Name: measuring the rate of lipolysis in ex vivo murine adipose tissue and primary preadipocytes differentiated in vitro
Uploaded: 2023-03-17T13:00:00
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この研究は、米国国立衛生研究所の助成金R01DK126944によってS.M.R.に支援されました。

すべての動物の使用は、コーネル大学のワイルコーネル医科大学の施設動物管理および使用委員会(IACUC)によって承認されました。
1. バッファーおよび回収プレートの調製
<ol><li>フェノールレッドを含まないダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)100 mLに5 gのBSAを溶解して、5%ウシ血清アルブミン(BSA)を作ります。BSAを静かにかき混ぜて溶解します(振とうは逆効果?...

ここでは、脂肪細胞およびex vivo脂肪組織における脂肪分解の速度を測定するための基本的なプロトコルを提供します。脂肪分解を定量化するためには、線形相における脂肪分解率を測定することが重要です。シリアルサンプリング技術を使用しており、メディアの大部分が収集され、定期的に新しいメディアに置き換えられます。この半保存的方法は、FFA緩衝能を有する新鮮なBSAの添...

過剰な栄養素は、脂肪滴の中性脂質コア中のトリグリセリドの形で白色脂肪組織に貯蔵される。トリグリセリド貯蔵は、脂肪組織トリグリセリドリパーゼ(ATGL)、ホルモン感受性リパーゼ(HSL)、およびモノグリセリドリパーゼ(MGL)によって脂肪酸側鎖が順次切断され、遊離脂肪酸(FFA)およびグリセロール骨格が放出されるプロセスである脂肪分解を介して動員される1,2。脂肪分解は、脂肪組織のカテコールアミンシグナル伝達によって活性化されます。交感神経終末はカテコールアミンを局所的に放出し、カテコールアミンは脂肪細胞原形質膜上のβアドレナリン作動性受容体に結合する。リガンドが結合すると、これらのGタンパク質共役受容体(GPCR)はGαsを介してアデニリルシクラーゼを活性化します。その後のcAMPによるプロテインキナーゼA(PKA)の活性化は、ATGLおよびHSLの両方のアップレギュレーションをもたらす。PKAによるペリリピン-1のリン酸化は、ATGL3に結合して共活性化するABHD5(CGI-58としても知られる)の解離を引き起こす。PKAはHSLを直接リン酸化し、細胞質ゾルから脂肪滴への転座を促進し、リン酸化ペリリピン-1との相互作用によりリパーゼ活性がさらに促進されます4,5,6,7。脂肪分解に関与する3番目のリパーゼであるMGLは、カテコールアミンシグナル伝達によって調節されていないようです8。重要なことに、脂肪細胞におけるトリグリセリド合成は、中間体としてのモノグリセリドの形成を伴わないグリセロール脂質合成経路によって媒介される。代わりに、グリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼはリゾホスファチジン酸の形成を触媒し、リゾホスファチジン酸は別の脂肪酸アシルCoAと結合してホスファチジン酸を形成し、トリグリセリドの最終合成前にジグリセリドに異性化します(図1)9,10,11。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65106/65106fig01.jpg"> 図1:脂肪分解とグリセロール脂質合成経路。 上:脂肪分解経路;赤で示されている酵素:脂肪組織トリグリセリドリドリパーゼ(ATGL)、ホルモン感受性リパーゼ(HSL)、およびモノグリセリドリパーゼ(MGL)。下:グリセロール脂質合成経路;緑色で示されている酵素:ジグリセリドアシルトランスフェラーゼ(DGAT)、ホスファチジン酸ホスファターゼ(PAP)、リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ(LPAT、LPAATとしても知られています)、およびグリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼ(GPAT)。脂質:トリグリセリド(TG)、ジグリセリド(DG)、モノグリセリド(MG)、遊離脂肪酸(FFA)、脂肪酸アシルCoA(FA-CoA)、リゾホスファチジン酸(LPA)、およびホスファチジン酸(PA)。他の代謝産物:無機リン酸(Pi)およびグリセロール3-リン酸(G3P)。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65106/65106fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
細胞外アデノシンは脂肪分解のもう一つの重要な調節因子であり、GsおよびGi結合GPCRを介してアデニルシクラーゼ活性に影響を与えます。脂肪細胞における優勢なアデノシン受容体であるADORA1は、アデニリルシクラーゼを阻害し、したがってGi12の活性化を介して脂肪分解を阻害します。ADORA2Aは、より低いレベルで、主に褐色脂肪細胞で発現し、Gsシグナル伝達を介して脂肪分解を活性化します13。ADORA1は、基礎脂肪分解とアドレナリン作動薬に対する反応の両方に影響を与えます。.脂肪分解に対するアデノシンの効果は、アデノシンを中和するためのアデノシンデアミナーゼ、ならびにADORA1特異的アゴニストフェニルイソプロピルアデノシン14,15を添加することによって制御することができる。Gq結合GPCRのホルモン活性化は、ホスホリパーゼCおよびプロテインキナーゼC 16,17,18,19の活性化を介して脂肪分解にも影響を及ぼし得る。炎症シグナルも脂肪分解率に影響を与えます。LPS(および他のエンドトキシン)によるTLR4活性化は、ペリリピン-1およびHSL20をリン酸化するERKを活性化することにより、脂肪分解率を増加させる。TNF-αはまた、ERKおよびNF-κB活性化、ならびにホスホジエステラーゼPDE-3BおよびCIDEC21,22,23の転写ダウンレギュレーションを介して脂肪分解を活性化します。IL-6はまた、特に腸間膜脂肪組織における脂肪細胞脂肪分解の増加と関連しており、そのFFA放出は肝脂肪症および糖新生に影響を及ぼす24,25,26。
脂肪分解は、インスリンによって摂食状態の間に抑制される。AKTはPDE-3Bをリン酸化して活性化し、cAMPシグナル伝達を抑制し、PKA活性化を阻止します27。インスリンはまた、ATGL28を転写的にダウンレギュレートします。肥満は、脂肪細胞におけるβ-アドレナリン作動性受容体のダウンレギュレーションを含む様々なメカニズムを通じてカテコールアミン耐性を促進する29,30,31,32,33。脂肪細胞は、3つのβアドレナリン作動性受容体(β-1、β-2、およびβ-3)すべてを発現します。β-1およびβ-2アドレナリン受容体が遍在的に発現しているのに対し、β-3アドレナリン受容体は主にマウスの脂肪細胞で発現している34,35。Adrb3の発現は、脂肪生成中にC / EBPαによって誘導されます36。β-3アドレナリン受容体は成熟脂肪細胞で高度に発現しています。β-1およびβ-2アドレナリン作動性受容体の活性化は、β-アレスチン37によるフィードバック阻害による自己制限である。β-3アドレナリン作動性受容体のフィードバック阻害は、Adrb3発現を減少させる他のシグナル伝達経路によって媒介される33、38、39。
脂肪細胞の脂肪分解を活性化するために多数の化合物を使用することができる。カテコールアミンは、脂肪分解の主要な生理活性物質です。ノルエピネフリン(またはノルアドレナリン)およびエピネフリン(またはアドレナリン)は、3つのβアドレナリン受容体すべてを活性化する40。ノルエピネフリンおよびエピネフリンはまた、α-アドレナリン作動性受容体シグナル伝達 の活性化を介して 脂肪分解に影響を及ぼす41。一般的に使用されるβ-アドレナリン受容体アゴニストには、非選択的β-アドレナリン受容体アゴニストであるイソプロテレノール、ならびにβ-3アドレナリン受容体アゴニストCL-316,243およびミラベグロン42が含まれる。脂肪細胞が主にβ-3アドレナリン受容体を発現していることを考えると、ここでは例としてCL-316,243を使用します。β-3アドレナリン受容体に対するその特異性はまた、それを脂肪細胞カテコールアミンシグナル伝達の比較的特異的な活性化因子にし、それはまた、 in vivoで安全に使用することができる。細胞培養で一般的に使用される10 μM CL-316,243の濃度は、最大応答を達成するために必要な~0.1 μMの用量よりも桁違いに高いことに注意してください33。フォルスコリンはアドレナリン作動性受容体をバイパスし、アデニリルシクラーゼと下流の脂肪分解シグナル伝達を直接活性化します。脂肪分解の抑制剤と同様に、より多くの活性化剤があります。脂肪分解を刺激する化合物を選択する際には、受容体特異性と下流のシグナル伝達経路を実験デザイン内で慎重に検討する必要があります。
白色脂肪組織における脂肪分解の速度は、絶食または運動中の耐寒性と栄養素の利用可能性に影響を与える重要な代謝因子です43,44,45,46。このプロトコルの目的は、脂肪細胞と脂肪組織における脂肪分解の速度を測定することであり、脂肪細胞の代謝と、それがさまざまなマウスモデルの代謝表現型にどのように影響するかの理解を容易にします。脂肪分解率を定量化するために、培地中の脂肪分解生成物(すなわち、FFAおよびグリセロール)の出現を測定する。この方法は、脂肪細胞から培地への脂肪分解産物の放出に依存する。白色脂肪細胞は低レベルのグリセロールキナーゼを発現するので、グリセロール再取り込み率は低い47。逆に、脂肪分解以外の代謝経路によるFFAとグリセロールの生成も考慮する必要があります。脂肪細胞は、グリセロール-3リン酸に対する活性を有するホスファターゼを発現するようであり、グルコース48,49,50に由来するグリセロール-3-リン酸からのグリセロールの産生を可能にする。解糖系は、白色脂肪細胞のFFA再エステル化に使用されるグリセロール-3-リン酸の供給源です。グルコースレベルが制限されている場合、血糖新生には乳酸やピルビン酸などの他の3炭素源が必要です51。細胞内の脂肪分解によって放出されるFFAのチャネリングとその代謝運命はよくわかっていません。脂肪分解によって放出されたFFAは、再エステル化またはβ酸化を受ける前に、脂肪アシルCoAに変換する必要があります。脂肪分解によって放出されたFFAは、取り戻されて脂肪アシルCoAに変換される前に細胞から出る可能性が高いようです52,53,54,55,56,57,58,59,60,61,62 .FFAはアルブミンによって細胞外に隔離することができます。重要なことに、長鎖FFAは、アルブミン63,64,65,66,67によって隔離されていない場合、脂肪分解をフィードバック阻害することが知られています。したがって、脂肪分解アッセイ中の培地のFFA緩衝能を最適化することは極めて重要である。ここで説明する手順は、マウスおよびヒト由来の脂肪細胞およびex vivo脂肪組織における脂肪分解率を測定するために以前に公開された方法と同様である15、68、69、70、71。このプロトコルは、シリアルサンプリングの使用によって異なります。シリアルサンプリングを行うことで、脂肪分解が線形相で測定されていることを内部で検証し、複数の測定を利用して脂肪分解の速度を計算することで、測定誤差を減らし、最終的な計算値の信頼性を高めることができます。シリアルサンプリングの欠点は、アッセイにより多くの時間と試薬が必要になることです。ただし、時間枠が長いほど、レートの推定値の標準誤差に対する測定誤差の影響が減少します。さらに、このプロトコルは、FFAとグリセロールの両方の放出を測定し、完全な脂肪分解および培地72への脂肪分解生成物の放出から予想されるように、3:1の比率を達成することを目標にFFA:グリセロール放出の比率を考慮します。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24-Well tissue culture treated plate</td>
			<td>Corning Inc</td>
			<td>3527</td>
			<td>Must be tissue culture treated for adipocyte differntiation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48-Well flat bottom plate with lid</td>
			<td>Corning Inc</td>
			<td>353078</td>
			<td>Can be tissue culture treated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-Well flat bottom plate with lid</td>
			<td>Corning Inc</td>
			<td>353046</td>
			<td>Can be tissue culture treated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-Well PCR Plate</td>
			<td>USA sceintific</td>
			<td>1402-9100</td>
			<td>Any conical 0.2 mL PCR plate will be convenient&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9418</td>
			<td>FFA free BSA such as A8806, is also commonly used. The BSA should not have detectable FFA, also lot to lot variations in BSA can impact the observed rate of lipolysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CL-316,243</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C5976</td>
			<td>CAS #: 138908-40-4 availaible from other suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator</td>
			<td>PHCBI</td>
			<td>MCO-170AICUVH</td>
			<td>CO2 should ideally be set to 10% for adipose tissue, however 5% CO2 will also work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, low glucose, no phenol red</td>
			<td>Thermofischer</td>
			<td>11054020</td>
			<td>Any phenol red free media should work, DMEM/F12, RPMI, but should contain volatile buffering capacity, i.e. biocarbonate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FFA-free Bovine serum albumin</td>
			<td>Equitech-Bio, Inc,&#160;</td>
			<td>BAH66</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Free Glycerol Reagent</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F6428</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol Standard Solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G7793&#160;</td>
			<td>This can also be made by diluting glycerol to the desired concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR Series NEFA Standard Solution</td>
			<td>Fujifilm</td>
			<td>276-76491</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR Series NEFA-HR (2) Color Reagent A</td>
			<td>Fujifilm</td>
			<td>999-34691</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR Series NEFA-HR (2) Color Reagent B</td>
			<td>Fujifilm</td>
			<td>991-34891</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR Series NEFA-HR (2) Solvent A&#160;</td>
			<td>Fujifilm</td>
			<td>995-34791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR Series NEFA-HR (2) Solvent B&#160;</td>
			<td>Fujifilm</td>
			<td>993-35191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microbiological Incubator</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>S28668</td>
			<td>Any incubator at 37C can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well Plates</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>269620</td>
			<td>Any optically clear, flat bottom 96-well plate works</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone Laboratory Benchtop Mat</td>
			<td>VWR</td>
			<td>76045-300</td>
			<td>Glass plate can also be used. Absorbant surfaces are not recommended</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer/Microplate Reader</td>
			<td>Molecular devices</td>
			<td>SpectraMax i3x&#160;</td>
			<td>Any plate reader that can read at 540, 550 and 660 mm will work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>810531</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WypAll X70 Wipers</td>
			<td>Kimberly-Clark</td>
			<td>41200</td>
			<td>Any high quality paper towel will work</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring the rate of lipolysis in ex vivo murine adipose tissue and primary preadipocytes differentiated in vitro

脂肪細胞は脂肪滴中にトリグリセリドの形でエネルギーを蓄えます。このエネルギーは脂肪分解 を介して 動員することができ、そこでは脂肪酸側鎖がグリセロール骨格から順次切断され、遊離脂肪酸およびグリセロールの放出をもたらす。白色脂肪細胞におけるグリセロールキナーゼの発現が低いため、グリセロールの再取り込み速度はごくわずかですが、脂肪酸の再取り込みはアルブミンなどの培地成分の脂肪酸結合能力によって決まります。培地へのグリセロールおよび脂肪酸放出の両方を比色アッセイによって定量し、脂肪分解率を決定することができる。これらの因子を複数の時点で測定することにより、脂肪分解の線形速度を高い信頼性で決定できます。ここでは、マウス由来の in vitro 分化脂肪細胞および ex vivo 脂肪組織における脂肪分解の測定のための詳細なプロトコルを提供します。このプロトコルは、他の脂肪前駆細胞株または他の生物由来の脂肪組織に対しても最適化され得る。考慮事項と最適化パラメーターについて説明します。このプロトコルは、マウスモデルと治療の間の脂肪細胞脂肪分解の速度を決定および比較するのに役立つように設計されています。

in vitro分化脂肪細胞の基礎脂肪分解率および刺激脂肪分解率を測定した。鼠径部白色脂肪組織由来の初代前駆脂肪細胞を、5 μMデキサメタゾン、0.5 mM IBMX、1 μg/mLインスリン、および1 μMトログリタゾンで4日間処理し、さらに1 μg/mLインスリンで3日間処理することにより脂肪細胞に分化させた。細胞を、脂肪分解アッセイの前にインスリンを含まない培地中で24時間インキュベートした。...

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Measuring the Rate of Lipolysis in Ex Vivo Murine Adipose Tissue and Primary Preadipocytes Differentiated In Vitro

脂肪細胞におけるトリグリセリド脂肪分解は、遊離脂肪酸およびグリセロールの遊離をもたらす重要な代謝プロセスである。ここでは、マウスの脂肪細胞および ex vivo 脂肪組織における基礎脂肪分解および刺激脂肪分解を測定するための詳細なプロトコルを提供します。

in vitroで分化したマウス脂肪組織および初代前駆脂肪細胞における脂肪分解の速度の測定

Adipocytes store energy in the form of triglycerides in lipid droplets. This energy can be mobilized via lipolysis, where the fatty acid side chains are ...

このプロトコルは、培養脂肪細胞またはex vivo脂肪組織における脂肪細胞脂肪分解の速度の決定を詳述し、マウスモデルまたは治療間の脂肪分解速度の比較を可能にします。このプロトコルはシリアルサンプリングを使用しているため、脂肪分解が線形相で測定されていることを内部で検証でき、測定誤差を低減できます。最適化により、このプロトコルを使用して、褐色脂肪組織、他の生物の脂肪組織、または脂肪生成細胞株の脂肪分解を測定することができます。生体外組織は、培地中のBSAによって放出された遊離脂肪酸の隔離を可能にするために、一貫したサイズと形状の小さな塊に切り刻まれなければなりません。まず、フェノールレッドを含まない100ミリリットルのダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)に5グラムのウシ血清アルブミン(BSA)を溶解して、5%BSA培地を調製します。溶液を静かに攪拌してBSAを溶解します。次に、制御および刺激媒体の使用濃度を準備します。使用する前に、メディアを摂氏37度に温めてください。培地収集用に96ウェルプレートにラベルを付けます。滅菌ヒュームフード内で、100%コンフルエントな初代脂肪前駆細胞の単離と分化を行います。2〜3日ごとに、1ウェルあたり1ミリリットルの容量を維持するインスリンを含む培養培地を交換する。この研究では、分化率が90%を超え、グループ間で類似している培養のみを使用します。次に、脂肪分解を測定する前に、インスリンを含まない培地で細胞を24時間培養します。細胞をDPBSで一度洗浄し、培地から残留血清を除去します。反復ごとに1ウェルの48ウェルプレートを準備します。使用する各ウェルに400マイクロリットルの室温DMEMを入れます。マウス1匹あたり組織あたり2〜4個のコントロールウェルと2〜4個の刺激ウェルを使用します。各マウスから採取する組織ごとに1ウェルを有する6ウェルプレートを準備し、使用する各ウェルに4ミリリットルの室温DMEMを入れます。採取した性腺脂肪組織を6ウェルプレートに入れます。ウェルから組織を取り除きます。シリコンマットの上に置き、ハサミで5〜7ミリグラムの塊に切ります。清潔なタオルでティッシュを拭き取り、メディアを取り除きます。次に、各アッセイウェルについて、5つまたは6つの組織チャンクに相当する25〜30ミリグラムの重量を量り、事前に準備した48ウェルアッセイプレートに入れます。ティッシュを取り除いた後、ウェイトボートの重量を量り、残った残留物の重量を記録します。サンプル間でウェイトボートをきれいに拭き、必要に応じて引き裂きます。組織ごとに新しいウェイトボートを使用してください。すべての組織サンプルの重量を測定したら、48ウェルアッセイプレートを摂氏37度のインキュベーターに10%二酸化炭素下で15分間置きます。滅菌ヒュームフードで培地収集を行います。時間0で、培地を除去した後、ウェルあたり400マイクロリットルのコントロールまたは刺激培地を追加し、アッセイプレートを摂氏37度および10%二酸化炭素のインキュベーターに入れます。ex vivo組織培養の場合は、ピペットを使用して培地を慎重に除去し、吸引を加えないでください。1時間、2時間、3時間、4時間で、200マイクロリットルの培地を回収し、200マイクロリットルの適切なコントロールまたは刺激培地と交換し、アッセイプレートをインキュベーターに戻します。収集プレートは摂氏4度で保管してください。サンプルを解凍して混合します。試薬を室温に温め、溶媒A1本を使用してカラー試薬Aボトル1本、溶媒Bボトル1本を使用してカラー試薬Bボトル1本を溶解します遊離脂肪酸またはFFA標準曲線を作成した後、ピペット標準物質とサンプルを96ウェルアッセイプレートに入れます。推奨サンプル量はウェルあたり10マイクロリットルです。150マイクロリットルの試薬Aを各ウェルに加え、混合する。アッセイプレートを摂氏37度で5分間インキュベートします。550ナノメートルと660ナノメートルのプレートの吸光度を読み取り、これを読み取りAと呼びます.各ウェルに75マイクロリットルの試薬Bを加えて混合します。アッセイプレートを摂氏37度で5分間インキュベートします。次に、プレートをインキュベーターから取り出した後、550ナノメートルと660ナノメートルでのプレートの吸光度を再度読み取ります。この測定値は、B.遊離グリセロール試薬を36リットルの超純水で再構成し、室温に順応させるという読み方を参照してください。サンプルを解凍して混合します。グリセロール標準溶液と水ブランクの7.2倍の段階希釈を行うことにより、グリセロール標準曲線を作成します。各標準物質25マイクロリットルをピペットし、96ウェルアッセイプレートにサンプルを注入する。175マイクロリットルの遊離グリセロール試薬を各ウェルに加えて混合する。アッセイプレートを摂氏37度で5分間インキュベートします。プレートをインキュベーターから取り出した後、540ナノメートルでのプレートの吸光度を読み取ります。本文に記載されている手順に従って、それぞれのR2乗値の脂肪分解率を計算します。次に、各サンプルのFFAおよびグリセロール産生速度を個々のデータポイントとして使用して、統計分析を実行し、異なる脂肪分解率が比較されている場合は値をプロットします。遺伝子型間でex vivo脂肪分解率を比較する場合は、技術的な反復として動物あたり2つまたは3つのサンプルを使用し、サンプルサイズが動物の数と等しくなるように、動物ごとに1つのデータポイントの平均を使用します。次に、データを使用して統計分析を実行します。in vitroで分化した脂肪前駆細胞におけるFFAおよびグリセロール産生は、4時間のアッセイ中に直線的であった。刺激脂肪分解率は基礎率よりも有意に高かった。刺激された細胞では、FFAとグリセロールのモル比は約3であり、有意な再取り込みまたは保持のないトリグリセリド脂肪分解を示しました。.刺激されていない細胞では、その比率は約1であり、グリセロールの非脂肪分解源を示唆しています。ex vivo培養では、表面積対体積比が低いより大きな組織チャンクは、より高いFFA保持を示し、その結果、FFA対グリセロールモル比が低くなりました。25ミリグラムの組織チャンクでは、FFAの保持が脂肪分解の速度に悪影響を及ぼしました。非常に小さな組織チャンクも脂肪分解率の低下を示しました。培地中のBSAの減少は、FFAおよびグリセロール放出の両方を有意に減少させた。24時間刺激後の5%BSA培地のFFA蓄積は5ミリモルであったが,0.5%BSA培地の蓄積はわずか0.6ミリモルであった。採取した培地のFFAレベルは、3時間で2.3ミリモルの危険ゾーンに達しました。4時間後の培地FFAおよびグリセロールの増加の欠如は、フィードバック阻害を示唆した。4時間の時点を除外すると、リリース率がわずかではあるが大幅に増加しました。FFA放出の速度は、通常の時点間でも線形であった。ex vivo脂肪分解サンプルから培地を除去する場合、組織の塊がピペットによって誤って除去されないようにすることが重要です。結果を適切に正規化するには、これらのサンプルのタンパク質または脂質含有量を測定する必要がある場合があります。

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring the Rate of Lipolysis in Ex Vivo Murine Adipose Tissue and Primary Preadipocytes Differentiated In Vitro

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

初代培養およびコルチのマウス臓器のプラスミドエレクトロ。

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

生物学

The c-FOS Protein Immunohistological Detection: A Useful Tool As a Marker of Central Pathways Involved in Specific Physiological Responses In Vivo and Ex Vivo

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C-FOSタンパク質免疫組織学的検出：特定の生理反応に関与する中央経路のマーカーとして有用ツール<em&gt;インビボ</em&gt;と<em&gt; ex vivoで</em

Many studies seek to identify and map the brain regions involved in specific physiological regulations. The proto-oncogene c-fos, an immediate early gene, ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

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の剛性を測定します<em&gt; ex vivoで</em原子間力顕微鏡を使用&gt;マウス大動脈

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Isolation and Differentiation of Primary White and Brown Preadipocytes from Newborn Mice

新生児マウスからの白色および褐色の前読細胞の分離と分化

The understanding of the mechanisms underlying adipocyte differentiation and function has greatly benefited from the use of immortalized white ...

Immunophenotyping and Cell Sorting of Human MKs from Human Primary Sources or Differentiated In Vitro from Hematopoietic Progenitors

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ヒトの一次源または造血前駆体からの分化 インビトロ からのヒトMKの免疫フェノタイピングと細胞選別

Megakaryocyte (MK) differentiation encompasses a number of endomitotic cycles that result in a highly polyploid (reaching even&#160;&#62;64N) and ...

脂肪組織由来幹細胞の単離と特性評価

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats

著者スポットライト:Sprague Dawleyラットの脂肪組織に由来する間葉系幹細胞の単離と同定  

スプレイグドーリーラットの脂肪組織由来間葉系幹細胞の単離と同定

Adult mesenchymal cells have revolutionized molecular and cell biology in recent decades. They can differentiate into different specialized cell types, in ...

マウス白脂肪組織の半自動単離

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

著者スポットライト:組織解離器を使用したマウス白脂肪組織からの間質血管画分の半自動分離  

組織解離剤を用いたマウス白色脂肪組織からの間質血管画分の半自動単離(英語)

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...