Name: elucidating the metabolism of 2,4-dibromophenol in plants
Uploaded: 2023-02-10T12:25:00
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Este estudio contó con el apoyo de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (21976160) y el Proyecto de Investigación de Aplicación de Tecnología de Bienestar Público (LGF21B070006) de la provincia de Zhejiang.

1. Diferenciación del callo de zanahoria
NOTA: Autoclave todo el equipo utilizado aquí y realice todas las operaciones en un banco de trabajo ultralimpio esterilizado por UV.
<ol><li>Vernalizar las semillas sumergiendo las semillas uniformes de zanahoria (Daucus carota var. sativus) en agua desionizada a 4 °C durante 16 h.</li>
	<li>Esterilizar las semillas vernalizadas con etanol al 75% durante 20 minutos y luego enjuagar tres veces con agua desionizada estéril...

<ol>
	<li>Chakraborty, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Baseline+investigation+on+plasticizers,+bisphenol+A,+polycyclic+aromatic+hydrocarbons+and+heavy+metals+in+the+surface+soil+of+the+informal+electronic+waste+recycling+workshops+and+nearby+open+dumpsites+in+Indian+metropolitan+cities.">Baseline investigation on plasticizers, bisphenol A, polycyclic aromatic hydrocarbons and heavy metals in the surface soil of the informal electronic waste recycling workshops and nearby open dumpsites in Indian metropolitan cities.</a> Environmental Pollution. 248, 1036-1045 (2019).</li><li>Abril, C., Santos, J. L., Martin, J., Aparicio, I., Alonso, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occurrence,+fate+and+environmental+risk+of+anionic+surfactants,+bisphenol+A,+perfluorinated+compounds+and+personal+care+products+in+sludge+stabilization+treatments.">Occurrence, fate and environmental risk of anionic surfactants, bisphenol A, perfluorinated compounds and personal care products in sludge stabilization treatments.</a> Science of the Total Environment. 711, 135048 (2020).</li><li>Xu, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+and+occurrence+of+bisphenol+A+and+thirteen+structural+analogs+in+soil.">Determination and occurrence of bisphenol A and thirteen structural analogs in soil.</a> Chemosphere. 277, 130232 (2021).</li><li>Cai, Q. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occurrence+of+nonylphenol+and+nonylphenol+monoethoxylate+in+soil+and+vegetables+from+vegetable+farms+in+the+Pearl+River+Delta,+South+China.">Occurrence of nonylphenol and nonylphenol monoethoxylate in soil and vegetables from vegetable farms in the Pearl River Delta, South China.</a> Archives of Environmental Contamination and Toxicology. 63 (1), 22-28 (2012).</li><li>Wang, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al+Migration+and+health+risks+of+nonylphenol+and+bisphenol+a+in+soil-winter+wheat+systems+with+long-term+reclaimed+water+irrigation.">et al Migration and health risks of nonylphenol and bisphenol a in soil-winter wheat systems with long-term reclaimed water irrigation.</a> Ecotoxicology and Environmental Safety. 158, 28-36 (2018).</li><li>Gunther, K., Racker, T., Bohme, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+isomer-specific+approach+to+endocrine-disrupting+nonylphenol+in+infant+food.">An isomer-specific approach to endocrine-disrupting nonylphenol in infant food.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 65 (6), 1247-1254 (2017).</li><li>Van Eerd, L. L., Hoagland, R. E., Zablotowicz, R. M., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pesticide+metabolism+in+plants+and+microorganisms.">Pesticide metabolism in plants and microorganisms.</a> Weed Science. 51 (4), 472-495 (2003).</li><li>Hillebrands, L., Lamshoeft, M., Lagojda, A., Stork, A., Kayser, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+callus+cultures+to+elucidate+the+metabolism+of+tebuconazole,+flurtamone,+fenhexamid,+and+metalaxyl-M+in+Brassica+napus+L.,+Glycine+max+(L.)+Merr.,+Zea+mays+L.,+and+Triticum+aestivum+L.">Evaluation of callus cultures to elucidate the metabolism of tebuconazole, flurtamone, fenhexamid, and metalaxyl-M in Brassica napus L., Glycine max (L.) Merr., Zea mays L., and Triticum aestivum L.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 68 (48), 14123-14134 (2020).</li><li>Macherius, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolization+of+the+bacteriostatic+agent+triclosan+in+edible+plants+and+its+consequences+for+plant+uptake+assessment.">Metabolization of the bacteriostatic agent triclosan in edible plants and its consequences for plant uptake assessment.</a> Environmental Science &amp; Technology. 46 (19), 10797-10804 (2012).</li><li>Sun, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uptake+and+metabolism+of+nonylphenol+in+plants:+Isomer+selectivity+involved+with+direct+conjugation.">Uptake and metabolism of nonylphenol in plants: Isomer selectivity involved with direct conjugation.</a> Environmental Pollution. 270, 116064 (2021).</li><li>Schymanski, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+small+molecules+via+high+resolution+mass+spectrometry:+communicating+confidence.">Identifying small molecules via high resolution mass spectrometry: communicating confidence.</a> Environmental Science &amp; Technology. 48 (4), 2097-2098 (2014).</li><li>Moschet, C., Anumol, T., Lew, B. M., Bennett, D. H., Young, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Household+dust+as+a+repository+of+chemical+accumulation:+new+insights+from+a+comprehensive+high-resolution+mass+spectrometric+study.">Household dust as a repository of chemical accumulation: new insights from a comprehensive high-resolution mass spectrometric study.</a> Environmental Science &amp; Technology. 52 (5), 2878-2887 (2018).</li><li>Ren, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydroxylated+PBDEs+and+brominated+phenolic+compounds+in+particulate+matters+emitted+during+recycling+of+waste+printed+circuit+boards+in+a+typical+e-waste+workshop+of+South+China.">Hydroxylated PBDEs and brominated phenolic compounds in particulate matters emitted during recycling of waste printed circuit boards in a typical e-waste workshop of South China.</a> Environmental Pollution. 177, 71-77 (2013).</li><li>de Wit, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+brominated+flame+retardants+in+the+environment.">An overview of brominated flame retardants in the environment.</a> Chemosphere. 46 (5), 583-624 (2002).</li><li>Sun, J. Q., Chen, Q., Qian, Z. X., Zheng, Y., Yu, S. A., Zhang, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+Uptake+and+Metabolism+of+e,4-Dibromophenol+in+Carrot:+In+Vitro+Enzymatic+Direct+Conjugation.">Plant Uptake and Metabolism of e,4-Dibromophenol in Carrot: In Vitro Enzymatic Direct Conjugation.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 66 (17), 4328-4335 (2018).</li><li>Chibwe, L., Titaley, I. A., Hoh, E., Simonich, S. L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrated+framework+for+identifying+toxic+transformation+products+in+complex+environmental+mixtures.">Integrated framework for identifying toxic transformation products in complex environmental mixtures.</a> Environmental Science &amp; Technology Letters. 4 (2), 32-43 (2017).</li><li>Hollender, J., Schymanski, E. L., Singer, H. P., Ferguson, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nontarget+screening+with+high+resolution+mass+spectrometry+in+the+environment:+ready+to+go.">Nontarget screening with high resolution mass spectrometry in the environment: ready to go.</a> Environmental Science &amp; Technology. 51 (20), 11505-11512 (2017).</li><li>Nafisi, M., Fimognari, L., Sakuragi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interplays+between+the+cell+wall+and+phytohormones+in+interaction+between+plants+and+necrotrophic+pathogens.">Interplays between the cell wall and phytohormones in interaction between plants and necrotrophic pathogens.</a> Phytochemistry. 112, 63-71 (2015).</li><li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+metabolic+pathways+of+2,4,6-tribromophenol+in+rice+plants.">Multiple metabolic pathways of 2,4,6-tribromophenol in rice plants.</a> Environmental Science &amp; Technology. 53 (13), 7473-7482 (2019).</li><li>Hou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycosylation+of+tetrabromobisphenol+A+in+pumpkin.">Glycosylation of tetrabromobisphenol A in pumpkin.</a> Environmental Science &amp; Technology. 53 (15), 8805-8812 (2019).</li></ol>

Este protocolo fue desarrollado para identificar eficientemente la biotransformación de xenobióticos en plantas. El paso crítico de este protocolo es el cultivo del callo de la planta. La parte más difícil es la diferenciación y el mantenimiento del callo de la planta, porque el callo de la planta se infecta fácilmente y se convierte en tejidos vegetales. Por lo tanto, es importante asegurarse de que todos los equipos utilizados estén esterilizados en autoclave y que todas las operaciones se realicen en condicion...

Un número cada vez mayor de contaminantes orgánicos han sido descartados en el medio ambiente debido a las actividades antropogénicas 1,2, y el suelo se considera un importante sumidero de estos contaminantes 3,4. Los contaminantes del suelo pueden ser absorbidos por las plantas y potencialmente transferidos a organismos de nivel trófico superior a lo largo de las cadenas alimentarias, entrando directamente en el cuerpo humano a través del consumo de cultivos, lo que conduce a una exposición no intencionada 5,6. Las plantas utilizan diferentes vías para metabolizar los xenobióticos para la desintoxicación7; Dilucidar el metabolismo de los xenobióticos es importante, ya que controla el destino real de los contaminantes en las plantas. Dado que los metabolitos pueden ser excretados por las hojas (a la atmósfera) o las raíces, la determinación de los metabolitos en las primeras fases de la exposición ofrece la posibilidad de analizar un número prolongado de metabolitos8. Sin embargo, los estudios con plantas intactas requieren experimentos a largo plazo y protocolos complejos de preparación de muestras que pueden verse afectados por diversos factores.
Los cultivos de callos vegetales, por lo tanto, son una buena alternativa para estudiar el metabolismo de los xenobióticos en planta, ya que pueden acortar en gran medida el tiempo de tratamiento. Estos cultivos excluyen la interferencia microbiana y la degradación fotoquímica, simplifican el efecto matriz de las plantas intactas, estandarizan las condiciones de cultivo y requieren menos esfuerzo experimental. Los cultivos de callos vegetales se han aplicado con éxito como un enfoque alternativo en estudios metabólicos de triclosán9, nonilfenol10 y tebuconazol8. Estos estudios mostraron que los patrones metabólicos en los cultivos de callos eran similares a los de las plantas intactas. Este estudio propone un método para la identificación eficiente y precisa de metabolitos de xenobióticos en plantas sin protocolos complejos y que requieren mucho tiempo. Aquí, utilizamos cultivos de callos vegetales en combinación con espectrometría de masas de alta resolución para el análisis de metabolitos con señales de baja intensidad11,12.
Con este fin, las suspensiones de callos de zanahoria (Daucus carota var. sativus) se expusieron a 100 μg/L de 2,4-dibromofenol durante 120 h en un agitador a 130 rpm y 26 °C. Se eligió el 2,4-dibromofenol debido a su actividad endocrina disruptiva13 y su presencia generalizada en el suelo14. Los metabolitos fueron extraídos y analizados por espectrometría de masas de alta resolución. El protocolo aquí propuesto puede investigar el metabolismo in planta de otros tipos de compuestos orgánicos que pueden ser ionizados.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2,4-dichlorophenoxyacetic acid</td>
			<td>WAKO</td>
			<td>1 mg/L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20% H2O2</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.</td>
			<td>10011218-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-n-NP, &#62;99%</td>
			<td>Dr. Ehrenstorfer GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-n-NP-d4</td>
			<td>Pointe-Claire</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-benzylaminopurine</td>
			<td>WAKO</td>
			<td>0.5 mg/L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% ethanol</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.</td>
			<td>1269101-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7890A-5975&#160;gas chromatography</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACQULTY ultra-performance&#160;liquid chromatography</td>
			<td>Waters</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amber glass vials</td>
			<td>Waters</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial climate incubator</td>
			<td>Ningbo DongNan Lab Equipment Co.,LTD</td>
			<td>RDN-1000A-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclaves</td>
			<td>STIK</td>
			<td>MJ-Series</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C18 column</td>
			<td>ACQUITY UPLC BEH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DB-5MS capillary column</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>40071190-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freeze dryer</td>
			<td>SCIENTZ&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-throughput tissue grinder</td>
			<td>SCIENTZ&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicrOTOF-QII mass spectrometer</td>
			<td>Bruker Daltonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q system</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MS1922801-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murashige &#38; Skoog medium</td>
			<td>HOPEBIO</td>
			<td>HB8469-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-hexane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H109658-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrogen blowing instrument&#160;</td>
			<td>AOSHENG</td>
			<td>MD200-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NP isomers, &#62;99%</td>
			<td>Dr. Ehrenstorfer GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oasis HLB cartridges</td>
			<td>Waters</td>
			<td>60 mg/3 mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Research plus</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td>100-1000 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seeds of Little Finger carrot (Daucus carota var. sativus)&#160;</td>
			<td>Shouguang Seed Industry Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking&#160;Incubators</td>
			<td>Shanghai bluepard instruments Co.,ltd.</td>
			<td>THZ-98AB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid phase extractor</td>
			<td>AUTO SCIENCE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound machine</td>
			<td>ZKI</td>
			<td>UC-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-sterilized ultra-clean workbench</td>
			<td>AIRTECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

elucidating the metabolism of 2,4-dibromophenol in plants

Los cultivos pueden estar ampliamente expuestos a contaminantes orgánicos, ya que el suelo es un sumidero importante para los contaminantes desechados en el medio ambiente. Esto crea una exposición humana potencial a través del consumo de alimentos acumulados con contaminantes. Esclarecer la absorción y el metabolismo de los xenobióticos en los cultivos es esencial para evaluar el riesgo de exposición alimentaria en los seres humanos. Sin embargo, para tales experimentos, el uso de plantas intactas requiere experimentos a largo plazo y protocolos complejos de preparación de muestras que pueden verse afectados por varios factores. Los cultivos de callos vegetales combinados con espectrometría de masas de alta resolución (HRMS) pueden proporcionar una solución para la identificación precisa y rápida de metabolitos de xenobióticos en plantas, ya que pueden evitar la interferencia del microambiente microbiano o fúngico, acortar la duración del tratamiento y simplificar el efecto matriz de las plantas intactas. El 2,4-dibromofenol, un retardante de llama y disruptor endocrino típico, se eligió como sustancia modelo debido a su presencia generalizada en el suelo y a su potencial de absorción por las plantas. En este trabajo, el callo vegetal se generó a partir de semillas de asepsia y se expuso a un medio de cultivo estéril que contenía 2,4-dibromofenol. Los resultados mostraron que se identificaron ocho metabolitos de 2,4-dibromofenol en los tejidos de callos de la planta después de 120 h de incubación. Esto indica que el 2,4-dibromofenol se metabolizó rápidamente en los tejidos callosos de las plantas. Por lo tanto, la plataforma de cultivo de callos vegetales es un método eficaz para evaluar la absorción y el metabolismo de los xenobióticos en las plantas.

Los pasos del protocolo se muestran en la Figura 1. Siguiendo el protocolo, comparamos el cromatograma del extracto de callo de zanahoria del tratamiento con 2,4-dibromofenol con los controles, y encontramos ocho picos distintos que están presentes en el tratamiento con 2,4-dibromofenol pero ausentes en los controles (Figura 2). Esto indica que un total de ocho metabolitos de 2,4-dibromofenol (M562, M545, M661, M413, M339, M380, M424 y M187) se detectaron con ?...

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Elucidating the Metabolism of 2,4-Dibromophenol in Plants

El presente protocolo describe un método simple y eficiente para la identificación de metabolitos de 2,4-dibromofenol en plantas.

Elucidación del metabolismo del 2,4-dibromofenol en plantas

Crops can be extensively exposed to organic pollutants, since soil is a major sink for pollutants discarded into the environment. This creates potential ...

El cultivo de callos vegetales proporciona una solución para la evaluación precisa, eficiente y rápida de la degradación metabólica de los xenobióticos en las plantas. El cultivo de callos vegetales puede excluir el microbioma o la interferencia fúngica y la degradación fotoquímica, simplificar el efecto matriz de las plantas intactas, estandarizar las condiciones de cultivo, acortar la duración del tratamiento y requerir menos esfuerzo experimental. El método aquí propuesto podría proporcionar información sobre el comportamiento de absorción y los mecanismos metabólicos de diferentes contaminantes orgánicos en los cultivos y es útil para los esfuerzos en las evaluaciones de riesgos ambientales.Para empezar, autoclave todo el equipo y realice todas las operaciones en un banco de trabajo ultra limpio esterilizado por UV. Esterilizar la superficie vernalizada de la semilla con etanol al 75% durante 20 minutos. Enjuáguelos con agua desionizada estéril tres veces y vuelva a esterilizarlos con peróxido de hidrógeno al 20% durante 20 minutos.Después de lavar las semillas con agua desionizada esterilizada seis veces, germinarlas asépticamente sembrando en medio Murashige y Skoog autoclave y libre de hormonas de pH 5.8 que contenga gel de agar al 1% e incubar a 26 grados centígrados con un fotoperíodo de 16 horas durante 15 días. Después de 15 días de incubación de semillas, cortar el hipocótilo y el cotiledón de la plántula en trozos pequeños de 0,5 centímetros para obtener los explantes. Transformar los explantes en una placa de Petri que contenga de 15 a 20 mililitros de medio Murashige y Skoog esterilizado en autoclave suplementado con Oxymon y Ficocianina e incubar en la oscuridad a 26 grados centígrados durante tres o cuatro semanas para inducir el callo.Con un bisturí estéril y unas pinzas, separar el callo de aproximadamente un centímetro de diámetro formado a partir de los explantes iniciales. Para el tratamiento, disuelva 2,4-dibromofenol en 10 mililitros de líquido aséptico Murashige y medio Skoog. Luego agregue tres gramos de callo de zanahoria separado a la solución preparada de 2,4-dibromofenol.Después de preparar el medio en el control en blanco como se describe en el manuscrito, incubar todos los matraces en la oscuridad. Para preparar la muestra, separar cuidadosamente el callo del tratamiento con 2,3-dibromofenol y controlar los matraces mediante filtración con filtros de fibra de vidrio de 0,45 micras. Lava el callo tres veces con agua ultrapura antes de recogerlo.Liofilizar todos los callos recolectados y homogeneizar 0,2 gramos de callos secos con una trituradora de pañuelos de alto rendimiento a 70 hercios durante tres minutos. Use una microjeringa de vidrio para agregar 50 microlitros de 4-n-nanofenol deuterado sustituto en el callo y el vórtice homogeneizados durante un minuto. Añadir cinco mililitros de la solución que contiene una proporción igual de metanol y agua al callo pinchado y sonicarlo durante 30 minutos para extraer el 2,4-dibromofenol y los metabolitos.Después de la extracción, centrifugar la suspensión a 8.000 G a cuatro grados centígrados durante 10 minutos y recoger el sobrenadante mediante pipeteo. Pasar el extracto a través de una extracción hidrofílica lipofílica en fase sólida equilibrada o un cartucho HLB-SPE con un caudal de un mililitro por minuto. Diluir los analitos pasando seis mililitros de metanol por el cartucho HLB-SPE.A continuación, concentre el eluyente obtenido a un mililitro bajo una suave corriente de gas nitrógeno para su análisis instrumental. Para el análisis, abra la puerta del calentador de columna. A continuación, instale la columna de cromatografía líquida de ultra rendimiento conectando la entrada de la columna a la válvula de inyección y la salida a la entrada del espectrómetro de masas.Inserte el extremo de los tubos de disolvente A y B en los frascos de disolvente correspondientes. Coloque los viales de muestra por número de serie en las ubicaciones correspondientes de las bandejas de muestras y vuelva a insertar las bandejas de muestras en la cámara de muestras. En la ventana del software, haga clic en Instrumento, luego en Método de entrada para editar las condiciones del cromatograma líquido.Seleccione Método MS y configure los parámetros del análisis del espectro de masas. Haga clic en Archivo y luego en Nuevo para crear y nombrar la base de datos. Cargue el programa de ejemplo creado anteriormente seleccionando Archivo MS, seguido de Archivo de entrada e Inyectar volumen.Guarde la base de datos en la carpeta de ejemplo del proyecto haciendo clic en Archivo y Guardar. A continuación, seleccione Ejecutar e iniciar en la ventana principal del software y haga clic en Adquirir datos de muestra, seguido del botón Aceptar en la lista de inicio de la ejecución de la lista de muestra para recopilar datos. Para procesar los datos, seleccione la fila de datos de destino y haga clic en la ventana del cromatograma para ver el cromatograma de MS scan.En la ventana del cromatograma, haga clic en Pantalla, seguido de TIC. Después de hacer clic en la onda de escaneo DS, agregue el rastro y OK para obtener el escaneo de espectros de masas secundarios. El cromatograma del extracto de callo de zanahoria tratado con 2,4-dibromofenol mostró la presencia de ocho metabolitos diferentes en comparación con las muestras de control.Además, la ausencia del pico de 2,4-dibromofenol en el cromatograma indica el rápido metabolismo del 2,4-dibromofenol en el callo de la zanahoria en condiciones experimentales. Además, el 2,4-dibromofenol incubado en el callo de zanahoria condujo a la formación de metabolitos por conjugación directa con glucosa y aminoácidos. Todos los equipos, así como el medio Murashige y Skoog, deben esterilizarse en autoclave para asegurarse de que la diferenciación y el mantenimiento del callo de la planta se realicen en condiciones asépticas.Los enfoques ómicos que siguen este procedimiento permiten la creación de una imagen fitotóxica y mecanicista clara de los contaminantes ambientales.

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LC-MS El análisis de las plaquetas humanas como una plataforma para el estudio del metabolismo mitocondrial

Perturbed mitochondrial metabolism has received renewed interest as playing a causative role in a range of diseases. Probing alterations to metabolic ...

Enhancement of the Initial Growth Rate of Agricultural Plants by Using Static Magnetic Fields

Mejora de la tasa de crecimiento inicial de las plantas agrícolas mediante el uso de campos magnéticos estáticos

Electronic devices and high-voltage wires induce magnetic fields. A magnetic field of 1,300-2,500 Gauss (0.2 Tesla) was applied to Petri dishes containing ...

Assessment of Methane and Nitrous Oxide Fluxes from Paddy Field by Means of Static Closed Chambers Maintaining Plants Within Headspace

Evaluación de metano y óxido nitroso flujos de arrozal mediante estática cerrado cámaras de mantenimiento de plantas en espacios vacíos

This protocol describes the measurement of greenhouse gas (GHG) emissions from paddy soils using the static closed chamber technique. This method is based ...

Protocol for Producing Three-Dimensional Infrared Video of Freezing in Plants

Protocolo para la producción de Video infrarroja tridimensional de congelación en las plantas

Freezing in plants can be monitored using infrared (IR) thermography, because when water freezes, it gives off heat. However, problems with color contrast ...

A Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) Assay for Rapid Identification of Bemisia tabaci

A Loop-mediated Isothermal Amplification LAMP Assay for Rapid Identification of Bemisia tabaci

Un ensayo de amplificación isotérmica (lámpara) mediada por el lazo para identificación rápida de Bemisia tabaci

The whitefly Bemisia tabaci (Gennadius) is an invasive pest of considerable importance, affecting the production of vegetable and ornamental crops in many ...

Xylem Water Distribution in Woody Plants Visualized with a Cryo-scanning Electron Microscope

Distribución de agua de Xylem en plantas leñosas visualizada con un microscopio electrónico de barrido crio-

A scanning electron microscope installed cryo-unit (cryo-SEM) allows specimen observation at subzero temperatures and has been used for exploring water ...