वायरल संक्रमण अत्यधिक गतिशील होते हैं, और वायरोलॉजी में पारंपरिक समापन बिंदु परख ों में एक सीमा होती है कि एक चुने हुए समापन बिंदु से छूट गई जानकारी हो सकती है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि सेल-आधारित विद्युत प्रतिबाधा के साथ, वास्तविक समय में वायरल संक्रमण और एंटीवायरल यौगिकों की गतिविधि का पालन करना संभव है। इस प्रक्रिया का प्रदर्शन हमारी प्रयोगशाला के एक प्रयोगशाला तकनीशियन ईफ मेयेन करेंगे।
शुरू करने के लिए, एक इंटरडिजिटेटेड इलेक्ट्रोड-आधारित 96 वेल प्लेट लेकर सीईआई प्लेट तैयार करें। प्रत्येक कुएं में 100 माइक्रोलीटर विकास संस्कृति माध्यम जोड़ें और डीपीबीएस के साथ कुओं के बीच रिक्त स्थान भरें। फिर, प्लेट को 37 डिग्री सेल्सियस और 5% कार्बन डाइऑक्साइड पर चार घंटे के लिए इनक्यूबेट करें।
ए 549 कोशिकाओं को बीज देने के लिए, उन्हें पांडुलिपि में वर्णित कल्चर फ्लास्क से अलग करें और उन्हें ताजा विकास माध्यम में फिर से निलंबित करें। सेल सस्पेंशन को 50-मिलीलीटर ट्यूब में स्थानांतरित करें। व्यवहार्य कोशिकाओं की गणना करें और वांछित सेल घनत्व प्राप्त करने के लिए उन्हें ताजा विकास माध्यम में पतला करें।
इनक्यूबेशन बाद, 96 वेल प्लेट से मल्टी-चैनल पिपेट के साथ विकास संस्कृति माध्यम को हटा दें। प्रति कुएं 100 माइक्रोलीटर सेल सस्पेंशन वितरित करें। एक बार जब कोशिकाओं को बराबर कर दिया जाता है, तो सीईआई परख को स्थापित करने और संचालित करने के लिए प्लेट को सीईआई डिवाइस में रखें।
डिवाइस का सॉफ़्टवेयर खोलें, और डेटा एकत्रित करें फलक में, नया प्रयोग सेट करने के लिए सेटअप क्लिक करें. लैपटॉप को ECIS डिवाइस से कनेक्ट करें। हरे रंग द्वारा इंगित कुओं के प्रतिबाधा की जांच करके प्लेट को कॉन्फ़िगर करें।
वेल कॉन्फ़िगरेशन फलक में, उपयोग किए गए कल्चरवेयर के अनुसार सरणी प्रकार का चयन करें और एकाधिक आवृत्ति समय मोड पर क्लिक करें। उसके बाद, प्रारंभ दबाकर माप प्रारंभ करें। यौगिक को बर्फ पर रखें।
पांच-मिलीलीटर पॉलीप्रोपाइलीन ट्यूब में एक समतुल्य परख माध्यम के साथ 10-गुना-केंद्रित कमजोर पड़ने का प्रयास करें और फिर यौगिक जोड़ें। डेटा संग्रह सेटअप फलक में, रोकें क्लिक करें, और वर्तमान समय बिंदु पूरा करने के बाद, 96 वेल प्लेट निकाल लें. प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत कोशिकाओं के पालन और मोनोलेयर गठन का निरीक्षण करें।
इसके बाद, मल्टीचैनल पिपेट का उपयोग करके प्रत्येक कुएं से 20 माइक्रोलीटर मध्यम को एस्पिरेट करें, और वांछित कुओं में 20 माइक्रोलीटर यौगिक समाधान या वाहन जोड़ें। प्लेट को 37 डिग्री सेल्सियस और 5% कार्बन डाइऑक्साइड पर 15 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें। वायरस समाधान तैयार करने के लिए, वायरस स्टॉक की एक शीशी को पिघलाएं।
15-मिलीलीटर पॉलीप्रोपाइलीन ट्यूब में परख माध्यम के साथ वांछित एमओआई पर कमजोर पड़ने के बाद, वायरस स्टॉक जोड़ें। एक बार असाइन किए गए कुओं में वायरस कमजोर पड़ने के बाद, सेल नियंत्रण कुओं में 100 माइक्रोलीटर परख माध्यम जोड़ें। फिर, नियोजित वायरस कंटेनरों को नष्ट करें।
प्लेट को सीईआई डिवाइस में वापस रखें और लगातार छह दिनों तक माप जारी रखने के लिए रिज्यूमे पर क्लिक करें। डेटा का विश्लेषण करने के लिए, प्रयोग समाप्त करने के लिए समाप्त करें क्लिक करें और प्रयोग सारांश दर्ज करें जोड़ें. एक बार डेटा संग्रह पूरा हो जाने के बाद, ठीक का चयन करें। ग्राफ़ फलक में इच्छित आवृत्ति का चयन करें।
सुनिश्चित करें कि सभी कुओं को वेल कॉन्फ़िगरेशन फलक में चुना गया है और फ़ाइल पर क्लिक करें, फिर डेटा निर्यात करें, इसके बाद स्प्रेडशीट प्रारूप में डेटा निर्यात करने के लिए ग्राफ़ डेटा। सीईआई परख से पता चला कि संक्रमण कैनेटीक्स सेल प्रकार पर अत्यधिक निर्भर थे, और यू 87 कोशिकाएं केवल उच्च एमओआई पर जीका वायरस संक्रमण के लिए अतिसंवेदनशील थीं। सीईआई ने उच्च सेल सीडिंग पर एक पूरी तरह से विकसित सेल मोनोलेयर का भी प्रदर्शन किया और सीईआई इलेक्ट्रोड में आगे नहीं फैल सकता है, जिससे सेल नियंत्रण और वायरस नियंत्रण के बीच थोड़ा अंतर होता है।
यू 87 के लिए, एक बड़ा सेल प्रकार, सीडिंग कोशिकाएं बहुत घनी हो सकती हैं जिससे सेल मोनोलेयर की पूरी टुकड़ी हो सकती है। एशियाई वंश PRVABC59 में अफ्रीकी MR766 के एक प्रतिनिधि जीका वायरस स्ट्रेन ने समान CEI पैटर्न प्रदर्शित किए। हालांकि, PRVABC59 में थोड़ा धीमा साइटोपैथिक-प्रभाव-उत्प्रेरण गुण हैं, जो CIT50 मानों द्वारा भी परिलक्षित होता है।
दोनों जीका वायरस उपभेदों के तीन अलग-अलग एमओआई के प्रतिबाधा प्रोफाइल से पता चला है कि विशेष यौगिक एकाग्रता ने जीका वायरस संक्रमण के कारण प्रतिबाधा गिरावट में देरी की। सीईआई परख से पता चला कि एंटीवायरल गतिविधि एमओआई और एयूसीएन गणना निर्धारित आईसी 50 मूल्यों पर निर्भर थी। मूल्यांकन किए गए सीआईटी 50 मूल्यों ने कोशिका वृद्धि और संक्रमण के कैनेटीक्स में यौगिक शक्ति का प्रदर्शन किया।
सीईआई वास्तविक समय, लेबल-मुक्त और गैर-आक्रामक तरीके से जीका वायरस प्रतिकृति के खिलाफ यौगिकों का मूल्यांकन और विशेषता करने के लिए एक शक्तिशाली तकनीक है।
