Name: elucidating the metabolism of 2,4-dibromophenol in plants
Uploaded: 2023-02-10T12:25:00
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本研究は、中国国家自然科学基金会(21976160)および浙江省公共福祉技術応用研究プロジェクト(LGF21B070006)の支援を受けて行われました。

1. ニンジンカルスの分化
注意: ここで使用するすべての機器をオートクレーブし、UV滅菌された超クリーンワークベンチですべての操作を実行します。
<ol><li>均一なニンジン種子(Daucus carota var. sativus)を4°Cの脱イオン水に16時間浸して種子を春化します。</li>
	<li>春化種子を75%エタノールで20分間表面滅菌した後、無菌条件下で滅菌脱イオン水で3回すす...

<ol>
	<li>Chakraborty, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Baseline+investigation+on+plasticizers,+bisphenol+A,+polycyclic+aromatic+hydrocarbons+and+heavy+metals+in+the+surface+soil+of+the+informal+electronic+waste+recycling+workshops+and+nearby+open+dumpsites+in+Indian+metropolitan+cities.">Baseline investigation on plasticizers, bisphenol A, polycyclic aromatic hydrocarbons and heavy metals in the surface soil of the informal electronic waste recycling workshops and nearby open dumpsites in Indian metropolitan cities.</a> Environmental Pollution. 248, 1036-1045 (2019).</li><li>Abril, C., Santos, J. L., Martin, J., Aparicio, I., Alonso, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occurrence,+fate+and+environmental+risk+of+anionic+surfactants,+bisphenol+A,+perfluorinated+compounds+and+personal+care+products+in+sludge+stabilization+treatments.">Occurrence, fate and environmental risk of anionic surfactants, bisphenol A, perfluorinated compounds and personal care products in sludge stabilization treatments.</a> Science of the Total Environment. 711, 135048 (2020).</li><li>Xu, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+and+occurrence+of+bisphenol+A+and+thirteen+structural+analogs+in+soil.">Determination and occurrence of bisphenol A and thirteen structural analogs in soil.</a> Chemosphere. 277, 130232 (2021).</li><li>Cai, Q. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occurrence+of+nonylphenol+and+nonylphenol+monoethoxylate+in+soil+and+vegetables+from+vegetable+farms+in+the+Pearl+River+Delta,+South+China.">Occurrence of nonylphenol and nonylphenol monoethoxylate in soil and vegetables from vegetable farms in the Pearl River Delta, South China.</a> Archives of Environmental Contamination and Toxicology. 63 (1), 22-28 (2012).</li><li>Wang, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al+Migration+and+health+risks+of+nonylphenol+and+bisphenol+a+in+soil-winter+wheat+systems+with+long-term+reclaimed+water+irrigation.">et al Migration and health risks of nonylphenol and bisphenol a in soil-winter wheat systems with long-term reclaimed water irrigation.</a> Ecotoxicology and Environmental Safety. 158, 28-36 (2018).</li><li>Gunther, K., Racker, T., Bohme, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+isomer-specific+approach+to+endocrine-disrupting+nonylphenol+in+infant+food.">An isomer-specific approach to endocrine-disrupting nonylphenol in infant food.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 65 (6), 1247-1254 (2017).</li><li>Van Eerd, L. L., Hoagland, R. E., Zablotowicz, R. M., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pesticide+metabolism+in+plants+and+microorganisms.">Pesticide metabolism in plants and microorganisms.</a> Weed Science. 51 (4), 472-495 (2003).</li><li>Hillebrands, L., Lamshoeft, M., Lagojda, A., Stork, A., Kayser, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+callus+cultures+to+elucidate+the+metabolism+of+tebuconazole,+flurtamone,+fenhexamid,+and+metalaxyl-M+in+Brassica+napus+L.,+Glycine+max+(L.)+Merr.,+Zea+mays+L.,+and+Triticum+aestivum+L.">Evaluation of callus cultures to elucidate the metabolism of tebuconazole, flurtamone, fenhexamid, and metalaxyl-M in Brassica napus L., Glycine max (L.) Merr., Zea mays L., and Triticum aestivum L.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 68 (48), 14123-14134 (2020).</li><li>Macherius, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolization+of+the+bacteriostatic+agent+triclosan+in+edible+plants+and+its+consequences+for+plant+uptake+assessment.">Metabolization of the bacteriostatic agent triclosan in edible plants and its consequences for plant uptake assessment.</a> Environmental Science &amp; Technology. 46 (19), 10797-10804 (2012).</li><li>Sun, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uptake+and+metabolism+of+nonylphenol+in+plants:+Isomer+selectivity+involved+with+direct+conjugation.">Uptake and metabolism of nonylphenol in plants: Isomer selectivity involved with direct conjugation.</a> Environmental Pollution. 270, 116064 (2021).</li><li>Schymanski, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+small+molecules+via+high+resolution+mass+spectrometry:+communicating+confidence.">Identifying small molecules via high resolution mass spectrometry: communicating confidence.</a> Environmental Science &amp; Technology. 48 (4), 2097-2098 (2014).</li><li>Moschet, C., Anumol, T., Lew, B. M., Bennett, D. H., Young, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Household+dust+as+a+repository+of+chemical+accumulation:+new+insights+from+a+comprehensive+high-resolution+mass+spectrometric+study.">Household dust as a repository of chemical accumulation: new insights from a comprehensive high-resolution mass spectrometric study.</a> Environmental Science &amp; Technology. 52 (5), 2878-2887 (2018).</li><li>Ren, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydroxylated+PBDEs+and+brominated+phenolic+compounds+in+particulate+matters+emitted+during+recycling+of+waste+printed+circuit+boards+in+a+typical+e-waste+workshop+of+South+China.">Hydroxylated PBDEs and brominated phenolic compounds in particulate matters emitted during recycling of waste printed circuit boards in a typical e-waste workshop of South China.</a> Environmental Pollution. 177, 71-77 (2013).</li><li>de Wit, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+brominated+flame+retardants+in+the+environment.">An overview of brominated flame retardants in the environment.</a> Chemosphere. 46 (5), 583-624 (2002).</li><li>Sun, J. Q., Chen, Q., Qian, Z. X., Zheng, Y., Yu, S. A., Zhang, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+Uptake+and+Metabolism+of+e,4-Dibromophenol+in+Carrot:+In+Vitro+Enzymatic+Direct+Conjugation.">Plant Uptake and Metabolism of e,4-Dibromophenol in Carrot: In Vitro Enzymatic Direct Conjugation.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 66 (17), 4328-4335 (2018).</li><li>Chibwe, L., Titaley, I. A., Hoh, E., Simonich, S. L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrated+framework+for+identifying+toxic+transformation+products+in+complex+environmental+mixtures.">Integrated framework for identifying toxic transformation products in complex environmental mixtures.</a> Environmental Science &amp; Technology Letters. 4 (2), 32-43 (2017).</li><li>Hollender, J., Schymanski, E. L., Singer, H. P., Ferguson, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nontarget+screening+with+high+resolution+mass+spectrometry+in+the+environment:+ready+to+go.">Nontarget screening with high resolution mass spectrometry in the environment: ready to go.</a> Environmental Science &amp; Technology. 51 (20), 11505-11512 (2017).</li><li>Nafisi, M., Fimognari, L., Sakuragi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interplays+between+the+cell+wall+and+phytohormones+in+interaction+between+plants+and+necrotrophic+pathogens.">Interplays between the cell wall and phytohormones in interaction between plants and necrotrophic pathogens.</a> Phytochemistry. 112, 63-71 (2015).</li><li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+metabolic+pathways+of+2,4,6-tribromophenol+in+rice+plants.">Multiple metabolic pathways of 2,4,6-tribromophenol in rice plants.</a> Environmental Science &amp; Technology. 53 (13), 7473-7482 (2019).</li><li>Hou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycosylation+of+tetrabromobisphenol+A+in+pumpkin.">Glycosylation of tetrabromobisphenol A in pumpkin.</a> Environmental Science &amp; Technology. 53 (15), 8805-8812 (2019).</li></ol>

このプロトコルは、植物における生体異物の生体内変化を効率的に同定するために開発されました。このプロトコルの重要なステップは、植物カルスの培養です。最も困難な部分は、植物カルスが植物組織に容易に感染して発達するため、植物カルスの分化と維持です。したがって、使用するすべての機器がオートクレーブ処理され、すべての操作が無菌条件下で実行されることを確認する?...

人為的活動により、ますます多くの有機汚染物質が環境に廃棄されており1,2、土壌はこれらの汚染物質の主要な吸収源と見なされています3,4。土壌中の汚染物質は植物に取り込まれ、作物の消費を通じて直接人体に侵入することにより、食物連鎖に沿って高等栄養レベルの生物に移動する可能性があり、その結果、意図しない曝露につながる可能性があります5,6。植物は解毒のために生体異物を代謝するためにさまざまな経路を利用します7;生体異物の代謝を解明することは、植物の汚染物質の実際の運命を制御するため、重要です。代謝産物は葉(大気中)または根から排泄される可能性があるため、曝露の非常に早い段階で代謝物を決定することで、拡張された数の代謝物を試験する可能性が得られます8。ただし、無傷の植物を使用した研究では、さまざまな要因の影響を受ける可能性のある長期的な実験と複雑なサンプル調製プロトコルが必要です。
したがって、植物カルス培養は、処理時間を大幅に短縮できるため、プランタ中の生体異物の代謝を研究するための優れた代替手段です。これらの培養は、微生物の干渉や光化学的分解を排除し、無傷の植物のマトリックス効果を単純化し、栽培条件を標準化し、実験の労力が少なくて済みます。植物カルス培養は、トリクロサン9、ノニルフェノール10、およびテブコナゾール8の代謝研究における代替アプローチとして首尾よく適用されています。これらの研究は、カルス培養における代謝パターンが無傷の植物の代謝パターンと類似していることを示した。この研究は、複雑で時間のかかるプロトコルなしで、植物中の生体異物の代謝物を効率的かつ正確に同定する方法を提案します。ここでは、植物カルス培養物を高分解能質量分析と組み合わせて使用し、低強度シグナル11,12を持つ代謝物の分析を行います。
この目的のために、ニンジン(Daucus carota var. sativus)カルス懸濁液を100 μg/Lの2,4-ジブロモフェノールに130 rpmおよび26°Cのシェーカーで120時間曝露しました。 2,4-ジブロモフェノールは、その破壊的な内分泌活性13 および土壌中の広範な発生のために選択されました14。代謝産物を抽出し、高分解能質量分析法で分析した。ここで提案されているプロトコルは、イオン化できる他のタイプの有機化合物の プランタ 代謝を調査することができます。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2,4-dichlorophenoxyacetic acid</td>
			<td>WAKO</td>
			<td>1 mg/L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20% H2O2</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.</td>
			<td>10011218-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-n-NP, &#62;99%</td>
			<td>Dr. Ehrenstorfer GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-n-NP-d4</td>
			<td>Pointe-Claire</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-benzylaminopurine</td>
			<td>WAKO</td>
			<td>0.5 mg/L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% ethanol</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.</td>
			<td>1269101-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7890A-5975&#160;gas chromatography</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACQULTY ultra-performance&#160;liquid chromatography</td>
			<td>Waters</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amber glass vials</td>
			<td>Waters</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial climate incubator</td>
			<td>Ningbo DongNan Lab Equipment Co.,LTD</td>
			<td>RDN-1000A-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclaves</td>
			<td>STIK</td>
			<td>MJ-Series</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C18 column</td>
			<td>ACQUITY UPLC BEH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DB-5MS capillary column</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>40071190-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freeze dryer</td>
			<td>SCIENTZ&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-throughput tissue grinder</td>
			<td>SCIENTZ&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicrOTOF-QII mass spectrometer</td>
			<td>Bruker Daltonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q system</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MS1922801-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murashige &#38; Skoog medium</td>
			<td>HOPEBIO</td>
			<td>HB8469-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-hexane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H109658-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrogen blowing instrument&#160;</td>
			<td>AOSHENG</td>
			<td>MD200-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NP isomers, &#62;99%</td>
			<td>Dr. Ehrenstorfer GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oasis HLB cartridges</td>
			<td>Waters</td>
			<td>60 mg/3 mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Research plus</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td>100-1000 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seeds of Little Finger carrot (Daucus carota var. sativus)&#160;</td>
			<td>Shouguang Seed Industry Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking&#160;Incubators</td>
			<td>Shanghai bluepard instruments Co.,ltd.</td>
			<td>THZ-98AB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid phase extractor</td>
			<td>AUTO SCIENCE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound machine</td>
			<td>ZKI</td>
			<td>UC-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-sterilized ultra-clean workbench</td>
			<td>AIRTECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

elucidating the metabolism of 2,4-dibromophenol in plants

土壌は環境に廃棄される汚染物質の主要な吸収源であるため、作物は有機汚染物質に広くさらされる可能性があります。これは、汚染物質が蓄積した食品の消費を通じて潜在的な人間の曝露を生み出します。作物における生体異物の取り込みと代謝を解明することは、ヒトの食事曝露リスクの評価に不可欠です。ただし、このような実験では、無傷の植物を使用するには、さまざまな要因の影響を受ける可能性のある長期の実験と複雑なサンプル調製プロトコルが必要です。高分解能質量分析(HRMS)と組み合わせた植物カルス培養は、微生物または真菌の微小環境からの干渉を回避し、処理期間を短縮し、無傷の植物のマトリックス効果を簡素化できるため、植物中の生体異物の代謝物を正確かつ時間を節約するためのソリューションを提供する可能性があります。代表的な難燃剤・内分泌かく乱物質である2,4-ジブロモフェノールは、土壌中で広く存在し、植物による取り込みの可能性からモデル物質として選定されました。本明細書において、植物カルスは、無菌種子から生成し、滅菌された2,4−ジブロモフェノール含有培養液に曝露した。結果は、2,4-ジブロモフェノールの8つの代謝産物が120時間のインキュベーション後に植物カルス組織で同定されたことを示した。これは、2,4-ジブロモフェノールが植物カルス組織で急速に代謝されたことを示しています。したがって、植物カルス培養プラットフォームは、植物における生体異物の取り込みおよび代謝を評価するための有効な方法である。

プロトコルのステップを 図1に示します。プロトコルに従って、2,4-ジブロモフェノール処理からのニンジンカルス抽出物のクロマトグラムを対照と比較し、2,4-ジブロモフェノール処理には存在するが対照には存在しない8つの異なるピークを発見しました(図2)。これは、2,4-ジブロモフェノール処理ニンジンカルスから合計8つの2,4-ジブロモフェノ?...

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Elucidating the Metabolism of 2,4-Dibromophenol in Plants

本プロトコルは、植物中の2,4−ジブロモフェノール代謝産物を同定するための簡単で効率的な方法を記載する。

植物における2,4-ジブロモフェノールの代謝を解明

Crops can be extensively exposed to organic pollutants, since soil is a major sink for pollutants discarded into the environment. This creates potential ...

植物カルス培養は、植物における生体異物の代謝分解を正確、効率的、かつ迅速に評価するためのソリューションを提供します。植物のカルス培養は、マイクロバイオームまたは真菌の干渉および光化学的分解を排除し、無傷の植物のマトリックス効果を単純化し、栽培条件を標準化し、処理期間を短縮し、より少ない実験努力を必要とする。本手法は、作物に対する様々な有機汚染物質の取り込み挙動や代謝機構の解明に役立ち、環境リスク評価の取り組みに有用である。まず、すべての機器をオートクレーブし、UV滅菌された超クリーンな作業台ですべての操作を実行します。春化種子表面を75%エタノールで20分間殺菌します。滅菌脱イオン水で3回すすぎ、20%過酸化水素で20分間滅菌します。滅菌脱イオン水で種子を6回洗浄した後、1%寒天ゲルを含むpH 5.8のオートクレーブ滅菌したホルモンフリーのムラシゲおよびスクーグ培地に播種して無菌的に発芽させ、摂氏26度で16時間のフォトピリオドで15日間インキュベートします。種子の孵化の15日後、苗の胚軸と子葉を0.5センチメートルの小片に切断して外植片を得る。オキシモンとフィコシアニンを添加した15〜20ミリリットルのオートクレーブ滅菌ムラシゲおよびスクーグ培地を含むシャーレで外植片を形質転換し、摂氏26度の暗所で3〜4週間インキュベートしてカルスを誘導します。滅菌メスと鉗子を使用して、最初の外植片から形成された直径約1センチメートルのカルスを分離します。処理には、2,4-ジブロモフェノールを10ミリリットルの無菌液ムラシゲおよびスクーグ培地に溶解します。次に、調製した2,4-ジブロモフェノール溶液に3グラムの分離したニンジンカルスを加える。原稿に記載されているようにブランクコントロールで培地を調製した後、すべてのフラスコを暗所でインキュベートします。サンプルを調製するには、0.45ミクロンのガラス繊維フィルターでろ過することにより、2,3-ジブロモフェノール処理および対照フラスコからカルスを注意深く分離します。カルスを超純水で3回洗浄してから採取してください。採取したすべてのカルスを凍結乾燥し、0.2グラムの乾燥カルスを70ヘルツのハイスループットティッシュグラインダーで3分間ホモジナイズします。ガラス製マイクロシリンジを使用して、50マイクロリットルのサロゲート重水素化4-n-ナノフェノールをホモジナイズしたカルスとボルテックスに1分間加えます。等比率のメタノールと水を含む5ミリリットルの溶液をスパイクカルスに加え、30分間超音波処理して2,4-ジブロモフェノールおよび代謝産物を抽出する。抽出後、懸濁液を8, 000 G、摂氏4度で10分間遠心分離し、ピペッティングによって上清を収集します。抽出物を親水性親油性平衡固相抽出またはHLB-SPEカートリッジに毎分1ミリリットルの流速で通します。HLB-SPEカートリッジに6ミリリットルのメタノールを通過させて分析対象物を希釈します。次に、得られた溶離液を窒素ガスの穏やかな流れの下で1ミリリットルに濃縮し、機器分析を行います。分析のために、カラムヒーターのドアを開きます。次に、カラム入口を注入バルブに接続し、出口を質量分析計の入口に接続して、超高速液体クロマトグラフィーカラムを取り付けます。溶剤チューブAとBの端を対応する溶剤ボトルに挿入します。シリアル番号別のサンプルバイアルをサンプルトレイの対応する位置に置き、サンプルトレイをサンプルチャンバーに再挿入します。ソフトウェアウィンドウで、[装置]、[インレットメソッド]の順にクリックして、液体クロマトグラムの条件を編集します。MSメソッドを選択し、マススペクトル分析のパラメータを設定します。[ファイル]、[新規作成] の順にクリックして、データベースを作成し、名前を付けます。上記で作成したサンプルプログラムを、MSファイルを選択し、続いてインレットファイルとボリュームの注入を選択してロードします。プロジェクトのサンプル フォルダーにデータベースを保存するには、[ファイル] と [保存] をクリックします。次に、メインソフトウェアウィンドウで[実行して開始]を選択し、[サンプルデータの取得]をクリックしてから、[サンプルリストの実行を開始]の[OK]ボタンをクリックしてデータを収集します。データを処理するには、目的のデータ行を選択し、クロマトグラムウィンドウをクリックしてMSスキャンクロマトグラムを表示します。クロマトグラムウィンドウで、[ディスプレイ]、[TIC]の順にクリックします。スキャンウェーブDSをクリックした後、トレースとOKを追加して、ドーターマススペクトルスキャンを取得します。2,4-ジブロモフェノール処理ニンジンカルス抽出物のクロマトグラムは、対照サンプルと比較して8つの異なる代謝物の存在を示しました。さらに、クロマトグラムに親2,4-ジブロモフェノールピークがないことは、実験条件下でのニンジンカルス中の2,4-ジブロモフェノールの急速な代謝を示しています。さらに、ニンジンカルス中でインキュベートされた2,4-ジブロモフェノールは、グルコースおよびアミノ酸との直接結合による代謝産物の形成をもたらした。すべての機器、ならびにムラシゲ培地およびスクーグ培地は、植物カルスの分化および維持が無菌条件下で行われるようにオートクレーブ滅菌する必要があります。この手順に従うオミクスアプローチは、環境汚染物質の明確な植物毒性機構の画像を作成することを可能にします。

Research

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This protocol describes the measurement of greenhouse gas (GHG) emissions from paddy soils using the static closed chamber technique. This method is based ...

Protocol for Producing Three-Dimensional Infrared Video of Freezing in Plants

植物の凍結の三次元赤外線ビデオを制作するためのプロトコル

Freezing in plants can be monitored using infrared (IR) thermography, because when water freezes, it gives off heat. However, problems with color contrast ...

A Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) Assay for Rapid Identification of Bemisia tabaci

A Loop-mediated Isothermal Amplification LAMP Assay for Rapid Identification of Bemisia tabaci

タバココナジラミの迅速同定のループ介在増幅法 (LAMP) アッセイ

The whitefly Bemisia tabaci (Gennadius) is an invasive pest of considerable importance, affecting the production of vegetable and ornamental crops in many ...

Xylem Water Distribution in Woody Plants Visualized with a Cryo-scanning Electron Microscope

クライオ走査型電子顕微鏡で可視化された木質植物のキシレム水分布

A scanning electron microscope installed cryo-unit (cryo-SEM) allows specimen observation at subzero temperatures and has been used for exploring water ...