Name: the serial anesthesia array for the high-throughput investigation of volatile agents using drosophila melanogaster
Uploaded: 2023-02-24T13:10:00
Duration: 6 min 27 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Serial Anesthesia Array for the High-Throughput Investigation of Volatile Agents Using Drosophila melanogaster at JoVE.com

Мы благодарим Марка Г. Перкинса (Mark G. Perkins), Лаборатория Пирса, кафедра анестезиологии, Университет Висконсин-Мэдисон, за создание прототипа SAA. Работа поддерживается Национальным институтом общих медицинских наук (NIGMS) с R01GM134107 и фондом исследований и разработок кафедры анестезиологии Университета Висконсин-Мэдисон.

ПРИМЕЧАНИЕ: См. Таблицу материалов для получения подробной информации обо всех материалах, используемых в протоколе.
1. Строительство САА
<ol><li>Изготовьте раму, распилив дерево и собрав раму, используя размеры, указанные на рисунке 1А.</li>
	<li>Модифицируйте конические крышки пробирок объемом 50 мл.<ol><li>Просверлите по два отверстия в каждом колпачке сверлом 9/32 дюйма. Отшлифуйте отверстия, чтобы очистить рваный пластик. Отшлифуйте верхнюю часть колпачка, чтобы придать поверхности шероховатость (это помогает с адгезией клея).</li>
		<li>Разрежьте серологические пипетки объемом 5 мл по размеру (3 дюйма для притока и 1,5 дюйма для оттока), надрезав пластик, а затем разбив его на линии надбитых. Отшлифуйте концы разрезанных/сломанных пипеток.</li>
		<li>Приклейте сетку к тюбикам (обеспечьте надлежащее время высыхания клея). Обрежьте сетку по размеру трубки после того, как клей высохнет.</li>
		<li>Вставьте трубки в отверстия конических колпачков так, чтобы обе трубки выступали (на 3/4 дюйма) над крышкой; убедитесь, что впускная трубка простирается в трубку дольше, чем выпускная (рис. 1B).</li>
		<li>Нанесите клей на верхнюю часть колпачков вокруг тюбиков, чтобы скрепить детали вместе (прежде чем продолжить, обеспечьте надлежащее время высыхания клея).</li>
	</ol></li>
	<li>Прикрепите колпачки к раме и проложите трубку (рис. 1C).<ol><li>Прикрепите к раме клейкие кабельные стяжки (3,25 дюйма друг от друга, от центра к центру).</li>
		<li>Прикрепите колпачки к раме с помощью стяжек; Коротко обрежьте концы бирки для застежки-молнии.</li>
		<li>Отрежьте и подсоедините отрезки (9 дюймов) трубок Tygon к входным/выпускным трубам на каждой модифицированной крышке (рис. 1D). Начиная с верхнего конца, прикрепите сначала к притоку, а затем впоследствии прикрепите трубку от оттока к притоку следующего положения.</li>
		<li>Добавьте индикатор расхода к самому последующему «притоку» (позиция 10, рис. 1E).</li>
		<li>Поместите коническую трубку объемом 50 мл в первое положение и наполните ее водой чуть ниже впускной трубки (рис. 1F).</li>
	</ol></li>
	<li>Подготовьте сопряжение для испарителя. Снимите плунжеры, вырежьте насечки из двух дозирующих шприцев объемом 10 мл (1/2 дюйма в глубину x 1/4 дюйма в ширину, рис. 1G) и вставьте их во вход и выход испарителя так, чтобы насечки были обращены прямо к передней части испарителя, чтобы выровнять отверстия (рис. 1H). Дополнительно: Приклейте модифицированные шприцы на место. Если это возможно, используйте коммерческий коллектор (см. Таблицу материалов для одного из вариантов).</li>
	<li>Подключите всю систему. Используйте трубку Tygon для соединения компонентов вместе в следующем порядке: газгольдер-носитель с регулятором > расходомер > испаритель > SAA (рис. 1C).</li>
	<li>Заполните пустые позиции на массиве пустыми коническими пробирками объемом 50 мл. Включите бензобак, откройте расходомер до ~2 л/мин и включите испаритель на 0%. Подтвердите расход газа в системе, проверив расходомер перед испарителем и индикатор расхода после последней камеры SAA на предмет расхода. В качестве альтернативы вставьте конец трубки, расположенный ниже по потоку, в воду и ищите пузырьки. ПРИМЕЧАНИЕ: Поскольку система не находится под давлением, водяной столб выше пары сантиметров остановит поток. Если на нижнем конце массива нет потока, проверьте следующее: испаритель должен быть включен, чтобы обеспечить поток; убедитесь, что регулятор бака и расходомеры пропускают поток; проверьте положение массива, чтобы убедиться, что трубки плотно прикручены; и проверьте, нет ли утечек вокруг клея на модифицированных колпачках.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65144/65144fig01.jpg"> Рисунок 1: Конструкция САА. (А) Схема, с измерениями, деревянной рамы, поддерживающей САА. (B) Схематизированное поперечное сечение с измерениями модифицированного колпачка с входными и выпускными трубками, изготовленными из серологических пипеток объемом 5 мл. (C) Собранные SAA (воспроизведены из Olufs et al.5) (D) Детали модифицированного конического колпачка объемом 50 мл с изображением входных и выпускных трубок. (E) Последующий (позиция 10) отток с индикатором расхода. (F) Находящаяся выше по потоку (позиция 1) заполненная водой трубка для увлажнения газа-носителя. Красная стрелка указывает уровень воды. (G) Модифицированный дозирующий шприц объемом 10 мл для импровизированного коллектора. Красным кругом выделена вырезная выемка, расположенная между метками 8 мл и 10 мл (или 1/2 дюйма x 1/4 дюйма). (H) Вид испарителя Tec7 сзади с указанием установки и ориентации модифицированных шприцев. На этом снимке установлен только один шприц, чтобы слева было показано отверстие (красная стрелка), которое необходимо выровнять с выемкой модифицированного шприца. Примечание: Смещение этой выемки и выходного отверстия нарушит введение анестетика. Эта часть является потенциальным слабым местом в этой системе, изготовленной по индивидуальному заказу. При наличии средств следует использовать коммерческий коллектор. Аббревиатура: SAA = массив последовательной анестезии. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65144/65144fig01large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>
2. Перед воздействием анестетика
<ol><li>За двадцать четыре часа или более до воздействия анестетика отсортируйте когорты мух по мере необходимости для эксперимента, используя предпочтительный метод (например, CO2 или эфир).</li>
</ol>3. Деятельность САА
<ol><li>Переложите мух из пищевых флаконов в пустые конические пробирки объемом 50 мл (без CO2).<ol><li>Подсчитайте и запишите всех мертвых мух до воздействия.</li>
	</ol></li>
	<li>Снимите крышку и прикрутите конические пробирки объемом 50 мл с мухами к SAA.</li>
	<li>Включите газ-носитель и установите желаемый расход. ПРИМЕЧАНИЕ: Обычно мы используем 1-2 л/мин.</li>
	<li>Установите испаритель анестетика на желаемую концентрацию. ПРИМЕЧАНИЕ: Обычно мы используем 2% для изофлурана и 3,5% для севофлурана, которые являются эквипотентными дозами у млекопитающих10.</li>
	<li>Экспонируйте мух в течение желаемого времени (мин.: 15 мин). ПРИМЕЧАНИЕ: Рекомендуется минимальное время экспозиции 15 минут, чтобы избежать возможной изменчивости равновесия в разных положениях SAA. В этой системе требуется 2-3 минуты, чтобы анестетики уравновесились во всех положениях.</li>
	<li>В конце экспозиции промывайте систему потоком свежего газа (испаритель установлен на 0%) со скоростью 1,5 л/мин в течение 5 мин, что соответствует примерно 10-кратному объему от общего объема SAA.</li>
</ol>4. Контрольный список перед началом эксперимента
<ol><li>Полностью откройте регулятор высокого давления (сверху воздушного бака), а затем закройте его на пол-оборота, чтобы обеспечить поток газа-носителя.</li>
	<li>Следуйте трубкам для каждой линии к i) расходомерам и ii) испарителю (убедитесь, что вход/отток подключены правильно) и iii) проверьте уровень анестетика в испарителях.</li>
	<li>После загрузки камер испытуемыми убедитесь, что воздух / газ течет с помощью пузырькового теста или индикатора потока. ПРИМЕЧАНИЕ: Некоторые испарители не пропускают поток воздуха, когда циферблат находится в выключенном положении.</li>
	<li>Когда газ течет, убедитесь, что расходомер и индикатор расхода ниже по потоку показывают расход.</li>
	<li>В конце эксперимента дайте 4-5 минутам воздушного потока вымыть анестетик.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Jevtovic-Todorovic, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+exposure+to+common+anesthetic+agents+causes+widespread+neurodegeneration+in+the+developing+rat+brain+and+persistent+learning+deficits.">Early exposure to common anesthetic agents causes widespread neurodegeneration in the developing rat brain and persistent learning deficits.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (3), 876-882 (2003).</li><li>Vutskits, L., Xie, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lasting+impact+of+general+anaesthesia+on+the+brain:+Mechanisms+and+relevance.">Lasting impact of general anaesthesia on the brain: Mechanisms and relevance.</a> Nature Reviews Neuroscience. 17 (11), 705-717 (2016).</li><li>McGurk, L., Berson, A., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+as+an+in+vivo+model+for+human+neurodegenerative+disease.">Drosophila as an in vivo model for human neurodegenerative disease.</a> Genetics. 201 (2), 377-402 (2015).</li><li>Rand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophotoxicology:+The+growing+potential+for+Drosophila+in+neurotoxicology.">Drosophotoxicology: The growing potential for Drosophila in neurotoxicology.</a> Neurotoxicology and Teratology. 32 (1), 74-83 (2010).</li><li>Olufs, Z. P. G., Loewen, C. A., Ganetzky, B., Wassarman, D. A., Perouansky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+variability+affects+absolute+and+relative+potencies+and+kinetics+of+the+anesthetics+isoflurane+and+sevoflurane+in+Drosophila+melanogaster.">Genetic variability affects absolute and relative potencies and kinetics of the anesthetics isoflurane and sevoflurane in Drosophila melanogaster.</a> Scientific Reports. 8, 2348 (2018).</li><li>Stollings, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+modulation+by+volatile+anesthetics.">Immune modulation by volatile anesthetics.</a> Anesthesiology. 125 (2), 399-411 (2016).</li><li>Yamaguchi, M., Yoshida, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila as a model organism. In Drosophila Models for Human Diseases., edited by. , 1-10 (2018).</li><li>Hoffmann, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immune+response+of+Drosophila.">The immune response of Drosophila.</a> Nature. 426 (6962), 33-38 (2003).</li><li>Buchon, N., Silverman, N., Cherry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+in+Drosophila+melanogaster-From+microbial+recognition+to+whole-organism+physiology.">Immunity in Drosophila melanogaster-From microbial recognition to whole-organism physiology.</a> Nature Reviews Immunology. 14 (12), 796-810 (2014).</li><li>Shaughnessy, M. R., Hofmeister, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+review+of+sevoflurane+and+isoflurane+minimum+alveolar+concentration+in+domestic+cats.">A systematic review of sevoflurane and isoflurane minimum alveolar concentration in domestic cats.</a> Veterinary Anaesthesia and Analgesia. 41 (1), 1-13 (2014).</li><li>Olufs, Z. P. G., Ganetzky, B., Wassarman, D. A., Perouansky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+complex+I+mutations+predispose+Drosophila+to+isoflurane+neurotoxicity.">Mitochondrial complex I mutations predispose Drosophila to isoflurane neurotoxicity.</a> Anesthesiology. 133 (4), 839-851 (2020).</li><li>Johnson-Schlitz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthetic+preconditioning+of+traumatic+brain+injury+is+ineffective+in+a+Drosophila+model+of+obesity.">Anesthetic preconditioning of traumatic brain injury is ineffective in a Drosophila model of obesity.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 381 (3), 229-235 (2022).</li><li>Schiffman, H. J., Olufs, Z. P. G., Lasarev, M. R., Wassarman, D. A., Perouansky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ageing+and+genetic+background+influence+anaesthetic+effects+in+a+D.+melanogaster+model+of+blunt+trauma+with+brain+injury.">Ageing and genetic background influence anaesthetic effects in a D. melanogaster model of blunt trauma with brain injury.</a> British Journal of Anaesthesia. 125 (1), 77-86 (2020).</li><li>Scharenbrock, A. R., Schiffman, H. J., Olufs, Z. P. G., Wassarman, D. A., Perouansky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+among+genetic+background,+anesthetic+agent,+and+oxygen+concentration+shape+blunt+traumatic+brain+injury+outcomes+in+Drosophila+melanogaster.">Interactions among genetic background, anesthetic agent, and oxygen concentration shape blunt traumatic brain injury outcomes in Drosophila melanogaster.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (18), 6926 (2020).</li><li>Fischer, J. A., Olufs, Z. P. G., Katzenberger, R. J., Wassarman, D. A., Perouansky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthetics+influence+mortality+in+a+Drosophila+model+of+blunt+trauma+with+traumatic+brain+injury.">Anesthetics influence mortality in a Drosophila model of blunt trauma with traumatic brain injury.</a> Anesthesia &amp; Analgesia. 126 (6), 1979-1986 (2018).</li><li>Katzenberger, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+of+closed+head+traumatic+brain+injury.">A Drosophila model of closed head traumatic brain injury.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (44), E4152-E4159 (2013).</li><li>Katzenberger, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+to+inflict+closed+head+traumatic+brain+injury+in+Drosophila.">A method to inflict closed head traumatic brain injury in Drosophila.</a> Journal of Visualized Experiments. (100), e52905 (2015).</li><li>Loewen, C. A., Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mito-nuclear+interactions+affecting+lifespan+and+neurodegeneration+in+a+Drosophila+model+of+Leigh+syndrome.">Mito-nuclear interactions affecting lifespan and neurodegeneration in a Drosophila model of Leigh syndrome.</a> Genetics. 208 (4), 1535-1552 (2018).</li><li>Johnson-Schlitz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthetic+preconditioning+of+traumatic+brain+injury+is+ineffective+in+a+Drosophila+model+of+obesity.">Anesthetic preconditioning of traumatic brain injury is ineffective in a Drosophila model of obesity.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 381 (3), 229-235 (2022).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+postconditioning+reduces+ischemia-induced+nuclear+factor-kappaB+activation+and+interleukin+1beta+production+to+provide+neuroprotection+in+rats+and+mice.">Isoflurane postconditioning reduces ischemia-induced nuclear factor-kappaB activation and interleukin 1beta production to provide neuroprotection in rats and mice.</a> Neurobiology of Disease. 54, 216-224 (2013).</li><li>Leibovitch, B. A., Campbell, D. B., Krishnan, K. S., Nash, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+that+affect+ion+channels+change+the+sensitivity+of+Drosophila+melanogaster+to+volatile+anesthetics.">Mutations that affect ion channels change the sensitivity of Drosophila melanogaster to volatile anesthetics.</a> Journal of Neurogenetics. 10 (1), 1-13 (1995).</li><li>Tinklenberg, J. A., Segal, I. S., Guo, T. Z., Maze, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+anesthetic+action+on+the+potassium+channels+of+the+Shaker+mutant+of+Drosophila.">Analysis of anesthetic action on the potassium channels of the Shaker mutant of Drosophila.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 625, 532-539 (1991).</li><li>Gamo, S., Ogaki, M., Nakashima-Tanaka, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+differences+in+minimum+anesthetic+concentrations+in+Drosophila+melanogaster.">Strain differences in minimum anesthetic concentrations in Drosophila melanogaster.</a> Anesthesiology. 54 (4), 289-293 (1981).</li><li>Campbell, J. L., Nash, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+visually-induced+jump+response+of+Drosophila+melanogaster+is+sensitive+to+volatile+anesthetics.">The visually-induced jump response of Drosophila melanogaster is sensitive to volatile anesthetics.</a> Journal of Neurogenetics. 12 (4), 241-251 (1998).</li><li>Perouansky, M., Hentschke, H., Perkins, M., Pearce, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amnesic+concentrations+of+the+nonimmobilizer+1,2-dichlorohexafluorocyclobutane+(F6,+2N)+and+isoflurane+alter+hippocampal+theta+oscillations+in+vivo.">Amnesic concentrations of the nonimmobilizer 1,2-dichlorohexafluorocyclobutane (F6, 2N) and isoflurane alter hippocampal theta oscillations in vivo.</a> Anesthesiology. 106 (6), 1168-1176 (2007).</li></ol>

У авторов нет конфликтов интересов, о которых можно было бы заявить.

Важнейшие этапы строительства SAA включают обеспечение герметичных фитингов во избежание утечки анестезирующей смеси газов. SAA должен быть размещен в вытяжном шкафу, чтобы избежать загрязнения лабораторного помещения. Все элементы, от газовых баллонов-носителей до индикатора расхода после SAA, должны быть проверены, как указано в контрольном списке.
Другие методы введения VGA мухам сложны в эксплуатации (небриометр)21, имеют низкую пропускную способность 22, не допускают одновременного воздействия нескольких популяций 23, не позволяют точно контролировать концентрацию анестетика 21 или имеют показания, которые трудно перевести в клинически принятые термины 24.
Текущая версия SAA основана на коммерческом испарителе, и, следовательно, токсикологические исследования ограничены летучими анестетиками. При использовании с другими летучими веществами испаритель можно использовать «не по прямому назначению» после калибровки выхода. В качестве альтернативы может быть применен другой метод испарения летучих веществ, который потребует специальных измерений для титрования концентраций лекарственного средства, как описано ранее25.
Кроме индикаторов расхода, нет никаких аварийных сигналов (т.е. если резервуары опустеют, поток через SAA будет прерван). В зависимости от интенсивности использования SAA может потребоваться очистка, затяжка и, возможно, замена трубки Tygon. За 7 лет использования мы дважды проводили «техническое обслуживание» нашего оригинального SAA.
Этот метод обезболивания плодовых мушек позволяет использовать генетический инструментарий, доступный исследователям дрозофилы , в высокопроизводительной системе. Несколько когорт мух разных популяций (например, генотипа, возраста, пола) могут одновременно подвергаться воздействию одинаковых концентраций анестетика и желаемой комбинации газа-носителя (воздух,O2, N2O, инертные газы), подходящей для рассматриваемого вопроса исследования.
Здесь мы показываем, что SAA был полезен для выявления неожиданных изменений в устойчивости к токсичности изофлурана в линии мух ND2360114 и что стандартные лабораторные линии мух различаются по своей чувствительности к AP. Идентификация этих результатов стала возможной благодаря жесткому контролю экспериментальных условий и высокой пропускной способности SAA.
SAA может быть адаптирован для изучения воздействия других летучих органических соединений (ЛОС) на насекомых (например, медоносных пчел). Для ЛОС с давлением паров, близким к давлению летучих анестетиков (изофлуран: 240 мм рт.ст. при 20 °C), можно использовать обычные испарители, но выход должен быть откалиброван. Коммерческий испаритель для десфлурана нагревается, что потенциально обеспечивает дополнительную гибкость.

Существование побочных анестезирующих эффектов (т.е. эффектов, которые не наблюдаются сразу, но могут иметь отсроченные поведенческие последствия) является общепризнанным, но понимание их механизмов и факторов риска остается рудиментарным 1,2. Их отсроченное проявление и тонкость ограничивают количество потенциально важных переменных, которые могут быть исследованы в моделях млекопитающих в разумные сроки и по приемлемой цене. Плодовая муха (Drosophila melanogaster) обладает уникальными преимуществами в контексте нейродегенеративных заболеваний3 и токсикологического скрининга4, которые до настоящего времени не применялись для изучения побочных эффектов анестезии.
Мы разработали массив серийной анестезии (SAA) для облегчения использования плодовых мушек в изучении фармакодинамики и фармакогенетики анестезии. Ключевым преимуществом SAA является одновременное воздействие идентичных экспериментальных условий нескольких когорт. В сочетании с экспериментальной гибкостью плодовых мушек высокая пропускная способность SAA позволяет исследовать биологические и экологические переменные в масштабах, невозможных в моделях млекопитающих. 
В принципе, SAA представляет собой просто серию соединенных мест анестезии (камер из флаконов по 50 мл), через которые газ-носитель доставляет летучие агенты. Первая камера системы содержит дистиллированную воду, через которую газ-носитель увлажняется (мухи чувствительны к обезвоживанию), и она заканчивается простым индикатором потока, который показывает поток газа через систему. Тонкие сетки, размещенные на отверстиях соединительной трубки, разделяют камеры, чтобы предотвратить миграцию мух между камерами. Количество мест «последовательно» ограничено сопротивлением потоку газа без давления (насосно-компрессорные трубы, сетки). 
Мы охарактеризовали кинетику этого прототипа SAA в предыдущей публикации5. Хотя точные фармакокинетические свойства будут варьироваться между ФАРМ, соответствующие основы, которые были проверены экспериментально, заключаются в следующем: (i) начальный поток 1,5-2 л / мин уравновешивает все камеры (общий объем ±550 мл) с желаемой концентрацией анестетика в течение 2 минут; (ii) концентрация анестетических паров, подаваемых в камеры, не изменяется заметно между первым и последним местом, поскольку количество анестетика, содержащегося в объеме газа в отдельной камере (50 мл), намного превышает количество, поглощаемое любым количеством мух; и (iii) после того, как камеры уравновешены, поток газа-носителя может быть уменьшен (50-100 мл/мин или менее), чтобы избежать отходов и загрязнения окружающей среды (летучие анестетики обладают свойствами парниковых газов). Минимальный расход, необходимый для поддержания стационарной концентрации пара, зависит, прежде всего, от негерметичности SAA, поскольку поглощение пара мухами незначительно. В этих стандартных условиях (2% изофлурана и поток газа-носителя 1,5 л/мин) мухи обезболиваются (т.е. неподвижны) во всех положениях массива в течение 3-4 минут, с незаметными различиями между положениями. VGA можно вводить от нескольких минут до нескольких часов, и наши типичные парадигмы воздействия находятся в диапазоне от 15 минут до 2 часов. Для промывки системы испаритель отключается, и поток поддерживается для обмена примерно 10-кратного объема массива (1,5 л/мин в течение 5 минут). Скорость выведения анестетика будет варьироваться в зависимости от заданной скорости потока.
Летучие анестетики взаимодействуют с многочисленными еще не идентифицированными мишенями, включая иммунно-воспалительную систему6. Вклад отдельных молекулярных мишеней в первичные и побочные исходы («анестезирующее состояние» по сравнению с долгосрочными и краткосрочными «побочными эффектами») плохо изучен. Таким образом, чувствительная, высокопроизводительная система мух ценна для информирования об экспериментах на высших животных, несмотря на очевидные различия между мухами и млекопитающими7. Некоторые различия могут, на самом деле, быть выгодными; Например, иммунная система мухи отличается от иммунной системы высших животных тем, что у нее отсутствует адаптивная рука ответа8. Хотя это может показаться ограничением для понимания болезни у людей, это дает уникальную возможность изучить взаимодействие VGA с врожденным иммунно-воспалительным ответом в отрыве от адаптивного ответа9. Это позволяет изучать фармакологические эффекты VGA на воспаление и их модуляцию различными генетическими фонами, присутствующими в популяции.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Serial Anesthesia Array:&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Serological Pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-676-10C</td>
			<td>Polystyrene, 5mL serological pipette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1495949A</td>
			<td>Polypropylene, 50 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cable Tie Mounting Pad</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>6EEE6</td>
			<td>1.25 inch L x 1 inch W x 0.28 inch H</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispensing Syringe</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>5FVE0</td>
			<td>10 mL with Luer-Lock Connection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fabric Mesh Netting</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1 mm mesh</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow Indicator</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>8RH52</td>
			<td>5/16 to 1/2 inch connection size, paddle wheel style</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Tubing</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>E-3603</td>
			<td>ID: 5/16, OD: 7/16, wall: 1/16</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wood Frame</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>10 feet of 2 inch x 3/4 inch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zip Tie</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>&#62;5inch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaporizer Interface (Budget Alternative to Manifold):</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispensing Syringe</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>5FVE0</td>
			<td>10 mL with Luer-Lock Connection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial Manifold and Vaporizers:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4 inch Equal Barbed Y Connector</td>
			<td>Somni Scientific</td>
			<td>BF-9000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/8 inch NPT to 1/4 inch Barbed Elbow (Plastic)</td>
			<td>Somni Scientific</td>
			<td>BF-9004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AIR 0-4 LPM Flowmeter w/ black knob</td>
			<td>Somni Scientific</td>
			<td>FP-4002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flowmeter auxiliary mounting bracket</td>
			<td>Somni Scientific</td>
			<td>NonInvPart</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Air, 1/8 inch NPT Male x DISS Male</td>
			<td>Somni Scientific</td>
			<td>GF-11012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TT-2 Table Top Anesthesia System, built in dual diverter valve system. Includes 6&#39; color coded tubing X2. (Vaporizer not Included)</td>
			<td>Somni Scientific</td>
			<td>TT-17000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tec 7 Isoflurane Vaporizer</td>
			<td>GE Datex-Ohmeda</td>
			<td>1175-9101-000</td>
			<td>Agent-specific vaporizer (Isoflurane)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tec 7 Sevoflurane Vaporizer</td>
			<td>GE Datex-Ohmeda</td>
			<td>1175-9301-000</td>
			<td>Agent-specific vaporizer (Sevoflurane)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the serial anesthesia array for the high-throughput investigation of volatile agents using drosophila melanogaster

Летучие общие анестетики (VGA) используются во всем мире для миллионов людей всех возрастов и состояний. Высокие концентрации VGA (от сотен микромолей до низких миллимоляров) необходимы для достижения глубокого и нефизиологического подавления функции мозга, представляющего собой «анестезию» для наблюдателя. Полный спектр побочных эффектов, вызванных такими высокими концентрациями липофильных агентов, неизвестен, но были отмечены взаимодействия с иммунно-воспалительной системой, хотя их биологическое значение не изучено.
Чтобы исследовать биологические эффекты VGA у животных, мы разработали систему, называемую серийным анестезиологическим массивом (SAA), чтобы использовать экспериментальные преимущества, предлагаемые плодовой мухой (Drosophila melanogaster). SAA состоит из восьми камер, расположенных последовательно и соединенных с общим притоком. Некоторые детали доступны в лаборатории, а другие могут быть легко изготовлены или приобретены. Испаритель, который необходим для откалиброванного введения VGA, является единственным коммерчески производимым компонентом. VGA составляют лишь небольшой процент атмосферы, протекающей через SAA во время работы, поскольку основную часть (обычно более 95%) составляет газ-носитель; Перевозчиком по умолчанию является AIR. Тем не менее, кислород и любые другие газы могут быть исследованы. 
Основное преимущество SAA по сравнению с предыдущими системами заключается в том, что он позволяет одновременно подвергать несколько когорт мух точно титруемым дозам VGA. Одинаковые концентрации VGA достигаются в течение нескольких минут во всех камерах, что обеспечивает неразличимые условия эксперимента. В каждой камере может содержаться от одной мухи до сотен мух. Например, SAA может одновременно исследовать восемь различных генотипов или четыре генотипа с различными биологическими переменными (например, мужской и женский, старый и молодой). Мы использовали SAA для исследования фармакодинамики VGA и их фармакогенетических взаимодействий в двух экспериментальных моделях мух, связанных с нейровоспалением-митохондриальными мутантами и черепно-мозговой травмой (ЧМТ).

Ссылка на видео SAA предоставлена здесь: Методы исследования Перуанского - Отделение анестезиологии - UW-Madison (wisc.edu) (https://anesthesia.wisc.edu/research/researchers/perouansky-laboratory/perouansky-research-methods/) Наша лаборатория использовала SAA для (i) изучения влияния генотипа на поведенческую чувствительность к анестетикам5; (ii) скрининг митохондриальных мутантов на предмет побочных эффектов анестетиков11; и (iii) исследовать фармакодинамику изофлурана и севофлурана в отношении исходов при черепно-мозговой травме (ЧМТ)12,13,14,15,16,17. Опубликованные результаты наглядно демонстрируют, что генетический фон влияет на фармакодинамику клинически применяемых ВГА как в отношении традиционного фенотипа анестезии, так и в отношении побочных эффектов анестезирующей токсичности, а также защиты тканей 5,11,13,14,15.
Репрезентативный пример 1 (рис. 2): Генетический дрейф в устойчивости к токсичности изофлурана, обнаруженный в надежно воспроизводимых экспериментальных условиях Открытие постепенного количественного изменения смертности, индуцированной VGA, среди отдельно культивируемых мух ND2360114 является примером полезности надежных сравнений фармакодинамики анестетика в экспериментальных группах с использованием SAA. ND23 — ген, кодирующий субъединицу в ядре комплекса I mETC (аналог Ndufs8 у млекопитающих)18. Мутации в этой субъединице являются причиной синдрома Ли, смертельного митохондриального заболевания. Мы наблюдали постепенное ослабление фенотипа смертности, индуцированного изофлураном, с течением времени в различных гомозиготных запасах ND2360114 , культивируемых одновременно в стандартных лабораторных условиях (т.е. без воздействия VGA). Эта эволюционная адаптация к токсичности изофлурана происходила при отсутствии какого-либо воздействия VGA и, вероятно, является побочным эффектом «выживания наиболее приспособленных» в мутантных группах. Это постепенное изменение чувствительности к изофлурану осталось бы незамеченным без нашей уверенности в том, что экспериментальные условия были идентичны во всех анализах и с течением времени. Мы пришли к выводу, что отбор благоприятствует модификаторам эффектов ND2360114 с одновременной повышенной устойчивостью к токсичности изофлурана. Поскольку воспаление в центральной нервной системе играет важную роль в патогенезе синдрома Ли, наблюдаемая эволюция резистентности может быть связана с адаптивными изменениями во врожденном иммунно-воспалительном ответе, при этом резистентность к токсичности изофлурана является случайным побочным продуктом.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65144/65144fig02.jpg"> Рисунок 2: Изменение смертности, вызванной токсичностью изофлурана, в результате эволюционного давления у мух ND2360114. Семь линий (A-G), выделенных из одной популяции путем спаривания одной пары, расширенных и проверенных на 24-часовую смертность (PM24) после 2-часового воздействия 2% изофлурана (в возрасте 10-13 дней), демонстрируют вариабельность фенотипа, возникающего из одной популяции. Данные отображаются в виде прямоугольных и усовых графиков. Прямоугольники представляют собой второй и третий квартили данных, а усы простираются до минимальной и максимальной точек данных. Среднее значение и медиана обозначаются знаком «+» и горизонтальными линиями соответственно. Процент смертности индивидуума (N) показан в виде кругов. N = 3-4 флакона по 20-50 мух/флакон. P-значение для обычной односторонней ANOVA; p = 0,012 указывает на существенную разницу между средними значениями. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65144/65144fig02large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>
Репрезентативный пример 2 (рис. 3): Иллюстрация высокопроизводительного применения SAA для выявления влияния генетического фона на фармакодинамику изофлурана В качестве примера высокой пропускной способности системы на рисунке 3 показаны эффекты идентичного воздействия изофлурана (15 мин 2% изофлурана) до черепно-мозговой травмы (ЧМТ)16, протокол тестирования предварительного кондиционирования анестетика (АП) в этой моделимухи 13,15,19. Показания - смертность через 24 ч после ЧМТ с поправкой на естественное истощение (ИМ24). В этой модели все мухи восстановили подвижность (т.е. были живы) в течение 30 минут после ЧМТ, а смертность, зарегистрированная в MI24, была результатом вторичной черепно-мозговой травмы (sBI). В четырех линиях мух АР с изофлураном снижал ИМ24 в разной степени, что указывает на то, что реакция на АП является количественным признаком. Поскольку воспалительная реакция является важным фактором заболеваемости от sBI, AP может включать модуляцию иммунной системы20.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65144/65144fig03.jpg"> Рисунок 3: Влияние генетического фона на подавление смертности (ИМ24) путем прекондиционирования изофлураном. Предварительное кондиционирование мух с 15 мин 2% изофлурана (фиолетового) снижало индекс смертности через 24 ч (MI24) у штаммов w 1118 и y1w1118 (p < 0,0001 и p = 0,036 соответственно ). MI24 не был значительно ниже в предварительно подготовленных линиях Oregon R (OR) и Canton S (CS) (p = 0,16 и p = 0,27 соответственно ). Данные отображаются в виде прямоугольных и усовых графиков. Прямоугольники представляют собой второй и третий квартили данных, а усы простираются до минимальной и максимальной точек данных. Среднее значение и медиана обозначаются знаком «+» и горизонтальными линиями соответственно. Значения MI24 отдельных реплик (N) показаны в виде кругов. N = 15-33 флакона по 30-40 мух/флакон для мух, обработанных ЧМТ. N = 2-15 флаконов по 30-40 мух/флакон для необработанного контроля. P-значения из непарного двустороннего t-критерия Стьюдента. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65144/65144fig03large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>

Watch this Scientific Journal Video about The Serial Anesthesia Array for the High-Throughput Investigation of Volatile Agents Using Drosophila melanogaster at JoVE.com

The Serial Anesthesia Array for the High-Throughput Investigation of Volatile Agents Using Drosophila melanogaster

Плодовая муха (Drosophila melanogaster) широко используется для биологических и токсикологических исследований. Чтобы расширить полезность мух, мы разработали инструмент, массив последовательной анестезии, который одновременно подвергает несколько образцов мух воздействию летучих общих анестетиков (VGA), что позволяет исследовать побочные эффекты (токсические и защитные) VGA.

Массив серийной анестезии для высокопроизводительного исследования летучих агентов с использованием Drosophila melanogaster

Volatile general anesthetics (VGAs) are used worldwide on millions of people of all ages and medical conditions. High concentrations of VGAs (hundreds of ...

SAA обеспечивает высокую пропускную обработку для исследования фармакологии летучих агентов в модельных организмах беспозвоночных, которые наделены сложным мозгом и обширным репертуаром поведения. В сочетании с генетическим инструментарием, доступным в Drosophila melanogaster, этот метод позволяет быстро и недорого изучать фармакогенетику летучих агентов. Многие люди подвергаются воздействию летучих агентов в качестве загрязнителей или терапевтических агентов.Помимо анестезии, летучие анестетики обладают многочисленными токсическими и полезными побочными эффектами. Степень эффекта отчасти определяется генетикой, которая осталась в значительной степени неизученной. После изготовления деревянной рамы измените крышки 50-миллилитровых хронических трубок, просверлив по два отверстия в каждой крышке сверлом 9/32 дюйма.Отшлифуйте отверстия, чтобы очистить рваный пластик. Также отшлифуйте верхнюю часть шляпки, чтобы придать поверхности шероховатость. Затем нарежьте пять миллилитровых серологических пипеток по размеру, надрезав пластик и разбив его на линии надрезов.Отшлифуйте концы срезанных или сломанных пипеток. После этого приклейте сетку к трубкам и обрежьте сетку по размеру трубки, как только клей высохнет. Вставьте трубки в отверстия конических колпачков так, чтобы обе трубки выступали над колпачком.Убедитесь, что впускная трубка проходит в трубку дольше, чем выпускная. Нанесите клей на верхнюю часть колпачков вокруг тюбиков, чтобы скрепить детали вместе и дать им высохнуть. Прикрепите клейкие кабельные стяжки к раме.Прикрепите колпачки к раме с помощью стяжек и коротко обрежьте концы бирок для застежек-молний. Отрежьте и подсоедините длину трубки tygon к входным и выпускным трубкам на каждой модифицированной крышке. Начиная с верхнего конца, присоедините трубку сначала к притоку, затем от оттока к притоку последующего положения.Затем добавьте индикатор расхода к самому последующему притоку. Поместите коническую трубку объемом 50 миллилитров в первое положение и отметьте отметку наполнения водой. Извлеките трубку.Наполните его водой ниже приточной трубки и верните на место. Подготовьте сопряжение для испарителя. Снимите поршни, вырежьте насечки из двух 10-миллилитровых дозирующих шприцев и вставьте их во впуск и отток испарителя так, чтобы насечки были направлены прямо к передней части испарителя, чтобы выровнять отверстия.Подключите всю систему. Используйте трубку tygon, чтобы прикрепить газгольдер-носитель к регулятору, расходомеру газа, испарителю и SAA. Заполните пустые позиции на массиве пустыми 50-миллилитровыми хроническими трубками.Теперь включите бензобак. Откройте расходомер до двух литров в минуту и включите испаритель на 0%Проверьте расходомер через систему, проверив расходомер перед испарителем и индикатор расхода после последней камеры SAA на предмет расхода. В качестве альтернативы вставьте конец трубки, расположенной ниже по течению, в воду и ищите пузырьки.За 24 часа или более до воздействия анестетика отсортируйте когорты мух по мере необходимости для эксперимента, используя предпочтительный метод. Переложите мух из пищевых флаконов в пустые конические трубки объемом 50 миллилитров. Подсчитайте и запишите всех мертвых мух до воздействия.Снимите крышку и прикрутите 50-миллилитровые конические трубки с мухами к SAA. Включите газ-носитель и установите в нем желаемый расход. Установите испаритель анестетика на желаемую концентрацию и подвергайте мух воздействию в течение желаемого времени.По окончании экспозиции промывайте систему потоком свежего газа со скоростью 1,5 литра в минуту в течение пяти минут, что соответствует примерно 10-кратному объему от общего объема SAA. Полностью откройте регулятор высокого давления, затем закройте его на пол-оборота, чтобы обеспечить поток газа-носителя. Проследите трубки для каждой линии к расходомерам и испарителю и проверьте уровень анестетика в испарителях.Убедитесь, что при потоке газа он показывает расход на расходомере и на индикаторе расхода ниже по потоку. В конце эксперимента дайте четыре-пять минут воздушному потоку, чтобы вымыть анестетик. Семь линий, выделенных из одной популяции через встречи одной пары, показали различия в смертности, вызванной токсичностью изофтора, из-за эволюционного давления у мух ND23 60114.Предварительное кондиционирование мух с 15 минутами 2%-ного изофтора до черепно-мозговой травмы снижало индекс смертности через 24 часа у белых 1118 и желто-белых штаммов. Индекс смертности через 24 часа не был значительно ниже в предварительно подготовленных линиях Oregon R и Canton S. Во время сборки насечки в модифицированных шприцах должны совпадать с отверстиями отверстий портов испарителя.Во время воздействия периодически проверяйте, есть ли поток через систему. Эта процедура может быть использована для широкого спектра поведенческих исследований, исследований выживания и молекулярных исследований, которые могут привести к пониманию фармакологии летучих агентов.

Research

JoVE Journal

Genetics

The Serial Anesthesia Array for the High-Throughput Investigation of Volatile Agents Using Drosophila melanogaster

High-Throughput Robotically Assisted Isolation of Temperature-sensitive Lethal Mutants in Chlamydomonas reinhardtii

High-Throughput Robotically Assisted Isolation of Temperature-sensitive Lethal Mutants in Chlamydomonas reinhardtii

Высокопроизводительный роботизированная Изоляция термочувствительных Смертельное Мутанты в<em&gt; Chlamydomonas reinhardtii</em

Systematic identification and characterization of genetic perturbations have proven useful to decipher gene function and cellular pathways. However, the ...

Quantifying Abdominal Pigmentation in Drosophila melanogaster

Quantifying Abdominal Pigmentation in Drosophila melanogaster

Количественное определение пигментации брюшной полости в<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Pigmentation is a morphologically simple but highly variable trait that often has adaptive significance. It has served extensively as a model for ...

High Fat Diet Feeding and High Throughput Triacylglyceride Assay in Drosophila Melanogaster

High Fat Diet Feeding and High Throughput Triacylglyceride Assay in Drosophila Melanogaster

Высоким содержанием жиров питание и высокая пропускная способность Triacylglyceride Assay в Drosophila Melanogaster

Heart disease is the number one cause of human death worldwide. Numerous studies have shown strong connections between obesity and cardiac malfunction in ...

Generation of Native Chromatin Immunoprecipitation Sequencing Libraries for Nucleosome Density Analysis

Поколения родной Chromatin иммунопреципитации секвенирования библиотек для анализа плотности нуклеосома

We present a modified native chromatin immunoprecipitation sequencing (ChIP-seq) experimental protocol compatible with a Gaussian mixture distribution ...

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

Высокое разрешение флуоресцентные в Situ гибридизация дрозофилы эмбрионов и тканей с помощью усиления сигнала Tyramide

In our efforts to determine the patterns of expression and subcellular localization of Drosophila RNAs on a genome-wide basis, and in a variety of ...

G2-seq: A High Throughput Sequencing-based Technique for Identifying Late Replicating Regions of the Genome

G2-seq: Высокая пропускная способность на основе последовательности техника для выявления поздно репликации областей генома

Numerous techniques have been developed to follow the progress of DNA replication through the S phase of the cell cycle. Most of these techniques have ...

Robust DNA Isolation and High-throughput Sequencing Library Construction for Herbarium Specimens

Надежные ДНК изоляции и высокопроизводительного секвенирования строительство библиотеки для образцов гербария

Herbaria are an invaluable source of plant material that can be used in a variety of biological studies. The use of herbarium specimens is associated with ...

High-throughput Identification of Synergistic Drug Combinations by the Overlap2 Method

High-throughput Identification of Synergistic Drug Combinations by the Overlap2 Method

Высок объём идентификации наркотиков синергических сочетаний методом дублирования2

Although antimicrobial drugs have dramatically increased the lifespan and quality of life in the 20th century, antimicrobial resistance threatens our ...

Measuring Exercise Levels in Drosophila melanogaster Using the Rotating Exercise Quantification System (REQS)

Measuring Exercise Levels in Drosophila melanogaster Using the Rotating Exercise Quantification System REQS

Измерение уровня осуществления в Drosophila melanogaster , с использованием системы количественной оценки вращающихся упражнения (REQS)

Drosophila melanogaster is a new model organism for studies in exercise biology. To date, two main exercise systems, the Power Tower and the Treadwheel ...

The TreadWheel: Interval Training Protocol for Gently Induced Exercise in Drosophila melanogaster

The TreadWheel: Interval Training Protocol for Gently Induced Exercise in Drosophila melanogaster

TreadWheel: Интервал подготовки протокола для нежно индуцированной упражнения в Drosophila melanogaster

The incidence of complex metabolic diseases has increased as a result of a widespread transition towards lifestyles of increased caloric intake and ...