Name: in situ imaging of the mouse thymus using 2-photon microscopy
Uploaded: 2008-01-25T19:52:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy at JoVE.com

אנו מודים מאט פול ג&#39;ימי וו לקבלת סיוע טכני.

המאמצת העברת הזרק בילודים עם 50-100ul של מח העצם באמצעות מזרק אינסולין 2-4 פעמים במהלך 3-7 הימים הראשונים לחייהם, עם יחס תורם ל-מארח הסופי של 01:01. מטרת אתר זריקה מתחת עצם החזה וכלוב הצלעות, אבל מעל המעיים והקיבה. הכנס את המחט רחוק מספיק כדי לחדור את הצפ...

<ol>
	<li>Kyewski, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seeding+of+thymic+microenvironments+defined+by+distinct+thymocyte-stromal+cell+interactions+is+developmentally+controlled.">Seeding of thymic microenvironments defined by distinct thymocyte-stromal cell interactions is developmentally controlled.</a> J Exp Med. 166, 520-538 (1987).</li><li>Ladi, E., Yin, X., Chtanova, T., Robey, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymic+microenvironments+for+T+cell+differentiation+and+selection.">Thymic microenvironments for T cell differentiation and selection.</a> Nat Immunol. 7, 338-343 (2006).</li><li>Witt, C. M., Raychaudhuri, S., Schaefer, B., Chakraborty, A. K., Robey, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+Migration+of+Positively+Selected+Thymocytes+Visualized+in+Real+Time.">Directed Migration of Positively Selected Thymocytes Visualized in Real Time.</a> PLoS Biol. 3, (2005).</li></ol>

הדמיה דו פוטון התימוס מאפשר לנו לבחון, איברים חיים שלמים אינטראקציות הגירות העומדים בבסיס האירועים מבחר בתוך התימוס.

in situ imaging of the mouse thymus using 2-photon microscopy

מיקרוסקופית שני הפוטונים (TPM) מאפשר לנו תמונה עמוק לתוך התימוס ולתעד את האירועים החשובים לפיתוח thymocyte. כדי לעקוב אחר המעבר של יחידים בתוך קהל של thymocytes, אנחנו מייצרים מפלצות בילוד שם פחות מאחוז אחד של thymocytes נגזרות תורם כי הוא מהונדס עבור חלבון פלואורסצנטי להביע בכל מקום בגוף. כדי להפיק אלה מפלצות hematopoetic חלקית, מקבלי בילוד מוזרקים עם מח עצם בין 3-7 ימים של גיל. לאחר 4-6 שבועות, העכבר הוא הקריב את התימוס הוא גזור בקפידה bissected שמירה על הארכיטקטורה של הרקמה יהיה הדמיה. התימוס הוא מודבק על coverslip כהכנה לשעבר vivo הדמיה על ידי TPM. במהלך הדמיה התימוס נשמר DMEM ללא פנול אדום כי הוא perfused עם 95% חמצן ופחמן דו חמצני 5% והתלהב 37 ° C. שימוש בגישה זו, אנו יכולים לחקור את האירועים הנדרשים עבור הדור של רפרטואר מגוון T התא.

Watch this Scientific Journal Video about In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy at JoVE.com

In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy

אנו מציגים צעד אחר צעד הוראות עבור הדור של מפלצות הילוד וכן לנתיחה והכנת התימוס עבור vivo לשעבר הדמיה על ידי מיקרוסקופית 2-פוטון.

בתחום ההדמיה באתרו של קורנית עכבר באמצעות 2-פוטון מיקרוסקופית

Two-photon Microscopy (TPM) enables us to image deep into the thymus and document the events that are important for thymocyte development.  To follow the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection and 2-Photon Imaging of Peripheral Lymph Nodes in Mice

Dissection ו 2-Photon הדמיה של בלוטות לימפה הפריפריה עכברים

Two-photon imaging has revealed an elegant choreography of motility and cellular interactions within the lymph node under basal conditions and at the ...

A Method for 2-Photon Imaging of Blood Flow in the Neocortex through a Cranial Window

שיטה הדמיה 2-פוטון של זרימת הדם הניאוקורטקס דרך חלון גולגולתי

The ability to image the cerebral vasculature (from large vessels to capillaries) and record blood flow dynamics in the intact brain of living rodents is ...

In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice

In vivo 2-Photon סידן הדמיה ב Layer 2 / 3 של עכברים

To understand network dynamics of microcircuits in the neocortex, it is essential to simultaneously record the activity of a large number of neurons .  ...

Generation of Bone Marrow Derived Murine Dendritic Cells for Use in 2-photon Imaging

הדור של מח עצם נגזר תאים דנדריטים Murine לשימוש 2-פוטון הדמיה

Several methods for the preparation of murine dendritic cells can be found in the literature. Here, we present a method that produces greater than 85% ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

בשנת vivo ההדמיה לטיפולים במודל עכבר orthotopic של סרטן השחלות

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

הדמיה וניתוח של מולקולות ה-mRNA באמצעות הקרינה<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה ב<em&gt; Cerevisiae Saccharomyces</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Detection and Analysis of DNA Damage in Mouse Skeletal Muscle In Situ Using the TUNEL Method

Detection and Analysis of DNA Damage in Mouse Skeletal Muscle In Situ Using the TUNEL Method

זיהוי וניתוח של נזק לדנ&quot;א בשרירי שלד עכבר<em&gt; באתר</em&gt; שימוש בשיטת TUNEL

Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) deoxyuridine triphosphate (dUTP) nick end labeling (TUNEL) is the method of using the TdT enzyme to covalently ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

מדידת הקשיחות של<em&gt; Ex Vivo</em&gt; עכבר Aortas באמצעות מיקרוסקופ כוח אטומי

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Micropuncture of Bowman's Space in Mice Facilitated by 2 Photon Microscopy

Micropuncture של השטח של באומן בעכברים בהנחייתם של מיקרוסקופיית פוטון 2

Renal micropuncture and renal 2-photon imaging are seminal techniques in renal physiology. However, micropuncture is limited by dependence on conventional ...