno translúcida o blanca cremosa, la etapa de maduración temprana dos siendo de color amarillo pálido a amarillo claro, la etapa de premaduración tres siendo amarilla a naranja claro, y la etapa cuatro completamente madura siendo de color naranja oscuro a rojizo. La tasa de maduración de las gónadas fue mayor en las hembras ablacionadas con tallo ocular en relación con las que no fueron ablacionadas. El mayor porcentaje de ovarios en etapa tres se encontró en cangrejos hembra ablacionados por el tallo ocular.El análisis unidireccional de la varianza mostró diferencias significativas entre las etapas experimentales de maduración ovárica de los cangrejos hembra. El grupo de control tuvo una mayor prevalencia de cangrejos hembras inmaduras en relación con los grupos ablacionados. Solo los grupos ablacionados pudieron producir cangrejos hembras en etapa cuatro desde una etapa inmadura 30 días después del tratamiento.Es importante asegurarse de que el tallo ocular del cangrejo de fango se haya ablacionado completamente después de la cauterización o la técnica quirúrgica. La ablación del tallo ocular permite a los criadores de crustáceos inducir la maduración ovárica y la muda fácilmente. También permite a los investigadores investigar más a fondo el papel del tallo ocular en la regulación de la reproducción del cangrejo de fango.

Research

JoVE Journal

Biology

Using Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) to Develop Diagnostic Tools

Using Micro-Electro-Mechanical Systems MEMS to Develop Diagnostic Tools

Utilizando Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) para desarrollar herramientas de diagnóstico

Investigación

Biología

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

En vivo de imágenes y tratamientos terapéuticos en un modelo de ratón ortotópico de cáncer de ovario

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Laser Ablation of the Zebrafish Pronephros to Study Renal Epithelial Regeneration

La ablación con láser de la pronefros pez cebra para el Estudio de la regeneración epitelial renal

Acute kidney injury (AKI) is characterized by high mortality rates from deterioration of renal function over a period of hours or days that culminates in ...

Mouse Oocyte Microinjection, Maturation and Ploidy Assessment

La microinyección de ovocitos de ratón, Maduración y Evaluación de ploidía

Mistakes in chromosome segregation lead to aneuploid cells.  In somatic cells, aneuploidy is associated with cancer but in gametes, aneuploidy leads to ...

Endothelial Cell Co-culture Mediates Maturation of Human Embryonic Stem Cell to Pancreatic Insulin Producing Cells in a Directed Differentiation Approach

Células endoteliales Co-cultura media la maduración de embriones humanos de células madre a las células productoras de insulina del páncreas en un enfoque de diferenciación dirigida

Embryonic stem cells (ESC) have two main characteristics: they can be indefinitely propagated in vitro in an undifferentiated state and they are ...

Benefits of Cardiac Resynchronization Therapy in an Asynchronous Heart Failure Model Induced by Left Bundle Branch Ablation and Rapid Pacing

Beneficios de la terapia de resincronización cardiaca en un modelo asincrónico insuficiencia cardíaca inducida por la ablación de rama de paquete izquierdo y estimulación rápida

It is now well recognized that heart failure (HF) patients with left bundle branch block (LBBB) derive substantial clinical benefits from cardiac ...

Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians

Técnicas Reproductivas para el Monitoreo y Control de La Ovacada en Anfibios

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive ...

Bovine Ovarian Cortex Tissue Culture

Cultivo de tejido de corteza ovárica bovina

Follicle development from the primordial to antral stage is a dynamic process within the ovarian cortex, which includes endocrine and paracrine factors ...

Megakaryocyte Culture in 3D Methylcellulose-Based Hydrogel to Improve Cell Maturation and Study the Impact of Stiffness and Confinement

Cultivo de megacariocitos en hidrogel 3D a base de metilcelulosa para mejorar la maduración celular y estudiar el impacto de la rigidez y el confinamiento

The 3D environment leading to both confinement and mechanical constraints is increasingly recognized as an important determinant of cell behavior. 3D ...