Name: whole neonatal cochlear explants as an in vitro model
Uploaded: 2023-07-28T12:00:00
Duration: 7 min 12 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole Neonatal Cochlear Explants as an In vitro Model at JoVE.com

نود أن نعرب عن تقديرنا لمرفق الحيوانات التابع لقسم الطب الحيوي بجامعة بازل لدعمهم في رعاية الحيوان ، والمرافق الأساسية للفحص المجهري وكذلك خدمة تكنولوجيا المعلومات التابعة لقسم الطب الحيوي لمساعدتهم الفنية ، والمؤسسة الوطنية السويسرية للعلوم (SNSF) للدعم المالي (منحة MD-PhD إلى MC ، رقم المنحة 323530_191222).

<ol>
	<li>Mukherjea, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+design+and+screening+of+drugs+to+prevent+acquired+sensorineural+hearing+loss.">The design and screening of drugs to prevent acquired sensorineural hearing loss.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. 6 (5), 491-505 (2011).</li><li>Takeda, H., Dondzillo, A., Randall, J. A., Gubbels, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+in+cell-based+therapies+for+the+treatment+of+hearing+loss.">Challenges in cell-based therapies for the treatment of hearing loss.</a> Trends in Neurosciences. 41 (11), 823-837 (2018).</li><li>Schacht, J., Talaska, A. E., Rybak, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cisplatin+and+aminoglycoside+antibiotics:+Hearing+loss+and+its+prevention.">Cisplatin and aminoglycoside antibiotics: Hearing loss and its prevention.</a> The Anatomical Record. 295 (11), 1837-1850 (2012).</li><li>Parker, M., Brugeaud, A., Edge, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+culture+and+plasmid+electroporation+of+the+murine+organ+of+Corti.">Primary culture and plasmid electroporation of the murine organ of Corti.</a> Journal of Visualized Experiments. (36), e1685 (2010).</li><li>Landegger, L. D., Dilwali, S., Stankovic, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+murine+cochlear+explant+technique+as+an+in+vitro+screening+tool+in+hearing+research.">Neonatal murine cochlear explant technique as an in vitro screening tool in hearing research.</a> Journal of Visualized Experiments. (124), e55704 (2017).</li><li>Ogier, J. M., Burt, R. A., Drury, H. R., Lim, R., Nayagam, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypic+culture+of+neonatal+murine+inner+ear+explants.">Organotypic culture of neonatal murine inner ear explants.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 13, 170 (2019).</li><li>Durbin, J. E., Hackenmiller, R., Simon, M. C., Levy, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+disruption+of+the+mouse+Stat1+gene+results+in+compromised+innate+immunity+to+viral+disease.">Targeted disruption of the mouse Stat1 gene results in compromised innate immunity to viral disease.</a> Cell. 84 (3), 443-450 (1996).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+An+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: An open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Etournay, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cochlear+outer+hair+cells+undergo+an+apical+circumference+remodeling+constrained+by+the+hair+bundle+shape.">Cochlear outer hair cells undergo an apical circumference remodeling constrained by the hair bundle shape.</a> Development. 137 (8), 1373-1383 (2010).</li><li>MacDonald, G. H., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+of+the+intact+mouse+cochlea+by+fluorescent+laser+scanning+confocal+microscopy.">Three-dimensional imaging of the intact mouse cochlea by fluorescent laser scanning confocal microscopy.</a> Hearing Research. 243 (1-2), 1-10 (2008).</li><li>Sibarita, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deconvolution+microscopy.">Deconvolution microscopy.</a> Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology. 95, 201-243 (2005).</li><li>Cortada, M., Sauteur, L., Lanz, M., Levano, S., Bodmer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+deep+learning+approach+to+quantify+auditory+hair+cells.">A deep learning approach to quantify auditory hair cells.</a> Hearing Research. 409, 108317 (2021).</li><li>Meijering, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+validation+of+a+tool+for+neurite+tracing+and+analysis+in+fluorescence+microscopy+images.">Design and validation of a tool for neurite tracing and analysis in fluorescence microscopy images.</a> Cytometry A. 58 (2), 167-176 (2004).</li><li>Ershov, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TrackMate+7:+Integrating+state-of-the-art+segmentation+algorithms+into+tracking+pipelines.">TrackMate 7: Integrating state-of-the-art segmentation algorithms into tracking pipelines.</a> Nature Methods. 19 (7), 829-832 (2022).</li><li>Stringer, C., Wang, T., Michaelos, M., Pachitariu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellpose:+A+generalist+algorithm+for+cellular+segmentation.">Cellpose: A generalist algorithm for cellular segmentation.</a> Nature Methods. 18 (1), 100-106 (2021).</li><li>Zhang, L. W., Cang, X. H., Chen, Y., Guan, M. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+culture+of+mammalian+inner+ear+hair+cells.">In vitro culture of mammalian inner ear hair cells.</a> Journal of Zhejiang University of Science B. 20 (2), 170-179 (2019).</li></ol>

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه.

كان الغرض من تحديث هذا البروتوكول هو تبسيط الخطوات من عزل النباتات إلى تصوير خلايا القوقعة الحية والثابتة. قمنا بتحسين بعض الخطوات أثناء العزل وقدمنا بعض الأدوات المبتكرة بهدف إنشاء بروتوكول فعال وسلس التشغيل للحصول على نباتات عالية الجودة. الطريقة الموصوفة هي بروتوكول محسن من التقارير السابقة 4,5. بالإضافة إلى ذلك ، تفتقر بعض الدراسات الحالية إلى بروتوكول محدث تدريجيا. من خلال خطوات زراعة الزرع المبسطة ، يوفر هذا البروتوكول سهولة التعامل مع النباتات المحفوظة جيدا ، وهو أمر ضروري للبيانات القابلة للتكرار. إن إدخال غرف متعددة الآبار مع غطاء بوليمر لنباتات الأذن الداخلية يحسن ارتباط العضو والحفاظ على النباتات السليمة. هنا ، نقدم العديد من الأمثلة على التجارب في ظل ظروف الإجهاد لإثبات أن الأعضاء في الثقافة تحافظ على تنظيمها الخلوي على الرغم من فقدان خلايا الشعر وتلف الخلايا العصبية.
أحد التحديات في زراعة أعضاء الأذن الداخلية هو تجنب انفصال الأعضاء وتعويمها ، لأن هذا يؤثر على سلامة النباتات الخارجية ، والاستجابة للعلاج ، والفحوصات اللاحقة. في السابق ، كانت النباتات المزروعة على أغطية زجاجية 4,5. على الرغم من أن الثقافة على الأسطح الزجاجية تبدو بديلا جيدا ، إلا أن طلاء الزجاج يستغرق وقتا طويلا ، كما أن أغطية الغطاء نفسها هشة وحساسة. بروتوكول بديل باستخدام ثقافة خلية ميليسيل يدرج محاولات لحل هذه المشكلة6. ومع ذلك ، يبدو أن قطع الغشاء ونقله مع النباتات الخارجية خطوة حساسة في هذا البروتوكول. بالإضافة إلى ذلك ، قد تتلف النباتات الخارجية أثناء تركيب وختم غطاء الغطاء. في نهجنا المقترح ، بمجرد نقل النباتات إلى الغرف المطلية ب poly-D-lysine ووضعها في الموضع الصحيح ، لا يلزم إجراء مزيد من النقل أو التغطية بأغطية الغطاء. ميزة أخرى لهذا البروتوكول هي استخدام الغرف ذات غطاء بوليمر رقيق منفذ للغاز يوفر ظروف استزراع مثالية لنباتات الأعضاء. يتميز هذا البوليمر بجودة بصرية مماثلة للزجاج ، مما يجعله مناسبا للتصوير الخلوي في الفحص المجهري عالي الدقة.
تستخدم إضافة المصل إلى الوسط في معظم بروتوكولات زراعة الخلايا والأنسجة ، بما في ذلك زراعة نباتات الأذن الداخلية بنسبة 1٪ -10٪ FBS4،5،6،16. يؤثر وجود المصل على ظروف ثقافة التجارب ؛ وبالتالي ، في حالات معينة ، يفضل الثقافة بدون مصل. تم استبدال غياب المصل في مزرعة نباتات القوقعة إما بإضافة N2 إلى DMEM أو بإضافة N2 إلى الوسط العصبي القاعديA 5,6. في هذا الصدد ، اختبرنا ظروف زراعة النباتات مع وبدون مصل. في كلتا الحالتين ، كانت خلايا الأذن الداخلية حيوية واستجابت للظروف السامة للأذن. اختبرنا هذه الظروف لمدة 72 ساعة ، ولكن يمكن الحفاظ على النباتات في الثقافة لفترة أطول ، خاصة عند حضنها بوسط خال من المصل مع N2 و B27 وعوامل النمو ، كما هو مقترح في دراسات أخرى 5,16.
بالإضافة إلى الخطوات الحرجة العامة في عزل نباتات الأذن الداخلية ، مثل مدة عزل الأعضاء والمضاد الحيوي المستخدم ، هناك أيضا بعض الخطوات الحاسمة في هذا البروتوكول ، والتي يمكن التحكم فيها. ترتبط إحدى الخطوات الحاسمة في هذه الطريقة بحجم الوسط الذي يبقى في الغرفة بعد إدخال العضو. تم تحسين هذا للحفاظ على النباتات على قيد الحياة وتعلق على السطح السفلي. هناك خطوة مهمة أخرى تتعلق بوقت الحضانة اللازم للسماح للنباتات بالالتصاق بقاع الغرفة. أوقات الحضانة أطول من 2 ساعة مع بضعة ميكرولتر من الوسط يمكن أن تؤثر على صحة النباتات. يمكن أيضا استخدام أوقات حضانة أقصر ، مثل 1 ساعة ، طالما تم الحرص على عدم فصل النباتات. جانب آخر مهم هو بقايا بولي دي ليسين. يجب اتباع خطوات الغسيل من poly-D-lysine بدقة ، لأن بقايا ملح البروميد من poly-D-lysine يمكن أن تكون سامة للخلايا. بعد اتباع خطوات الغسيل بدقة ، يسهل الطلاء باستخدام poly-D-lysine الالتصاق السلس للنباتات الخارجية بالغرف بحيث يمكن تصحيح الموضع قبل أن تصبح متصلة بقوة بقاع الغرفة.
أحد قيود هذه الطريقة هو تصوير الخلايا باستخدام الفحص المجهري المستقيم. قد تكون هذه مشكلة مهمة لتلك المختبرات ذات المجاهر المقلوبة. يمكن استخدام الشرائح الزجاجية مع غرف السيليكون القابلة للإزالة للفحص المجهري المستقيم والمقلوب ؛ ومع ذلك ، يجب اختبار ظروف الطلاء الخاصة بنا مع poly-D-lysine أولا. هناك قيد آخر يتمثل في تخزين الغرف ، لأن الإدخالات غير قابلة للإزالة ، ويبلغ الارتفاع الإجمالي لغرفة واحدة مع الغطاء حوالي 11 مم مقارنة بارتفاع 1 مم لشريحة المجهر القياسية. ومع ذلك ، فإن الغرفة المكونة من 8 آبار تستخدم مساحة أقل من الألواح المكونة من 4 آبار المقترحة قبل16.
نقدم هنا الصور التي تم الحصول عليها باستخدام اثنين من المجاهر. بينما يوفر المجهر متحد البؤر لمسح النقاط صورا عالية الدقة للأنسجة بسبب قسمه البصري الرقيق ، يوفر المجهر البؤري للقرص الدوار وقت تصوير أسرع بدقة جيدة. يتم تصور الأهداب المجسمة لخلايا الشعر الداخلية (IHCs) وخلايا الشعر الخارجية (OHCs) باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر. نظرا لأن الأهداب المجسمة للمدن الإنسانية العالمية أكبر من تلك الموجودة في OHCs ، فقد تم تصورها بشكل متكرر وجيد في هذا العمل. بالنسبة للأهداب المجسمة OHC ، يمكن للمجاهر البديلة الأخرى تحسين التصور ، مثل الفحص المجهري فائق الدقة (SRM). الصور الزرعية التي تم الحصول عليها باستخدام مجهر القرص الدوار كافية لسهولة دمج عد خلايا الشعر الآلي باستخدام نهج التعلم العميق12. علاوة على ذلك ، فإن وقت الاستحواذ القصير مهم للتجارب على الخلايا والأنسجة الحية. بالإضافة إلى ذلك، لا يقتصر هذا البروتوكول على نباتات القوقعة الصناعية لحديثي الولادة. مع بعض التحسينات ، يمكن أيضا زراعة النباتات الأخرى مثل الأعضاء الدهليزية أو الأنسجة الجنينية.
يعد القياس الكمي لخلايا القوقعة ، مثل خلايا الشعر والخلايا العصبية ، في المختبر مهما لتقييم صلاحية الخلية ، وبالتالي النسبة المئوية للخلايا التالفة أو المفقودة. تساعد التحقيقات في مسارات الإشارات ووظائف الخلية على الكشف عن آليات الموت والبقاء على قيد الحياة. تعد فحوصات أنسجة القوقعة الجنينية وحديثي الولادة مفيدة للتحقيق في مراحل نمو قوقعة الأذن. لذلك ، سيساعد هذا البروتوكول على تحسين الدراسات في المختبر لنباتات الأذن الداخلية ، على سبيل المثال ، لإنشاء نماذج سامة للأذن ، والتحقيق في مراحل النمو ، وتقييم مسارات الإشارات ، وإجراء دراسات فحص الأدوية.

ترجع معظم حالات فقدان السمع الحسي العصبي إلى تنكس خلايا الشعر الحسية والخلايا العصبية السمعية و / أو نقاط الاشتباك العصبي السمعي1. هذه العملية التنكسية في الخلايا الحسية تقدمية وعادة لا رجعة فيها ، مما يؤدي إلى فقدان السمع2. لذلك ، فإن المعلومات حول صلاحية الخلايا الحسية والتغيرات في مسارات الإشارات في ظل ظروف الإجهاد أمر محوري لحماية الخلايا من التلف ، وبالتالي الخسارة. يسمح التحقيق في زراعة قوقعة الأذن في المستنبتة بإعادة تلخيص مجمع الأنسجة والحفاظ على شبكة خلايا خلوية طبيعية ، مما يتيح وصفا أفضل لعمليات الإشارة. لإنشاء نماذج تجريبية للسمية الأذنية ، غالبا ما يتم استخدام الجنتاميسين المضاد الحيوي وعامل العلاج الكيميائي سيسبلاتين ، لأنه من المعروف أن لهما آثارا جانبية سامة للأذن3.
تم تطوير وتعديل أنظمة الاستزراع في المختبر لنباتات القوقعة بمرور الوقت. ومع ذلك، غالبا ما يكون وصف البروتوكول التدريجي لاستزراع نباتات القوقعة بأكملها مفقودا في العديد من المنشورات. تم نشر أحد بروتوكولات الفيديو الأولى للثقافة الأولية لعضو الفئران في كورتي بواسطة Parker et al. ، حيث وصف المؤلفون خطوات عزل الظهارة الحسية ، والزراعة على أغطية زجاجية ، والتثقيب الكهربائي للنباتات لتجارب النقل4. كما تم نشر بروتوكول آخر باستخدام قسائم الغطاء الزجاجي سابقا ، حيث تم اعتبار تنظيم البنية الخلوية في الأذن الداخلية5. تم الإبلاغ عن بروتوكول بديل باستخدام غشاء Millicell لثقافة نباتات الفئران في عضو Corti والعضو الدهليزي6. ساهمت تقارير الفيديو هذه في تحسين الطريقة ، ولكن لا تزال هناك تحديات تحتاج إلى حل. لمعالجة عدد من القضايا الناشئة عن استخدام أغطية زجاجية وإدخالات ، يهدف هذا البروتوكول إلى تبسيط خطوات زراعة الأعضاء وزراعة الأعضاء عالية الجودة للحصول على بيانات موثوقة. يتم تحقيق ذلك عن طريق تقليل التعامل المباشر مع العضو أثناء الإجراءات التجريبية وتجنب نقل الأعضاء قبل الحصول على صور عالية الدقة للخلايا الحية والثابتة.
يقوم البروتوكول الحالي بتحديث أنظمة الاستزراع المختبري المنشورة سابقا ويقدم العديد من التحسينات في عزل جهاز Corti ونقله إلى غرف الثقافة ، بالإضافة إلى دمج غرفة منزلقة جديدة لتحسين ظروف الثقافة والمزيد من التحليل. يقلل هذا البروتوكول الأمثل من خطر إتلاف العضو ، والذي يمكن أن يحدث عند استخدام أغطية زجاجية أثناء التغيير المتوسط أو أثناء نقل العضو من أغطية أو أغشية لمزيد من التحليل4،5،6. تحتوي أغطية الغطاء الزجاجي على مؤشر عاكس أفضل من تلك البلاستيكية ؛ ومع ذلك ، فهي هشة ويمكن أن تنكسر بسهولة أكبر. الغرف متعددة الآبار المستخدمة هنا متصلة بشريحة مجهرية ، وهي مناسبة تماما لزراعة الأعضاء والتصوير عالي الدقة. يتم نقل الأعضاء المعزولة باستخدام ملعقة ، مما يسمح بإحضار العضو في الاتجاه الصحيح والانزلاق إلى الغرفة ، بدلا من استخدام القوة باستخدام ماصة كما هو موصى به سابقا4،5،6.
تسهل الغرف متعددة الآبار المطلية ب poly-D-lysine ، والتي يجب أن تحتوي على وسيط كاف ، نقل الأعضاء وتحديد المواقع المناسبة للنباتات الخارجية دون ممارسة ضغط لاصق مع تجنب تداخل الأعضاء ، كما ذكرنا سابقا6. بالإضافة إلى ذلك ، يتم حل الهياكل المتداخلة وغير المستوية للأعضاء العرضية باستخدام مكدس Z متحد البؤر. تم تحسين هذا البروتوكول لتطبيقات مختلفة ، مثل نباتات الفئران والفئران ، وزراعة أعضاء كورتي والقوقعة ، والزراعة في وسط يحتوي على المصل وخالي من المصل ، والتقييمات السامة للأذن ، وتجارب الاستجابة العامة للأدوية. يتم تركيب نباتات القوقعة الصناعية وحضنها في غرف ذات قاع غطاء، مما يسهل التصاق نباتات القوقعة بالغرف من أجل المعالجة المثلى أثناء التجارب في المختبر ، والمعالجة اللاحقة للنباتات، وتصوير نباتات القوقعة الحية والثابتة. يتم تبسيط تصور كامل طول عضو كورتي وقياس خلايا الشعر. بالإضافة إلى ذلك ، فإن تقييمات الخلايا الداعمة والخلايا العصبية العقدية الحلزونية والخلايا العصبية دقيقة. لذلك ، يمكن استخدام هذا البروتوكول لإجراء تحليل شامل لخلايا قوقعة الثدييات.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL High-Clarity Polypropylene Conical Tube 17 x 120 mm style</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>352096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>45&#176; Angled Forceps&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Polypropylene Conical Tube 30 x 115 mm style</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifade Mounting Medium</td>
			<td>VECTASHIELD</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 phalloidin</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>2151755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-beta III Tubulin antibody [TUJ-1]</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab14545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifade Mounting Medium With DAPI</td>
			<td>VECTASHIELD</td>
			<td>H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-myosin VII rabbit polyclonal</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab3481</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 Supplement (50x), minus antioxidants</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>10889038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CARBON STEEL surgical blades 23</td>
			<td>Swann Moiton</td>
			<td>210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellEvent&#8482; Caspase-3/7 Green Detection Reagent</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>C10723</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12/(1:1)(1x) + GlutaMAX</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>31331028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double spatulas, one curved end</td>
			<td>VWR</td>
			<td>RSGA038.150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl alcohol 70% V/V 1,000 mL</td>
			<td>bichsel</td>
			<td>160 0 106 00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, certified</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>16000036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixative Solution 4% paraformaldehyde prepared in PBS</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>201255309/201255305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Intensity Cold Halogen Light Source&#160;</td>
			<td>Intralux&#174;&#160;</td>
			<td>5100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Huygens Professional version 21.10</td>
			<td>Scientific Volume Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ibidi &#181;-Slide 8 well</td>
			<td>ibidi</td>
			<td>80826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope</td>
			<td>LEICA</td>
			<td>M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope</td>
			<td>LEICA</td>
			<td>MS5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MitoSOX&#8482; Red Mitochondrial Superoxide Indicator, for live-cell imaging</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>M36008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement (100x)</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Eclipse Ti microscope with a Yokogawa CSU-W1 spinning disk confocal unit, and a Photometrics Prime 95B camera.</td>
			<td>NIKON</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Eclipse Ti microscope with an A1 point-scanning confocal unit</td>
			<td>NIKON</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14005-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14088-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating tweezers</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11008-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS pH 7.2 (1x), 500mL</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>20012-019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>POLY-D-LYSINE HYDROBROMIDE MOL WT GT 30</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle #4</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10004-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steri 250 Second sterilizer</td>
			<td>Simon Keller AG</td>
			<td>&#160;031100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterilizer, desiccant pellets</td>
			<td>Simon Keller AG</td>
			<td>31120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Dish 60 x 15 mm</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>353802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Dish 60 x 15 mm</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>353004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trito&#160;X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T9284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unconventional myosin-VIIa</td>
			<td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td>
			<td>138-1s</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WFI for Cell Culture[-]Antimicrobial, 500 mL</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>A12873-01</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

whole neonatal cochlear explants as an in vitro model

يفرض فقدان السمع غير المعالج تكاليف كبيرة على نظام الرعاية الصحية العالمي ويضعف نوعية حياة الأفراد. يتميز فقدان السمع الحسي العصبي بفقدان تراكمي لا رجعة فيه لخلايا الشعر الحسية والأعصاب السمعية في قوقعة الأذن. تعد نباتات القوقعة الكاملة والحيوية إحدى الأدوات الأساسية في أبحاث السمع للكشف عن فقدان خلايا الشعر وتوصيف الآليات الجزيئية لخلايا الأذن الداخلية. منذ سنوات عديدة، تم تطوير بروتوكول لعزل قوقعة الأذن لحديثي الولادة، وعلى الرغم من أنه تم تعديله بمرور الوقت، إلا أنه لا يزال يحمل إمكانية التحسن. 
يقدم هذا البحث بروتوكولا محسنا لعزل وزراعة نباتات القوقعة الصناعية الكاملة لحديثي الولادة في غرف زراعة متعددة الآبار تمكن من دراسة خلايا الشعر والخلايا العصبية العقدية الحلزونية على طول القوقعة بالكامل. تم اختبار البروتوكول باستخدام نباتات القوقعة من الفئران والجرذان. تم الحصول على نباتات قوقعة صحية لدراسة التفاعل بين خلايا الشعر والخلايا العصبية العقدية الحلزونية والخلايا الداعمة المحيطة. 
واحدة من المزايا الرئيسية لهذه الطريقة هي أنها تبسط خطوات زراعة الأعضاء دون المساس بجودة النباتات. يتم إرفاق جميع المنعطفات الثلاثة لعضو كورتي بأسفل الغرفة ، مما يسهل التجارب في المختبر والتحليل الشامل للنباتات. نقدم بعض الأمثلة على صور القوقعة من تجارب مختلفة مع النباتات الحية والثابتة، مما يدل على أن النباتات تحتفظ ببنيتها على الرغم من التعرض للعقاقير السامة للأذن. يمكن استخدام هذا البروتوكول الأمثل على نطاق واسع للتحليل التكاملي لقوقعة الثدييات.

تم اختبار البروتوكول الحالي على قوقعة الفئران والجرذان الوليدية. تقدم هذه الورقة صورا لنباتات من تجارب مختلفة. تعرضت نباتات عضو كورتي للجنتاميسين أو سيسبلاتين ، وكان فقدان خلايا الشعر مرئيا. حافظت نباتات عضو كورتي على هيكلها وطولها الإجمالي في ظل الظروف العادية والإجهاد (الشكل 1 والشكل 2). كانت خلايا الشعر الباقية على طول كامل نباتات الفئران التي تعرضت سابقا للسيسبلاتين قابلة للاكتشاف بشكل فردي (الشكل 1). بالإضافة إلى الكشف عن خلايا الشعر الباقية ، تم الكشف أيضا عن خلايا الشعر التي تخضع لموت الخلايا المبرمج (الشكل 2). يسهل هذا النهج تصور الخلايا الباقية وعدها ، والتي يمكن إجراؤها باستخدام نهج التعلم العميق ، كما هو موضح سابقا12. كان من الممكن أيضا اكتشاف العمليات البيولوجية في خلايا القوقعة الحية باستخدام مجسات مناسبة منفذة للخلايا (الشكل 3).
في حالة نباتات القوقعة التي تحتوي على خلايا عصبية عقدية حلزونية ، يمكن تقطيع النباتات إلى قطعتين ، أو يمكن قطع منطقة القمة لتوفير ظروف استزراع أفضل. هنا اخترنا فصل منطقة القمة ، لأنها أقل تأثرا في ظل ظروف الإجهاد. يوضح الشكل 4 المناطق القاعدية والإنسية لنباتات القوقعة الصناعية. تم الكشف عن خلايا الشعر المسمى بعلامة خلايا الشعر MYO7A. وبالمثل ، تم تحديد أجسام خلايا العقدة الحلزونية السليمة والتالفة والخلايا العصبية الموسومة بعلامة الخلايا العصبية TuJ1. يمكن إجراء تحليل مناطق العقدة الحلزونية يدويا أو باستخدام برامج مفتوحة المصدر مثل FIJI مع المكون الإضافي NeuronJ لتتبع الخلايا العصبية13 أو ملحقات مثل TrackMate و Cellpose للتجزئة المورفولوجية14,15. كشف الفحص الدقيق لنباتات الفئران عن الدقة العالية لخلايا القوقعة والأهداب الفراغية لخلايا الشعر (الشكل 5).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65160/65160fig01.jpg"> الشكل 1: زرع عضو كورتي من الفئران المعرضة للجنتاميسين. صور تمثيلية (إسقاط أقصى شدة) ل (أ) التحكم و (ب) النباتات المعرضة للجنتاميسين (200 ميكرومتر لمدة 24 ساعة). توصف خلايا الشعر بالقضيب ويمكن تصورها على طول القوقعة بالكامل. للحصول على توضيح أفضل ، تكون الصورة بألوان رمادية. تم الحصول على الصور باستخدام مجهر متحد البؤر للقرص الدوار بهدف 20x (الفتحة العددية: 0.75). شريط المقياس = 500 ميكرومتر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65160/65160fig01large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65160/65160fig02.jpg"> الشكل 2: زرع عضو كورتي من الفئران المعرضة للسيسبلاتين. صور تمثيلية (إسقاط أقصى كثافة) للتحكم (A) و (B) نباتات معرضة للسيسبلاتين (160 ميكرومتر لمدة 48 ساعة). يتم تمييز خلايا الشعر بالقضيب (الأحمر) ، ويتم تمييز خلايا الشعر المبرمج بالفلوريسين. تم الحصول على الصور باستخدام مجهر متحد البؤر لمسح النقاط وهدف 20x (الفتحة العددية: 0.75). شريط المقياس = 200 ميكرومتر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65160/65160fig02large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65160/65160fig03.jpg"> الشكل 3: زرع عضو كورتي من تجارب التصوير الحي. صور تمثيلية (إسقاط أقصى كثافة) للنباتات من الفئران البرية تظهر (أ) نباتات التحكم و (ب) النباتات مع التعرض ل 125 ميكرومتر سيسبلاتين لمدة 18 ساعة. يتم تمييز خلايا الشعر بميتو هيدرويثيدين وكاسباز -3. تم الحصول على الصور باستخدام مجهر متحد البؤر للقرص الدوار وهدف 20x (الفتحة العددية: 0.75). شريط المقياس = 50 ميكرومتر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65160/65160fig03large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65160/65160fig04.jpg"> الشكل 4: نباتات القوقعة من الفئران بالضربة القاضية STAT1 المعرضة للسيسبلاتين. صور تمثيلية (إسقاط أقصى كثافة) ل (A) نباتات التحكم و (D) النباتات المعرضة ل 40 ميكرومتر سيسبلاتين لمدة 48 ساعة. يتم تمييز أجسام الخلايا الشعرية بالجسم المضاد MYO7A (الأخضر) ، وخلايا العقدة الحلزونية بالجسم المضاد TuJ1 (الأحمر) ووضع العلامات النووية DAPI (الأزرق). تم التقاط الصور باستخدام مجهر متحد البؤر لمسح النقاط وهدف 20x (الفتحة العددية: 0.75) مع تكبير إضافي 2.15 (B ، C ، E ، F). شريط المقياس = (B ، C ، E ، F) 50 ميكرومتر و (A ، D) 200 ميكرومتر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65160/65160fig04large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65160/65160fig05.jpg"> الشكل 5: عضو الفأر في نباتات كورتي. (A-D) صور تمثيلية (إسقاط أقصى كثافة) للنباتات كاملة الطول من الفئران البرية. (أ، ب) تم تمييز النباتات بالجسم المضاد MYO7A ، والبولويدين ، ووضع العلامات النووية DAPI. (ب) في النظرة العامة المكبرة، تكون أجسام خلايا الخلايا الشعرية المؤشر عليها بالجسم المضاد MYO7A (الأخضر) مرئية بوضوح. (ج، د) يصف Phalloidin الأهداب المجسمة والصفيحة الجلدية لخلايا الشعر. تم تصنيف النباتات الخارجية بالفالويدين. (د) في النظرة العامة المكبرة، يتم تحديد الصور غير الملتوية للأهداب المجسمة لخلايا الشعرة الداخلية الفردية بشكل جيد (الصف السفلي)، في حين يصعب تحديد الأهداب الفراغية لخلايا الشعر الخارجية الفردية (الصف العلوي). تم الحصول على الصور في اللوحتين A و C باستخدام مجهر متحد البؤر للقرص الدوار بهدف 20x (الفتحة العددية: 0.75). تم الحصول على الصورة في اللوحة B بنفس المجهر ولكن بهدف هوائي 40x (الفتحة العددية: 0.95). تم الحصول على الصورة في اللوحة D باستخدام مجهر متحد البؤر لمسح النقاط وهدف زيت 100x (الفتحة العددية: 1.45) مع تكبير إضافي 3.46. تم حساب متوسط عمليات المسح أربع مرات لكل قسم XY ، وكان حجم البكسل 0.02 ميكرومتر. أشرطة المقياس = (D) 3 μm ، (B) 100 μm ، و (A ، C) 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65160/65160fig05large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Whole Neonatal Cochlear Explants as an In vitro Model at JoVE.com

Whole Neonatal Cochlear Explants as an In vitro Model

يقوم البروتوكول الحالي بتحديث البروتوكولات السابقة ويتضمن مناهج مباشرة نسبيا لزراعة نباتات القوقعة عالية الجودة. يوفر هذا الحصول على بيانات موثوقة وتصويرا عالي الدقة في الخلايا الحية والثابتة. يدعم هذا البروتوكول الاتجاه المستمر لدراسة خلايا الأذن الداخلية.

نباتات القوقعة الكاملة لحديثي الولادة كنموذج في المختبر

Untreated hearing loss imposes significant costs on the global healthcare system and impairs individuals' quality of life. Sensorineural hearing loss is ...

يتضمن هذا البروتوكول نهجا مباشرا لتبسيط خطوات الاستزراع ، والحصول على نباتات عالية الجودة وسيساهم في استكشاف وكشف النقاب عن الآليات الجزيئية لخلايا القوقعة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي الحد الأدنى من التعامل المباشر مع الأعضاء من خلال تنسيق خطوات التشريح ، وطلاء سطح البوليمر المناسب ، والحجم المتوسط الأمثل ، ووقت التعلق بالنباتات. تمثل هذه التقنية نهجا شائعا في المختبر لدراسة فقدان السمع الحسي العصبي.يمكن استخدام هذا لإنشاء نماذج سامة للأذن ، وإجراء التحليل الهيكلي ، وتقييم مسارات الإشارات ، وإجراء دراسات فحص الأدوية. من حيث المبدأ ، يمكن أن تنطبق هذه الطريقة على الأنسجة المختلفة. يمكن استخدامه أيضا في أبحاث الأذن الداخلية لاكتساب نظرة ثاقبة لمراحل النمو الجنينية.للبدء ، ضع رأس الجرذ مقطوع الرأس على الوسادة المعقمة. استخدم المقص والملقط لإزالة الفك السفلي ، ثم ارفع الجلد وقشره مرة أخرى من الجمجمة. ضع الملقط في التجاويف المدارية لتثبيت الجمجمة.باستخدام شفرة مشرط حادة ، قم بقطع الجمجمة بعناية على طول الخيط السهمي ثم منطقة الخياطة الإكليلية دون إتلاف القوقعة. الآن ، قم بإزالة الدماغ من نصفي الجمجمة. تحت المجهر ، قم بتوطين القوقعة في العظم الصدغي ، وقم بفك الأنسجة المحيطة بين القوقعة والعظم الصدغي.ثم ضع الملقط في القناة نصف الدائرية العلوية. اسحب العظم الصدغي برفق بعيدا عن قوقعة الأذن وأمسك القوقعة المتصلة بالدهليز بالعظم الصدغي. أدخل أطراف الملقط في منطقة القمة التي يمكن رؤيتها كخط أبيض ، وقم بإزالة كبسولة القوقعة الغضروفية قطعة قطعة لكشف قناة القوقعة.ضع الملقط تحت القوقعة ، وافصلها عن العضو الدهليزي والعظم الصدغي. انقل القوقعة إلى طبق جديد بحجم 60 ملم يحتوي على برنامج تلفزيوني مثلج. لعزل أعضاء كورتي المزروعة ، أمسك العضو في القاعدة وقناة القوقعة في منطقة الخطاف القاعدي ، وقم بفك قناة القوقعة برفق من modiolus دون تمزيقها.ثم أمسك قناة القوقعة عند القاعدة واسحب الرباط الحلزوني والأوعية الدموية السطورية. لعزل نباتات القوقعة الصناعية ، استخدم ملقط لفصل العقدة الحلزونية عن الصفيحة الحلزونية العظمية ، وفك الموديولوس أثناء الانفصال. باستخدام الملقط ، أمسك منطقة الخطاف وأزل الرباط الحلزوني باستخدام الأوعية الدموية السطورية.علاوة على ذلك ، اسحب غشاء رايسنر قطعة قطعة. لنقل نباتات القوقعة ، اغمس ملعقة مختبر في الطبق الذي يحتوي على الزرع. ارفع الزرع مع توجيه خلايا الشعر لأعلى مع بضعة ميكرولترات من برنامج تلفزيوني عن طريق التلويح بملعقة.ضع الزرع في شريحة من ثماني حفر عن طريق التلويح بالملعقة برفق في المنتصف. اسمح للزرع بالانزلاق إلى الغرفة. باستخدام ماصة سعة 100 ميكرولتر ، قم بإزالة 80 ميكرولترا من الوسط وتخلص منه.تحقق من رؤية خلايا الشعر والخلايا العصبية العقدية الحلزونية تحت المجهر. إذا لزم الأمر ، استخدم ملقط لدفع الأنسجة المتداخلة بعيدا. قم بإزالة الوسط المتبقي من البئر.سوف تقع المزرعة الآن بشكل مسطح على سطح الغرفة. بعد 10 ثوان ، تقوم الماصة بإرجاع قطرة أو قطرتين من الوسط بجوار النبات مباشرة ، والوسط المتبقي على بعد مسافة لتجنب انفصال الزرع. تأكد من أن النباتات الخارجية لا تتحرك أثناء إضافة الوسيط.احتضان الغرفة لمدة ساعتين لربط الأعضاء بإحكام بقاع الغرفة. بعد الحضانة ، نضح الوسط. وباستخدام ماصة 100 أو 200 ميكرولتر ، أضف بعناية 300 ميكرولتر من الوسط الكامل الطازج الذي تم تسخينه مسبقا.أظهرت الصور المجهرية متحدة البؤر للقرص الدوار أن الفئران Organ of Corti explants حافظت على هيكلها وطولها الإجمالي في ظل الظروف العادية والمجهدة. بالإضافة إلى ذلك ، أظهر المجهر البؤري الماسح وجود خلايا شعرية باقية من النباتات من أعضاء الفئران جنبا إلى جنب مع خلايا الشعر التي تخضع لموت الخلايا المبرمج. مكن البروتوكول من مراقبة المعالجات البيولوجية في خلايا القوقعة الحية باستخدام مجسات مناسبة منفذة للخلايا ومجهر متحد البؤر للقرص الدوار.تعزز زراعة هذه النباتات القوقعة تحليل التفاعل بين خلايا الشعر وخلايا العقدة الحلزونية. تم الكشف عن خلايا الشعر في غرسات القوقعة الصناعية باستخدام علامة خلايا الشعر ، MYO7A. وبالمثل ، تم تحديد أجسام الخلايا العقدية الحلزونية السليمة والتالفة والخلايا العصبية باستخدام العلامة العصبية ، Tuj 1.في النظرة العامة المكبرة ، كانت أجسام خلايا الخلايا الموسومة بالجسم المضاد MYO7A مرئية. تم التعرف على الأهداب المجسمة لخلايا الشعر الخارجية ، والصور غير المعقدة للأهداب الفراغية لخلايا الشعر الداخلية الفردية الموسومة بالقضيب. يجب توخي الحذر أثناء الإجراءات تحت المجهر ، خاصة عند فصل العقدة الحلزونية عن الصفيحة الحلزونية العظمية.يجب نقل النباتات السليمة ومواءمتها بعناية. قام هذا البروتوكول بتحسين الدراسات في المختبر على نباتات الأذن الداخلية. يمكن أن توجه نتائج هذه الدراسات ، مثل مسارات الإشارات وسمية الدواء ، تصميم دراسات أبعد في الجسم الحي.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Whole Neonatal Cochlear Explants as an In vitro Model

Generation of an Immortalized Murine Brain Microvascular Endothelial Cell Line as an In Vitro Blood Brain Barrier Model

Generation of an Immortalized Murine Brain Microvascular Endothelial Cell Line as an In Vitro Blood Brain Barrier Model

جيل من الاوعية الدموية الدقيقة في الدماغ الفئران مخلد الخط الخلية البطانية باعتبارها<em&gt; في المختبر</em&gt; حاجز الدم في الدماغ الموديل

Epithelial and endothelial cells (EC) are building paracellular barriers which protect the tissue from the external and internal environment. The ...

Ex utero Electroporation and Whole Hemisphere Explants: A Simple Experimental Method for Studies of Early Cortical Development

Ex utero Electroporation and Whole Hemisphere Explants: A Simple Experimental Method for Studies of Early Cortical Development

بحكم الرحم الصعق الكهربائي وإإكسبلنتس نصف الكرة المجموع: طريقة بسيطة للدراسات التجريبية التنمية القشرية في وقت مبكر

Cortical development involves complex interactions between neurons and non-neuronal elements including precursor cells, blood vessels, meninges and ...

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

كله جبل تلوين مناعي للشبكية الفأر حديثي الولادة المعنية بالتحقيق في الأوعية الدموية<em&gt; في الجسم الحي</em

Angiogenesis  is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting  of new blood vessels from a pre-existing vessel network. ...

An In Vitro Model for the Study of Cellular Pathophysiology in Globoid Cell Leukodystrophy

An In Vitro Model for the Study of Cellular Pathophysiology in Globoid Cell Leukodystrophy

و<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج لدراسة الفيزيولوجيا المرضية الخلوي في الخلية حثل المادة البيضاء الكروي

The precise function of multi-nucleated microglia, called globoid cells, that are uniquely abundant in the central nervous system of globoid cell ...

Long-term Time Lapse Imaging of Mouse Cochlear Explants

على المدى الطويل الوقت الفاصل بين التصوير من الفأر القوقعة إإكسبلنتس

Here we present a method for long-term time-lapse imaging of live embryonic mouse cochlear explants. The developmental program responsible for building ...

Interfacing 3D Engineered Neuronal Cultures to Micro-Electrode Arrays: An Innovative In Vitro Experimental Model

Interfacing 3D Engineered Neuronal Cultures to Micro-Electrode Arrays: An Innovative In Vitro Experimental Model

تفاعل الثقافات 3D المهندسة العصبية لمايكرو الكهربائي صالحة: مبتكر<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج تجريبي

Currently, large-scale networks derived from dissociated neurons growing and developing in vitro on extracellular micro-transducer devices are the ...

Neurobehavioral Assessments in a Mouse Model of Neonatal Hypoxic-ischemic Brain Injury

تقييم السلوك العصبي في نموذج ماوس لإصابة في الدماغ التاكسج الدماغية حديثي الولادة

We performed unilateral carotid artery occlusion on CD-1 mice to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of neonatal HI ...

Preparation of Rhythmically-active In Vitro Neonatal Rodent Brainstem-spinal Cord and Thin Slice

إعداد نشط إيقاعي في الحبل الشوكي الدماغ القوارض الولدان المختبر وشريحة رقيقة

Mammalian inspiratory rhythm is generated from a neuronal network in a region of the medulla called the preB&#246;tzinger complex (pBC), which produces a ...

An In Vitro Model for Studying Tau Aggregation Using Lentiviral-mediated Transduction of Human Neurons

نموذج في المختبر لدراسة التجميع تاو باستخدام لينتيفيرال-بوساطة الخلايا العصبية البشرية

Aberrant aggregation of the protein tau is pathogenically involved in a number of neurodegenerative diseases, including Alzheimer&#8217;s disease (AD). ...

Cochlear Surface Preparation in the Adult Mouse

اعداد سطح القوقعة في فاره الكبار

Auditory processing in the cochlea depends on the integrity of the mechanosensory hair cells. Over a lifetime, hearing loss can be acquired from numerous ...