Dit protocol zal de toegankelijkheid van onderzoek naar de baarmoederosacrale ligament- en bekkenbodemaandoeningen, zoals bekkenorgaanprolaps of POP, uitbreiden en de dissectie van spiegelend bekkenbodemweefsel vergemakkelijken. Deze techniek maakt de isolatie van beide baarmoedersivarale ligamenten van een muis mogelijk met behoud van anatomische aanhechtingen en het ophalen van de omliggende bekkenbodemorganen. Onze methode stelt een preklinisch model vast dat deze studie mogelijk maakt van hoe zwangerschap of ziekte weefselmechanisch gedrag beïnvloedt.
Deze methode vormt een nieuw instrument voor onderzoek naar de gezondheid van vrouwen. De belangrijkste strijd is het identificeren en hanteren van het baarmoedersifaalligament. Mijn advies is om voldoende tijd en zorg te nemen omdat deze weefsels klein en fragiel zijn.
Begin met het plaatsen van een geëuthanaseerde muis op een pad en het vastpinnen van de vier ledematen. Maak een één tot 1,5 centimeter lange incisie op de buik met een schaar. Scheid de huid voorzichtig aan de craniale, caudale en laterale zijden van de incisie.
Draai de muis om naar de dorsale kant naar boven te kijken en pel de huid voorzichtig terug naar de achterpoten. Pin de ledematen en maak een een centimeter lange incisie in de buik van de thorax naar het bekken. Duw de organen voorzichtig naar de thorax voor een duidelijk zicht.
Na irrigatie met PBS met behulp van een tang, trek en verwijder het bekkenvetweefsel. Identificeer de baarmoederhoorns en snijd ze vervolgens uit de eierstokken. Trek ze nu uit het gezichtsveld en verbreek de cervicale verbinding.
Snijd de urineleiders af van de blaasverbinding. Snijd de dikke darm zo dicht mogelijk bij de baarmoederhals. Plaats de muis met de pad onder een ontleedbereik om de baarmoedersifaal ligamenten te visualiseren.
Gebruik een tang om het omringende vet voorzichtig uit de baarmoeder-, geostacrale ligamenten te verwijderen. Bind een 5-0 hechting rond het cervicale uiteinde van beide ligamenten. Snijd het cervicale uiteinde van het baarmoederosacrale ligament door, waardoor een stuk van de baarmoederhals blijft zitten.
Snijd nu een stuk spier van de onderkant van het ligament. Plaats het ontleedde weefsel in een bad met PBS om de weefselhydratatie te behouden. Snijd het cervicale uiteinde van het resterende weefsel en laat een stuk baarmoederhals achter voor mechanische testen en beeldvorming.
Zodra het vet is opgeruimd, houdt u de blaas vast met een tang en tilt u deze voorzichtig op in een hoek van ongeveer 40 graden. Gebruik een schaar om de blaas aan de distale kant vlak boven de baarmoederhals te knippen. Plaats de blaas in een bad met PBS om de hydratatie te behouden.
Gebruik nu de tang om de baarmoederhals onder een geschatte hoek van 40 graden op te tillen. Identificeer de rectovaginale fascia die het rectum en de baarmoederhals verbindt en verbreek de verbinding met het scalpel. Gebruik een schaar om het schaambeen bij de schaamstreeksynthese te knippen.
Verbreed de bekkenbodem voorzichtig om de zichtbaarheid van de weefselinbrengingen te vergroten. Houd de baarmoederhals vast met een tang en snijd deze zo dicht mogelijk bij de vulva. Plaats het weefsel in PBS om de hydratatie te behouden.
Gebruik de tang om het rectum voorzichtig naar de thorax te trekken. Identificeer het rectum en snijd het bij de anus. Plaats het rectum in PBS om de hydratatie te behouden.
Zodra alle weefsels van belang zijn geoogst, ontwricht u de dijbenen van het bekken. Snijd het bekkenbot van de distale en proximale uiteinden. Plaats het ontleedde weefsel in PBS.
De enzymbehandeling bleek de gemiddelde axiale piek en ontspannen stressoren te verminderen die het uterosacrale ligament ervaart bij voorgeschreven globale verplaatsingen, wat aangeeft dat collageen en glycosaminoglycanen bijdroegen aan axiale stijfheid van de ligamenten. De gemiddelde axiale stammen voor elk mechanisch getest monster geven aan dat de globale axiale stam in de met enzymen behandelde monsters vergelijkbaar was met of groter was dan het gecontroleerde monster, wat suggereert dat de vermindering van macroscopische stress te wijten was aan enzymbehandeling, in plaats van kleinere stammen. Raman-spectroscopie van het tussenliggende gedeelte van het baarmoederslijmvlies suggereert dat enzymbehandelingen de biochemische samenstelling van de muriene uterosacrale ligamenten hebben veranderd.
De met collagenase behandelde uterosacrale ligamenten hadden een verlaagd collageengehalte, evenals verminderd water en hyaluronzuur. Chondroitinase-behandelde uterosacrale ligamenten hadden minder hyaluronzuur, evenals een lager water- en collageengehalte. Aandacht voor detail is erg belangrijk, vooral bij het opruimen van het feit dat afzettingen rond de USL en bekkenorganen hier nodig zijn om schade aan de USL en de omliggende weefsels te voorkomen.
Verder onderzoek kan worden uitgevoerd op de USL en andere bekkenbodemweefsels met behulp van muizen met genetische variaties waarvan wordt verondersteld dat ze POP beïnvloeden. Ons protocol maakt al een reeks nieuwe studies mogelijk, waaronder onderzoek naar hoe het mechanische gedrag van USL's een functie van zwangerschap verandert, wat een belangrijke risicofactor is voor POP.