Name: the serial anesthesia array for the high-throughput investigation of volatile agents using drosophila melanogaster
Uploaded: 2023-02-24T13:10:00
Duration: 6 min 27 s
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Agradecemos a Mark G. Perkins, Laboratório Pearce, Departamento de Anestesiologia, Universidade de Wisconsin-Madison, pela construção do protótipo da SAA. O trabalho é apoiado pelo Instituto Nacional de Ciências Médicas Gerais (NIGMS) com R01GM134107 e pelo fundo de P&D do Departamento de Anestesiologia da Universidade de Wisconsin-Madison.

NOTA: Consulte a Tabela de Materiais para obter detalhes sobre todos os materiais usados no protocolo.
1. Construção do AEA
<ol><li>Faça a armação cortando madeira e montando a moldura usando as dimensões da Figura 1A.</li>
	<li>Modificar tampas de tubo cônico de 50 mL.<ol><li>Faça dois furos em cada tampa com uma broca de 9/32 polegadas. Lixe os buracos para limpar o plástico esfarrapado. Lixe a parte superior da tampa para rugar a superfície (isso ajuda na adesão da cola).</li>
		<li>Cortar pipetas sorológicas de 5 mL para o tamanho (3 em para entrada e 1,5 em para saída) marcando o plástico e, em seguida, quebrando-o limpo na linha marcada. Lixe as extremidades das pipetas cortadas/quebradas.</li>
		<li>Cole a rede nos tubos (permita o tempo de secagem adequado para o adesivo). Corte a rede até o tamanho do tubo após o adesivo secar.</li>
		<li>Insira os tubos nos orifícios das tampas cônicas com ambos os tubos estendendo-se (3/4 pol) acima da tampa; certifique-se de que o tubo de entrada se estenda por mais tempo no tubo do que o fluxo de saída (Figura 1B).</li>
		<li>Aplique cola na parte superior das tampas ao redor dos tubos para fixar as peças juntas (permita um tempo de secagem adequado para o adesivo antes de continuar).</li>
	</ol></li>
	<li>Fixe as tampas ao quadro e direcione a tubulação (Figura 1C).<ol><li>Conecte cabos adesivos à estrutura (3,25 pol. de distância, centro a centro).</li>
		<li>Afixar as tampas na moldura usando gravatas zip; Corte as pontas da etiqueta de gravata zip.</li>
		<li>Corte e conecte os comprimentos (9 pol) da tubulação Tygon aos tubos de entrada/saída em cada tampa modificada (Figura 1D). Começando na extremidade a montante, conecte primeiro à entrada e, em seguida, conecte a tubulação da saída à entrada da próxima posição.</li>
		<li>Adicione um indicador de fluxo à "entrada" mais a jusante (posição 10, Figura 1E).</li>
		<li>Colocar um tubo cônico de 50 mL na primeira posição e preenchê-lo com água logo abaixo do tubo de entrada (Figura 1F).</li>
	</ol></li>
	<li>Prepare a interface para o vaporizador. Remova os êmbolos, corte os entalhes de duas seringas dosadoras de 10 mL (1/2 de profundidade x 1/4 de largura, Figura 1G) e insira-os na entrada e saída do vaporizador com os entalhes voltados diretamente para a frente do vaporizador para alinhamento com os orifícios (Figura 1H). Opcional: Cole as seringas modificadas no lugar. Se for acessível, use um coletor comercial (consulte a Tabela de Materiais para obter uma opção).</li>
	<li>Conecte todo o sistema. Use a tubulação Tygon para unir os componentes na seguinte ordem: tanque de gás transportador com regulador > medidor de vazão específico para gás > vaporizador > SAA (Figura 1C).</li>
	<li>Preencha as posições vazias na matriz com tubos cônicos vazios de 50 mL. Ligue o tanque de gás, abra o medidor de vazão para ~2 L/min e ligue o vaporizador para 0%. Confirme o fluxo de gás através do sistema verificando o fluxo do medidor de vazão a montante do vaporizador e o indicador de vazão a jusante da última câmara do SAA quanto ao fluxo. Alternativamente, insira a extremidade da tubulação a jusante na água e procure bolhas. NOTA: Como o sistema não é pressurizado, uma coluna de água superior a alguns centímetros interromperá o fluxo. Se não houver fluxo na extremidade a jusante da matriz, verifique o seguinte: o vaporizador precisa estar ligado para permitir o fluxo; verificar se o regulador do tanque e os medidores de vazão estão permitindo a vazão; Verifique as posições da matriz para certificar-se de que os tubos estão bem rosqueados; e verifique se há vazamentos ao redor do adesivo nas tampas modificadas.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65144/65144fig01.jpg"> Figura 1: Construção do SAA. (A) Esquema, com medidas, da estrutura de madeira que suporta o SAA. (B) Corte transversal esquematizado, com medidas, de tampa modificada com tubos de entrada e saída confeccionados com pipetas sorológicas de 5 mL. (C) SAA montada (reproduzida de Olufs et al.5) (D) Detalhes de uma tampa cônica modificada de 50 mL mostrando tubos de entrada e saída. (E) Escoamento a jusante (posição 10) com o indicador de vazão. (F) Tubo a montante (posição 1) cheio de água para umidificar o gás transportador. A seta vermelha indica o nível da água. (G) Seringa dosadora modificada de 10 mL para o coletor improvisado. O círculo vermelho destaca o entalhe de corte localizado entre as marcas de 8 mL e 10 mL (ou 1/2 pol x 1/4 pol). (H) Vista traseira do vaporizador Tec7 mostrando a inserção e orientação das seringas modificadas. Apenas uma seringa está no lugar nesta vista para mostrar, à esquerda, o orifício (seta vermelha) que precisa ser alinhado com o entalhe da seringa modificada. Nota: O desalinhamento deste entalhe de corte e a abertura da saída irão perturbar a administração do anestésico. Esta parte é um potencial ponto fraco neste sistema personalizado. Se houver fundos disponíveis, um coletor comercial deve ser usado. Abreviação: SAA = serial anesthesia array. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65144/65144fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
2. Antes da exposição anestésica
<ol><li>Vinte e quatro horas ou mais antes da exposição ao anestésico, classifique as coortes de moscas conforme necessário para o experimento usando o método preferido (por exemplo, CO2 ou éter).</li>
</ol>3. Funcionamento do AEA
<ol><li>Transfira moscas de frascos para frascos de alimentos para tubos cônicos vazios de 50 mL (sem CO2).<ol><li>Conte e registre todas as moscas mortas antes da exposição.</li>
	</ol></li>
	<li>Uncap e rosquear tubos cônicos de 50 mL com moscas sobre o SAA.</li>
	<li>Ligue o gás transportador e ajuste para a vazão desejada. NOTA: Nós normalmente usamos 1-2 L/min.</li>
	<li>Ajuste o vaporizador anestésico para a concentração desejada. NOTA: Normalmente usamos 2% para isoflurano e 3,5% para sevoflurano, que são doses equipotentes em mamíferos10.</li>
	<li>Expor as moscas pela duração desejada (min: 15 min). NOTA: Recomenda-se um tempo mínimo de exposição de 15 min para evitar uma possível variabilidade no equilíbrio entre as posições do SAA. Nesse sistema, os anestésicos levam de 2 a 3 minutos para se equilibrarem em todas as posições.</li>
	<li>Ao final da exposição, lave o sistema com fluxo de gás fresco (vaporizador regulado para 0%) a 1,5 L/min por 5 min, correspondendo a aproximadamente 10x volumes do volume total de SAA.</li>
</ol>4. Lista de verificação antes de iniciar um experimento
<ol><li>Abra o regulador de alta pressão (na parte superior do tanque de ar) completamente e, em seguida, feche-o meia volta para garantir o fluxo de gás transportador.</li>
	<li>Siga a tubulação de cada linha para os i) fluxômetros e ii) vaporizador (certifique-se de que a entrada/saída esteja conectada corretamente) e iii) verifique o nível anestésico nos vaporizadores.</li>
	<li>Depois de carregar as câmaras com os sujeitos, verifique se o ar/gás está fluindo com o teste de bolhas ou o indicador de fluxo. NOTA: Alguns vaporizadores não permitem o fluxo de ar quando o mostrador está na posição desligada.</li>
	<li>Quando o gás estiver fluindo, confirme se o medidor de vazão e o indicador de fluxo a jusante indicam vazão.</li>
	<li>Ao final do experimento, aguarde 4-5 min de fluxo aéreo para lavar o anestésico.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Jevtovic-Todorovic, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+exposure+to+common+anesthetic+agents+causes+widespread+neurodegeneration+in+the+developing+rat+brain+and+persistent+learning+deficits.">Early exposure to common anesthetic agents causes widespread neurodegeneration in the developing rat brain and persistent learning deficits.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (3), 876-882 (2003).</li><li>Vutskits, L., Xie, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lasting+impact+of+general+anaesthesia+on+the+brain:+Mechanisms+and+relevance.">Lasting impact of general anaesthesia on the brain: Mechanisms and relevance.</a> Nature Reviews Neuroscience. 17 (11), 705-717 (2016).</li><li>McGurk, L., Berson, A., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+as+an+in+vivo+model+for+human+neurodegenerative+disease.">Drosophila as an in vivo model for human neurodegenerative disease.</a> Genetics. 201 (2), 377-402 (2015).</li><li>Rand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophotoxicology:+The+growing+potential+for+Drosophila+in+neurotoxicology.">Drosophotoxicology: The growing potential for Drosophila in neurotoxicology.</a> Neurotoxicology and Teratology. 32 (1), 74-83 (2010).</li><li>Olufs, Z. P. G., Loewen, C. A., Ganetzky, B., Wassarman, D. A., Perouansky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+variability+affects+absolute+and+relative+potencies+and+kinetics+of+the+anesthetics+isoflurane+and+sevoflurane+in+Drosophila+melanogaster.">Genetic variability affects absolute and relative potencies and kinetics of the anesthetics isoflurane and sevoflurane in Drosophila melanogaster.</a> Scientific Reports. 8, 2348 (2018).</li><li>Stollings, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+modulation+by+volatile+anesthetics.">Immune modulation by volatile anesthetics.</a> Anesthesiology. 125 (2), 399-411 (2016).</li><li>Yamaguchi, M., Yoshida, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila as a model organism. In Drosophila Models for Human Diseases., edited by. , 1-10 (2018).</li><li>Hoffmann, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immune+response+of+Drosophila.">The immune response of Drosophila.</a> Nature. 426 (6962), 33-38 (2003).</li><li>Buchon, N., Silverman, N., Cherry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+in+Drosophila+melanogaster-From+microbial+recognition+to+whole-organism+physiology.">Immunity in Drosophila melanogaster-From microbial recognition to whole-organism physiology.</a> Nature Reviews Immunology. 14 (12), 796-810 (2014).</li><li>Shaughnessy, M. R., Hofmeister, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+review+of+sevoflurane+and+isoflurane+minimum+alveolar+concentration+in+domestic+cats.">A systematic review of sevoflurane and isoflurane minimum alveolar concentration in domestic cats.</a> Veterinary Anaesthesia and Analgesia. 41 (1), 1-13 (2014).</li><li>Olufs, Z. P. G., Ganetzky, B., Wassarman, D. A., Perouansky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+complex+I+mutations+predispose+Drosophila+to+isoflurane+neurotoxicity.">Mitochondrial complex I mutations predispose Drosophila to isoflurane neurotoxicity.</a> Anesthesiology. 133 (4), 839-851 (2020).</li><li>Johnson-Schlitz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthetic+preconditioning+of+traumatic+brain+injury+is+ineffective+in+a+Drosophila+model+of+obesity.">Anesthetic preconditioning of traumatic brain injury is ineffective in a Drosophila model of obesity.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 381 (3), 229-235 (2022).</li><li>Schiffman, H. J., Olufs, Z. P. G., Lasarev, M. R., Wassarman, D. A., Perouansky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ageing+and+genetic+background+influence+anaesthetic+effects+in+a+D.+melanogaster+model+of+blunt+trauma+with+brain+injury.">Ageing and genetic background influence anaesthetic effects in a D. melanogaster model of blunt trauma with brain injury.</a> British Journal of Anaesthesia. 125 (1), 77-86 (2020).</li><li>Scharenbrock, A. R., Schiffman, H. J., Olufs, Z. P. G., Wassarman, D. A., Perouansky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+among+genetic+background,+anesthetic+agent,+and+oxygen+concentration+shape+blunt+traumatic+brain+injury+outcomes+in+Drosophila+melanogaster.">Interactions among genetic background, anesthetic agent, and oxygen concentration shape blunt traumatic brain injury outcomes in Drosophila melanogaster.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (18), 6926 (2020).</li><li>Fischer, J. A., Olufs, Z. P. G., Katzenberger, R. J., Wassarman, D. A., Perouansky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthetics+influence+mortality+in+a+Drosophila+model+of+blunt+trauma+with+traumatic+brain+injury.">Anesthetics influence mortality in a Drosophila model of blunt trauma with traumatic brain injury.</a> Anesthesia &amp; Analgesia. 126 (6), 1979-1986 (2018).</li><li>Katzenberger, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+of+closed+head+traumatic+brain+injury.">A Drosophila model of closed head traumatic brain injury.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (44), E4152-E4159 (2013).</li><li>Katzenberger, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+to+inflict+closed+head+traumatic+brain+injury+in+Drosophila.">A method to inflict closed head traumatic brain injury in Drosophila.</a> Journal of Visualized Experiments. (100), e52905 (2015).</li><li>Loewen, C. A., Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mito-nuclear+interactions+affecting+lifespan+and+neurodegeneration+in+a+Drosophila+model+of+Leigh+syndrome.">Mito-nuclear interactions affecting lifespan and neurodegeneration in a Drosophila model of Leigh syndrome.</a> Genetics. 208 (4), 1535-1552 (2018).</li><li>Johnson-Schlitz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthetic+preconditioning+of+traumatic+brain+injury+is+ineffective+in+a+Drosophila+model+of+obesity.">Anesthetic preconditioning of traumatic brain injury is ineffective in a Drosophila model of obesity.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 381 (3), 229-235 (2022).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+postconditioning+reduces+ischemia-induced+nuclear+factor-kappaB+activation+and+interleukin+1beta+production+to+provide+neuroprotection+in+rats+and+mice.">Isoflurane postconditioning reduces ischemia-induced nuclear factor-kappaB activation and interleukin 1beta production to provide neuroprotection in rats and mice.</a> Neurobiology of Disease. 54, 216-224 (2013).</li><li>Leibovitch, B. A., Campbell, D. B., Krishnan, K. S., Nash, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+that+affect+ion+channels+change+the+sensitivity+of+Drosophila+melanogaster+to+volatile+anesthetics.">Mutations that affect ion channels change the sensitivity of Drosophila melanogaster to volatile anesthetics.</a> Journal of Neurogenetics. 10 (1), 1-13 (1995).</li><li>Tinklenberg, J. A., Segal, I. S., Guo, T. Z., Maze, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+anesthetic+action+on+the+potassium+channels+of+the+Shaker+mutant+of+Drosophila.">Analysis of anesthetic action on the potassium channels of the Shaker mutant of Drosophila.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 625, 532-539 (1991).</li><li>Gamo, S., Ogaki, M., Nakashima-Tanaka, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+differences+in+minimum+anesthetic+concentrations+in+Drosophila+melanogaster.">Strain differences in minimum anesthetic concentrations in Drosophila melanogaster.</a> Anesthesiology. 54 (4), 289-293 (1981).</li><li>Campbell, J. L., Nash, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+visually-induced+jump+response+of+Drosophila+melanogaster+is+sensitive+to+volatile+anesthetics.">The visually-induced jump response of Drosophila melanogaster is sensitive to volatile anesthetics.</a> Journal of Neurogenetics. 12 (4), 241-251 (1998).</li><li>Perouansky, M., Hentschke, H., Perkins, M., Pearce, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amnesic+concentrations+of+the+nonimmobilizer+1,2-dichlorohexafluorocyclobutane+(F6,+2N)+and+isoflurane+alter+hippocampal+theta+oscillations+in+vivo.">Amnesic concentrations of the nonimmobilizer 1,2-dichlorohexafluorocyclobutane (F6, 2N) and isoflurane alter hippocampal theta oscillations in vivo.</a> Anesthesiology. 106 (6), 1168-1176 (2007).</li></ol>

Os autores declaram não haver conflitos de interesse.

As etapas críticas na construção do SAA incluem garantir encaixes apertados para evitar o vazamento da mistura anestésica de gases. O SAA deve ser alojado num exaustor de fumos para evitar a contaminação do espaço do laboratório. Todos os elementos, desde as garrafas de gás transportadoras até ao indicador de caudal a jusante do AEA, devem ser verificados conforme descrito na lista de verificação.
Outros métodos de administração de AGV em moscas são complicados de operar (o inebriômetro)21, têm baixo rendimento 22, não permitem a exposição simultânea de múltiplas populações 23, não permitem o controle preciso da concentração anestésica 21 ou têm uma leitura difícil de traduzir em termos clinicamente aceitos 24.
A versão atual do SAA depende de um vaporizador comercial e, portanto, os estudos toxicológicos são limitados aos anestésicos voláteis. Se usado com outras substâncias voláteis, um vaporizador pode ser usado "off label" após calibrar a saída. Alternativamente, um método diferente de vaporização das substâncias voláteis poderia ser aplicado, o que exigiria medidas dedicadas para titular as concentrações do fármaco, como descrito anteriormente25.
Além dos indicadores de vazão, não há alarmes (ou seja, se os tanques estiverem vazios, o fluxo através do SAA será interrompido). Dependendo da intensidade do uso, o SAA pode precisar de limpeza, aperto e, possivelmente, substituição da tubulação Tygon. Realizamos "manutenção" em nosso SAA original duas vezes em 7 anos de uso.
Este método para anestesiar moscas-das-frutas permite o uso da caixa de ferramentas genéticas disponível para pesquisadores de Drosophila em um sistema de alto rendimento. Várias coortes de moscas de diferentes populações (por exemplo, genótipo, idade, sexo) podem ser expostas simultaneamente a concentrações anestésicas idênticas e à combinação desejada de gás carreador (ar,O 2, N2 O, gases nobres) adequada à questão de pesquisa em questão.
Mostramos aqui que o SAA tem sido útil para revelar mudanças inesperadas na resiliência à toxicidade do isoflurano na linha de moscas ND2360114 e que as linhagens padrão de moscas de laboratório diferem em sua responsividade ao PA.
O SAA pode ser adaptado para estudar os efeitos de outros compostos orgânicos voláteis (COV) sobre insetos (por exemplo, abelhas). Para COVs com pressões de vapor próximas às dos anestésicos voláteis (isoflurano: 240 mmHg a 20 °C), vaporizadores convencionais poderiam ser usados, mas o débito teria que ser calibrado. O vaporizador comercial para desflurano é aquecido, potencialmente oferecendo flexibilidade adicional.

A existência de efeitos anestésicos colaterais (isto é, efeitos que não são imediatamente observáveis, mas podem ter consequências comportamentais tardias) é geralmente aceita, mas a compreensão de seus mecanismos e fatores de risco permanece rudimentar 1,2. Sua manifestação tardia e sutileza limitam o número de variáveis potencialmente importantes que podem ser investigadas em modelos de mamíferos dentro de prazos razoáveis e a um custo aceitável. A mosca-da-fruta (Drosophila melanogaster) oferece vantagens únicas no contexto de doenças neurodegenerativas3 e para triagem toxicológica4 que, até o momento, não foram aplicadas ao estudo dos efeitos colaterais anestésicos.
Desenvolvemos o seriado anesthesia array (SAA) para facilitar o uso de moscas-das-frutas no estudo da farmacodinâmica e farmacogenética dos anestésicos. Uma das principais vantagens da SAA é a exposição simultânea a condições experimentais idênticas de múltiplas coortes. Quando combinado com a flexibilidade experimental de moscas-das-frutas, o alto rendimento do SAA permite a exploração de variáveis biológicas e ambientais em uma escala impossível em modelos de mamíferos. 
Em princípio, o SAA é simplesmente uma série de locais anestesiantes conectados (câmaras feitas de frascos de 50 mL) através dos quais um gás transportador fornece agentes voláteis. A primeira câmara do sistema contém água destilada através da qual o gás transportador é umidificado (as moscas são sensíveis à desidratação), e termina com um indicador de fluxo simples que indica o fluxo de gás através do sistema. Redes finas colocadas nas aberturas da tubulação de conexão separam as câmaras para evitar a migração de moscas entre as câmaras. O número de locais "em série" é limitado pela resistência ao fluxo de gás não pressurizado (tubulações, redes). 
Caracterizamos a cinética deste protótipo SAA em publicaçãoanterior5. Embora as propriedades farmacocinéticas exatas variem entre os AAS, os fundamentos relevantes que foram testados experimentalmente são os seguintes: (i) um fluxo inicial de 1,5-2 L/min equilibra todas as câmaras (volume total de ±550 mL) com a concentração desejada de anestésico dentro de 2 min; (ii) a concentração de vapor anestésico entregue às câmaras não muda sensivelmente entre o primeiro e o último local, porque a quantidade de anestésico contida no volume de gás em uma câmara individual (50 mL) excede em muito a quantidade absorvida por qualquer número de moscas; e (iii) uma vez que as câmaras estejam equilibradas, o fluxo de gás carreador pode ser reduzido (50-100 mL/min ou menos) para evitar desperdício e contaminação do ambiente (os anestésicos voláteis têm propriedades de gases de efeito estufa). O fluxo mínimo necessário para manter uma concentração de vapor em estado estacionário depende principalmente do vazamento do SAA, já que a absorção de vapor pelas moscas é desprezível. Nessas condições padrão (isoflurano a 2% e fluxo de gás carreador de 1,5 L/min), as moscas são anestesiadas (imóveis) em todas as posições da matriz dentro de 3-4 min, com diferenças imperceptíveis entre as posições. Os VGAs podem ser administrados por minutos a horas, e nossos paradigmas típicos de exposição estão na faixa de 15 min a 2 h. Para lavar o sistema, o vaporizador é desligado e o fluxo é mantido para trocar aproximadamente 10x volumes do array (1,5 L/min por 5 min). A velocidade de eliminação do anestésico varia de acordo com a taxa de fluxo definida.
Os agentes anestésicos voláteis interagem com inúmeros alvos ainda não identificados, incluindo o sistema imune-inflamatório6. A contribuição de alvos moleculares individuais para desfechos primários versus colaterais (o "estado anestésico" vs. "efeitos colaterais" de longo e curto prazo) é pouco compreendida. Portanto, um sistema de moscas sensíveis e de alto rendimento é valioso para informar experimentos em animais superiores, apesar das diferenças óbvias entre moscas e mamíferos7. Algumas diferenças podem, de fato, ser vantajosas; Por exemplo, o sistema imunológico da mosca difere do de animais superiores por não possuir o braço adaptativo da resposta8. Embora isso possa parecer uma limitação para a compreensão da doença em humanos, oferece uma oportunidade única para estudar a interação dos VGAs com a resposta imune-inflamatória inata isoladamente da resposta adaptativa9. Isso permite estudar os efeitos farmacológicos da VGA sobre a inflamação e sua modulação pelos variados backgrounds genéticos presentes em uma população.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Serial Anesthesia Array:&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Serological Pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-676-10C</td>
			<td>Polystyrene, 5mL serological pipette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1495949A</td>
			<td>Polypropylene, 50 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cable Tie Mounting Pad</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>6EEE6</td>
			<td>1.25 inch L x 1 inch W x 0.28 inch H</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispensing Syringe</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>5FVE0</td>
			<td>10 mL with Luer-Lock Connection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fabric Mesh Netting</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1 mm mesh</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow Indicator</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>8RH52</td>
			<td>5/16 to 1/2 inch connection size, paddle wheel style</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Tubing</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>E-3603</td>
			<td>ID: 5/16, OD: 7/16, wall: 1/16</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wood Frame</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>10 feet of 2 inch x 3/4 inch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zip Tie</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>&#62;5inch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaporizer Interface (Budget Alternative to Manifold):</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispensing Syringe</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>5FVE0</td>
			<td>10 mL with Luer-Lock Connection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial Manifold and Vaporizers:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4 inch Equal Barbed Y Connector</td>
			<td>Somni Scientific</td>
			<td>BF-9000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/8 inch NPT to 1/4 inch Barbed Elbow (Plastic)</td>
			<td>Somni Scientific</td>
			<td>BF-9004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AIR 0-4 LPM Flowmeter w/ black knob</td>
			<td>Somni Scientific</td>
			<td>FP-4002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flowmeter auxiliary mounting bracket</td>
			<td>Somni Scientific</td>
			<td>NonInvPart</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Air, 1/8 inch NPT Male x DISS Male</td>
			<td>Somni Scientific</td>
			<td>GF-11012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TT-2 Table Top Anesthesia System, built in dual diverter valve system. Includes 6&#39; color coded tubing X2. (Vaporizer not Included)</td>
			<td>Somni Scientific</td>
			<td>TT-17000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tec 7 Isoflurane Vaporizer</td>
			<td>GE Datex-Ohmeda</td>
			<td>1175-9101-000</td>
			<td>Agent-specific vaporizer (Isoflurane)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tec 7 Sevoflurane Vaporizer</td>
			<td>GE Datex-Ohmeda</td>
			<td>1175-9301-000</td>
			<td>Agent-specific vaporizer (Sevoflurane)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the serial anesthesia array for the high-throughput investigation of volatile agents using drosophila melanogaster

Os anestésicos gerais voláteis (AGV) são usados em todo o mundo em milhões de pessoas de todas as idades e condições médicas. Altas concentrações de VGAs (centenas de micromolares a baixos milimolares) são necessárias para alcançar uma supressão profunda e não fisiológica da função cerebral, apresentando-se como "anestesia" para o observador. O espectro completo dos efeitos colaterais desencadeados por concentrações tão altas de agentes lipofílicos não é conhecido, mas interações com o sistema imune-inflamatório têm sido observadas, embora seu significado biológico não seja compreendido.
Para investigar os efeitos biológicos dos VGAs em animais, desenvolvemos um sistema denominado serial anesthesia array (SAA) para explorar as vantagens experimentais oferecidas pela mosca-da-fruta (Drosophila melanogaster). O SAA consiste em oito câmaras dispostas em série e conectadas a um fluxo de entrada comum. Algumas peças estão disponíveis no laboratório, e outras podem ser facilmente fabricadas ou compradas. Um vaporizador, que é necessário para a administração calibrada de VGAs, é o único componente fabricado comercialmente. Os VGAs constituem apenas uma pequena porcentagem da atmosfera que flui através do SAA durante a operação, já que o volume (tipicamente mais de 95%) é gás transportador; A transportadora padrão é a Air. No entanto, o oxigênio e quaisquer outros gases podem ser investigados. 
A principal vantagem do SAA em relação aos sistemas anteriores é que ele permite a exposição simultânea de várias coortes de moscas a doses exatamente tituláveis de VGAs. Concentrações idênticas de VGAs são alcançadas em poucos minutos em todas as câmaras, proporcionando assim condições experimentais indistinguíveis. Cada câmara pode conter desde uma única mosca até centenas de moscas. Por exemplo, o SAA pode examinar simultaneamente oito genótipos diferentes ou quatro genótipos com diferentes variáveis biológicas (por exemplo, macho vs. fêmea, velho vs. jovem). Usamos o SAA para investigar a farmacodinâmica de VGAs e suas interações farmacogenéticas em dois modelos experimentais de moscas associadas a neuroinflamação-mutantes mitocondriais e traumatismo cranioencefálico (TCE).

Um link de vídeo SAA é fornecido aqui: Perouansky Research Methods - Department of Anesthesiology - UW-Madison (wisc.edu) (https://anesthesia.wisc.edu/research/researchers/perouansky-laboratory/perouansky-research-methods/) Nosso laboratório utilizou a SAA para (i) estudar o efeito do genótipo na sensibilidade comportamental aos anestésicos5; (ii) triagem de mutantes mitocondriais para efeitos colaterais dos anestésicos11; e (iii) investigar a farmacodinâmica do isoflurano e do sevoflurano sobre os desfechos no traumatismo cranioencefálico (TCE)12,13,14,15,16,17. Os resultados publicados demonstram claramente que o background genético influencia a farmacodinâmica dos AGVs utilizados clinicamente, tanto em relação ao fenótipo convencional de anestesia quanto aos efeitos colaterais da toxicidade anestésica, bem como à proteção tecidual 5,11,13,14,15.
Exemplo representativo 1 (Figura 2):Deriva genética na resiliência à toxicidade do isoflurano detectada por condições experimentais reprodutíveis de forma confiável A descoberta de uma mudança quantitativa gradual na mortalidade induzida pela VGA entre moscas ND2360114 cultivadas separadamente é um exemplo da utilidade de comparações confiáveis da farmacodinâmica anestésica entre grupos experimentais usando o SAA. ND23 é um gene que codifica uma subunidade no núcleo do Complexo I do mETC (análogo ao Ndufs8 em mamíferos)18. Mutações nessa subunidade são causa da síndrome de Leigh, uma doença mitocondrial letal. Observamos um enfraquecimento gradual do fenótipo de mortalidade induzida pelo isoflurano ao longo do tempo em vários estoques homozigotos ND2360114 cultivados simultaneamente sob condições laboratoriais padrão (ou seja, sem exposição a VGAs). Essa adaptação evolutiva à toxicidade do isoflurano ocorreu na ausência de qualquer exposição aos VGAs e é provavelmente um efeito colateral da "sobrevivência do mais apto" dentro dos estoques mutantes. Essa mudança gradual na sensibilidade ao isoflurano teria permanecido não reconhecida sem nossa confiança de que as condições experimentais eram idênticas ao longo dos ensaios e ao longo do tempo. Concluímos que a seleção favorece modificadores dos efeitos da ND2360114, com aumento coincidente da resiliência à toxicidade do isoflurano. Como a inflamação no sistema nervoso central desempenha um papel importante na patogênese da síndrome de Leigh, a evolução da resistência testemunhada pode ser devida a mudanças adaptativas na resposta imune-inflamatória inata, sendo a resistência à toxicidade do isoflurano um subproduto acidental.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65144/65144fig02.jpg"> Figura 2: Variação na mortalidade induzida pela toxicidade do isoflurano como resultado da pressão evolutiva em moscas ND2360114. Sete linhagens (A-G) isoladas de uma única população através de acasalamentos de par único, expandidas e testadas para mortalidade em 24 h (PM24) após exposição de 2 h ao isoflurano a 2% (aos 10-13 dias de idade) apresentam variabilidade no fenótipo decorrente de uma única população. Dados apresentados em gráficos de caixa e bigode. As caixas representam o segundo e terceiro quartis dos dados, com os bigodes estendendo-se aos pontos de dados mínimo e máximo. A média e a mediana são indicadas por "+" e linhas horizontais, respectivamente. As porcentagens de mortalidade das réplicas individuais (N) são mostradas como círculos. N = 3-4 frascos para injetáveis de 20-50 moscas/frasco. Valor de p para uma ANOVA unidirecional comum; p = 0,012 indica diferença significativa entre as médias. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65144/65144fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
Exemplo representativo 2 (Figura 3): Ilustração de uma aplicação de alto rendimento do SAA para revelar efeitos genéticos de base na farmacodinâmica do isoflurano Como exemplo do alto rendimento do sistema, a Figura 3 ilustra os efeitos de exposições idênticas ao isoflurano (15 min de isoflurano a 2%) previamente ao traumatismo cranioencefálico (TCE)16, protocolo que testa o pré-condicionamento anestésico (PA) nesse modelo de mosca13,15,19. A leitura é mortalidade 24 h após TCE corrigido para atrito natural (IM24). Nesse modelo, todas as moscas recuperaram a mobilidade (isto é, estavam vivas) dentro de 30 minutos após o TCE, e a mortalidade registrada no IM24 foi resultado de lesão cerebral secundária (ICE). Nas quatro linhagens, a PA com isoflurano reduziu o IM24 em vários graus, indicando que a responsividade à PA é uma característica quantitativa. Como a resposta inflamatória é um fator importante na morbidade por ISCs, a PA pode envolver modulação do sistemaimune20.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65144/65144fig03.jpg"> Figura 3: Influência do background genético na supressão da mortalidade (IM24) pelo pré-condicionamento com isoflurano. O pré-condicionamento de moscas com 15 min de isoflurano a 2% (roxo) reduziu o índice de mortalidade em 24 h (IM24) nas cepas w 1118 e y1w1118 (p < 0,0001 e p = 0,036, respectivamente). O IM 24 não foi significativamente menor nas linhas pré-condicionadas Oregon R (OR) e Canton S (CS) (p = 0,16 e p = 0,27, respectivamente). Dados apresentados em gráficos de caixa e bigode. As caixas representam o segundo e terceiro quartis dos dados, com os bigodes estendendo-se aos pontos de dados mínimo e máximo. A média e a mediana são indicadas por "+" e linhas horizontais, respectivamente. Os valores de MI24 das réplicas individuais (N) são mostrados como círculos. N = 15-33 frascos de 30-40 moscas/frasco para moscas tratadas com TCE. N = 2-15 frascos para injetáveis de 30-40 moscas/frasco para controlos não tratados. Valores de p de um teste t de Student bicaudal não pareado. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65144/65144fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

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The Serial Anesthesia Array for the High-Throughput Investigation of Volatile Agents Using Drosophila melanogaster

A mosca-da-fruta (Drosophila melanogaster) é amplamente utilizada para pesquisas biológicas e toxicológicas. Para expandir a utilidade das moscas, desenvolvemos um instrumento, o serial anesthesia array, que expõe simultaneamente múltiplas amostras de moscas a anestésicos gerais voláteis (AGV), tornando possível investigar os efeitos colaterais (tóxicos e protetores) dos AGVs.

O arranjo de anestesia seriado para a investigação de alto rendimento de agentes voláteis usando Drosophila melanogaster

Volatile general anesthetics (VGAs) are used worldwide on millions of people of all ages and medical conditions. High concentrations of VGAs (hundreds of ...

O SAA permite o processamento de alto rendimento para investigar a farmacologia de agentes voláteis em organismos-modelo invertebrados que são dotados de um cérebro sofisticado e um vasto repertório de comportamentos. Em combinação com a caixa de ferramentas genéticas disponível em Drosophila melanogaster, esta técnica permite que a farmacogenética de agentes voláteis seja estudada de forma rápida e acessível. Muitas pessoas estão expostas a agentes voláteis como poluentes ou agentes terapêuticos.Além da anestesia, os anestésicos voláteis têm inúmeros efeitos colaterais tóxicos e benéficos. O grau de efeito é parcialmente determinado pela genética, que permaneceu em grande parte inexplorada. Depois de fazer a estrutura de madeira, modifique as tampas de tubo de 50 mililitros fazendo dois furos em cada tampa com uma broca de 9/32 polegadas.Lixe os buracos para limpar o plástico esfarrapado. Lixe também a parte superior da tampa para rugar a superfície. Em seguida, corte pipetas sorológicas de cinco mililitros para dimensionar, marcando o plástico e quebrando-o limpo na linha marcada.Lixe as extremidades das pipetas cortadas ou quebradas. Depois, cole a rede nos tubos e corte a rede para o tamanho do tubo assim que o adesivo secar. Insira os tubos nos orifícios das tampas cônicas com ambos os tubos estendendo-se acima da tampa.Certifique-se de que o tubo de entrada se estenda por mais tempo no tubo do que o fluxo de saída. Aplique cola na parte superior das tampas ao redor dos tubos para prender as peças e deixá-las secar. Conecte amarrações de cabos adesivos ao quadro.Afixe as tampas no quadro usando gravatas de zíper e corte as extremidades da etiqueta de gravata zip. Corte e conecte o comprimento da tubulação tygon aos tubos de entrada e saída em cada tampa modificada. Começando na extremidade a montante, conecte a tubulação primeiro à entrada e, em seguida, da saída à entrada da posição subsequente.Em seguida, adicione um indicador de fluxo à entrada mais downstream. Coloque um tubo cônico de 50 mililitros na primeira posição e marque a marca de enchimento de água. Retire o tubo.Encha-o com água abaixo do tubo de entrada e coloque-o novamente na posição. Prepare a interface para o vaporizador. Remova os êmbolos, corte entalhes de duas seringas dosadoras de 10 mililitros e insira-os na entrada e saída do vaporizador com os entalhes voltados diretamente para a frente do vaporizador para alinhar com os orifícios.Conecte todo o sistema. Use tubulação tygon para conectar o tanque de gás transportador com o regulador, medidor de vazão específico de gás, vaporizador e SAA. Preencha posições vazias na matriz com tubos de crônica vazios de 50 mililitros.Agora ligue o tanque de gasolina. Abra o medidor de vazão para dois litros por minuto e ligue o vaporizador para 0%Confirme o fluxo de gás através do sistema verificando o medidor de vazão a montante do vaporizador e o indicador de vazão a jusante da última câmara do SAA para vazão. Alternativamente, insira a extremidade da tubulação a jusante na água e procure bolhas.24 horas ou mais antes da exposição anestésica, classificar as coortes de moscas conforme necessário para o experimento usando o método preferido. Transfira moscas de frascos de alimentos para tubos cônicos vazios de 50 mililitros. Conte e registre todas as moscas mortas antes da exposição.Uncap e rosqueie tubos cônicos de 50 mililitros com moscas no SAA. Ligue o gás transportador e configure-o para a vazão desejada. Ajuste o vaporizador anestésico para a concentração desejada e exponha as moscas pela duração desejada.Ao final da exposição, lave o sistema com o fluxo de gás fresco a 1,5 litros por minuto durante cinco minutos, correspondendo a aproximadamente 10x volumes do volume total de SAA. Abra completamente o regulador de alta pressão e feche-o meia volta para garantir o fluxo de gás do transportador. Siga a tubulação de cada linha até os medidores de vazão e vaporizador, e verifique o nível anestésico nos vaporizadores.Confirme que, quando o gás flui, ele indica o fluxo no medidor de vazão e no indicador de fluxo a jusante. Ao final do experimento, aguarde de quatro a cinco minutos de fluxo aéreo para lavar o anestésico. Sete linhagens isoladas de uma única população através de reuniões de par único mostraram variação na mortalidade induzida pela toxicidade por iso flúor devido à pressão evolutiva em moscas ND23 60114.Moscas pré-condicionadas com 15 minutos de flúor iso a 2% antes do traumatismo cranioencefálico reduziram o índice de mortalidade em 24 horas nas cepas branca 1118 e amarela/branca. O índice de mortalidade em 24 horas não foi significativamente menor nas linhagens Oregon R e Canton S pré-condicionadas. Durante a montagem, os entalhes nas seringas modificadas devem estar alinhados com os orifícios das portas do vaporizador.Durante a exposição, verifique periodicamente se há fluxo através do sistema. Esse procedimento pode ser seguido para uma ampla variedade de estudos comportamentais, de sobrevivência e moleculares que podem levar a insights sobre a farmacologia de agentes voláteis.

Research

JoVE Journal

Genetics

The Serial Anesthesia Array for the High-Throughput Investigation of Volatile Agents Using Drosophila melanogaster

High-Throughput Robotically Assisted Isolation of Temperature-sensitive Lethal Mutants in Chlamydomonas reinhardtii

High-Throughput Robotically Assisted Isolation of Temperature-sensitive Lethal Mutants in Chlamydomonas reinhardtii

Alto Throughput Robotically Isolamento Assistida da temperatura sensível Lethal Mutantes em<em&gt; Chlamydomonas reinhardtii</em

Systematic identification and characterization of genetic perturbations have proven useful to decipher gene function and cellular pathways. However, the ...

Genética

Quantifying Abdominal Pigmentation in Drosophila melanogaster

Quantifying Abdominal Pigmentation in Drosophila melanogaster

Quantificando pigmentação abdominal em<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Pigmentation is a morphologically simple but highly variable trait that often has adaptive significance. It has served extensively as a model for ...

High Fat Diet Feeding and High Throughput Triacylglyceride Assay in Drosophila Melanogaster

High Fat Diet Feeding and High Throughput Triacylglyceride Assay in Drosophila Melanogaster

Dieta de alta gordura alimentar e ensaio de triacilglicerol alto Throughput em Drosophila Melanogaster.

Heart disease is the number one cause of human death worldwide. Numerous studies have shown strong connections between obesity and cardiac malfunction in ...

Generation of Native Chromatin Immunoprecipitation Sequencing Libraries for Nucleosome Density Analysis

Geração de imunoprecipitação da cromatina nativa sequenciamento de bibliotecas para análise da densidade nucleossoma

We present a modified native chromatin immunoprecipitation sequencing (ChIP-seq) experimental protocol compatible with a Gaussian mixture distribution ...

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

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Alta resolução hibridação fluorescente In Situ em embriões da drosófila e tecidos usando amplificação de sinal Tyramide

In our efforts to determine the patterns of expression and subcellular localization of Drosophila RNAs on a genome-wide basis, and in a variety of ...

G2-seq: A High Throughput Sequencing-based Technique for Identifying Late Replicating Regions of the Genome

G2-seq: Uma alta taxa de transferência baseada no sequenciamento técnica para identificar a tarde replicando regiões do genoma

Numerous techniques have been developed to follow the progress of DNA replication through the S phase of the cell cycle. Most of these techniques have ...

Robust DNA Isolation and High-throughput Sequencing Library Construction for Herbarium Specimens

Isolamento do DNA robusto e construção de biblioteca de sequenciamento de alto rendimento para espécimes de herbário

Herbaria are an invaluable source of plant material that can be used in a variety of biological studies. The use of herbarium specimens is associated with ...

High-throughput Identification of Synergistic Drug Combinations by the Overlap2 Method

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Identificação de alta produtividade de combinações de drogas sinérgica pelo método de sobreposição2

Although antimicrobial drugs have dramatically increased the lifespan and quality of life in the 20th century, antimicrobial resistance threatens our ...

Measuring Exercise Levels in Drosophila melanogaster Using the Rotating Exercise Quantification System (REQS)

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Drosophila melanogaster is a new model organism for studies in exercise biology. To date, two main exercise systems, the Power Tower and the Treadwheel ...

The TreadWheel: Interval Training Protocol for Gently Induced Exercise in Drosophila melanogaster

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