Name: in situ imaging of the mouse thymus using 2-photon microscopy
Uploaded: 2008-01-25T19:52:00
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Wir bedanken uns bei Matt Paul und Jimmy Wu für die technische Unterstützung.

Adoptiven Transfer Inject Neugeborenen mit 50-100 ul des Knochenmarks mit einer Insulin-Spritze 2-4 mal während der ersten 3-7 Tage des Lebens, mit einem letzten Donor-zu-Host-Verhältnis von 1:1. Ziel für eine Injektionsstelle unter dem Brustbein und Rippen, aber über dem Darm und Magen. Führen Sie die Nadel weit genug, um das Bauchfell, Achten Sie darauf, Punktion der Membran zu durchdringen. Es ist nicht ungewöhnlich für einen Teil der Knochenmark während der Injektion verloren zu sein. Sie können den Ve...

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	<li>Kyewski, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seeding+of+thymic+microenvironments+defined+by+distinct+thymocyte-stromal+cell+interactions+is+developmentally+controlled.">Seeding of thymic microenvironments defined by distinct thymocyte-stromal cell interactions is developmentally controlled.</a> J Exp Med. 166, 520-538 (1987).</li><li>Ladi, E., Yin, X., Chtanova, T., Robey, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymic+microenvironments+for+T+cell+differentiation+and+selection.">Thymic microenvironments for T cell differentiation and selection.</a> Nat Immunol. 7, 338-343 (2006).</li><li>Witt, C. M., Raychaudhuri, S., Schaefer, B., Chakraborty, A. K., Robey, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+Migration+of+Positively+Selected+Thymocytes+Visualized+in+Real+Time.">Directed Migration of Positively Selected Thymocytes Visualized in Real Time.</a> PLoS Biol. 3, (2005).</li></ol>

Zwei-Photonen-Imaging in den Thymus ermöglicht es uns, in lebendige, intakte Organe der Wechselwirkungen und Migrationen, die Auswahl Ereignisse im Thymus zugrunde zu untersuchen.

in situ imaging of the mouse thymus using 2-photon microscopy

Zwei-Photonen-Mikroskopie (TPM) ermöglicht es uns, Bild tief in den Thymus und dokumentieren die Ereignisse, die wichtig sind für die Thymozyten Entwicklung. Zu folgen, die Migration von Individuen in einer Menge von Thymozyten, generieren wir Neugeborenen Chimären, in denen weniger als ein Prozent der Thymozyten von einem Spender, dass transgene für ein ubiquitär ausdrückliche fluoreszierenden Proteins abgeleitet werden. Zur Erzeugung dieser partiellen hämatopoetischen Chimären sind neonatale Empfänger mit Knochenmark zwischen 3-7 Tage alt injiziert. Nach 4-6 Wochen wird die Maus getötet und die Thymusdrüse wird sorgfältig präpariert und bissected Erhaltung der Architektur des Gewebes, das abgebildet werden soll. Der Thymus ist auf einem Deckglas in der Vorbereitung für die Ex-vivo-Bildgebung von TPM geklebt. Während die Abbildung der Thymus ist in DMEM ohne Phenolrot mit 95% Sauerstoff und 5% Kohlendioxid durchströmt wird, und erwärmt auf 37 ° C gehalten Mit diesem Ansatz können wir untersuchen, die Ereignisse für die Erzeugung von einem vielfältigen T-Zell-Repertoires erforderlich.

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In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy

Wir präsentieren Schritt-für-Schritt-Anleitung für die Erzeugung von Chimären Neugeborenen sowie die Präparation und Vorbereitung des Thymus für die Ex-vivo-Bildgebung durch 2-Photonen-Mikroskopie.

In situ Imaging der Maus Thymus mit 2-Photonen-Mikroskopie

Two-photon Microscopy (TPM) enables us to image deep into the thymus and document the events that are important for thymocyte development.  To follow the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection and 2-Photon Imaging of Peripheral Lymph Nodes in Mice

Dissection und 2-Photonen-Imaging der peripheren Lymphknoten in Mäusen

Two-photon imaging has revealed an elegant choreography of motility and cellular interactions within the lymph node under basal conditions and at the ...

Forschung

Biologie

A Method for 2-Photon Imaging of Blood Flow in the Neocortex through a Cranial Window

Eine Methode zur 2-Photonen-Imaging der Blutfluss in den Neocortex durch ein Cranial Fenster

The ability to image the cerebral vasculature (from large vessels to capillaries) and record blood flow dynamics in the intact brain of living rodents is ...

In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice

In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2 / 3 der Mäuse

To understand network dynamics of microcircuits in the neocortex, it is essential to simultaneously record the activity of a large number of neurons .  ...

Generation of Bone Marrow Derived Murine Dendritic Cells for Use in 2-photon Imaging

Generierung von Knochenmark murinen dendritischen Zellen für den Einsatz in 2-Photonen-Imaging

Several methods for the preparation of murine dendritic cells can be found in the literature. Here, we present a method that produces greater than 85% ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In-vivo-Imaging und therapeutische Behandlungen in einem orthotopen Mausmodell des Eierstockkrebs

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualisierung und Analyse von mRNA Moleküle mittels Fluoreszenz<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisierung in<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In-vivo-4-Dimensional-Tracking von hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen im erwachsenen Maus Schädeldachknochenmark

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Detection and Analysis of DNA Damage in Mouse Skeletal Muscle In Situ Using the TUNEL Method

Detection and Analysis of DNA Damage in Mouse Skeletal Muscle In Situ Using the TUNEL Method

Erkennung und Analyse von DNA-Schädigungen in Maus-Skelettmuskel<em&gt; In-situ-</em&gt; Verwenden der TUNEL-Methode

Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) deoxyuridine triphosphate (dUTP) nick end labeling (TUNEL) is the method of using the TdT enzyme to covalently ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Messung der Steifigkeit von<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Maus Aorten Mit Rasterkraftmikroskopie

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Micropuncture of Bowman's Space in Mice Facilitated by 2 Photon Microscopy

Mikropunktion Bowmans Platz bei Mäusen durch die 2-Photonen-Mikroskopie

Renal micropuncture and renal 2-photon imaging are seminal techniques in renal physiology. However, micropuncture is limited by dependence on conventional ...