Name: in situ imaging of the mouse thymus using 2-photon microscopy
Uploaded: 2008-01-25T19:52:00
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Ringraziamo Paolo Matt e Jimmy Wu di assistenza tecnica.

Trasferimento adottivi Iniettare neonati con 50-100ul di midollo osseo con una siringa per insulina 2-4 volte durante i primi 3-7 giorni di vita, con un finale donatore-to-host rapporto di 1:1. Mirare a un sito di iniezione sotto lo sterno e la gabbia toracica, ma soprattutto l&#39;intestino e lo stomaco. Inserire l&#39;ago quanto basta per penetrare il peritoneo, attenzione a non forare il diaframma. Non è raro che per alcuni del midollo osseo per essere persi durante l&#39;iniezione. È possibile ridurre la perd...

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	<li>Kyewski, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seeding+of+thymic+microenvironments+defined+by+distinct+thymocyte-stromal+cell+interactions+is+developmentally+controlled.">Seeding of thymic microenvironments defined by distinct thymocyte-stromal cell interactions is developmentally controlled.</a> J Exp Med. 166, 520-538 (1987).</li><li>Ladi, E., Yin, X., Chtanova, T., Robey, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymic+microenvironments+for+T+cell+differentiation+and+selection.">Thymic microenvironments for T cell differentiation and selection.</a> Nat Immunol. 7, 338-343 (2006).</li><li>Witt, C. M., Raychaudhuri, S., Schaefer, B., Chakraborty, A. K., Robey, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+Migration+of+Positively+Selected+Thymocytes+Visualized+in+Real+Time.">Directed Migration of Positively Selected Thymocytes Visualized in Real Time.</a> PLoS Biol. 3, (2005).</li></ol>

Immagini a due fotoni nel timo ci consente di esaminare in vita, gli organi intatti le interazioni e le migrazioni che sono alla base eventi di selezione all&#39;interno del timo.

in situ imaging of the mouse thymus using 2-photon microscopy

Microscopia a due fotoni (TPM) ci permette di immagine in profondità nel timo e documentare gli eventi che sono importanti per lo sviluppo timocita. Per seguire la migrazione degli individui in una folla di timociti, che generano chimere neonatale dove derivano meno dell&#39;uno per cento dei timociti da un donatore che è transgenico per una proteina ubiquitariamente espressa fluorescente. Per generare queste chimere parziale ematopoietiche, i destinatari neonatale vengono iniettati con midollo osseo tra i 3-7 giorni di età. Dopo 4-6 settimane, il mouse è sacrificato ed il timo è attentamente sezionato e bissected preservando l&#39;architettura del tessuto che verrà ripreso. Il timo è incollato su un vetrino in preparazione ex vivo di immagini da TPM. Durante l&#39;imaging del timo è tenuto in DMEM senza rosso fenolo che è perfuso con il 95% di ossigeno e anidride carbonica del 5% e riscaldato a 37 ° C. Usando questo approccio, possiamo studiare gli eventi necessari per la generazione di un diverso repertorio delle cellule T.

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In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy

Vi presentiamo passo-passo le istruzioni per la generazione di chimere neonatale e la dissezione e la preparazione del timo per ex vivo imaging 2-Photon Microscopia.

Imaging in situ del Timo mouse utilizzando 2-Photon Microscopia

Two-photon Microscopy (TPM) enables us to image deep into the thymus and document the events that are important for thymocyte development.  To follow the ...

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