Name: in situ imaging of the mouse thymus using 2-photon microscopy
Uploaded: 2008-01-25T19:52:00
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Agradecemos a Matt Paul e Jimmy Wu para assistência técnica.

Transferência adotiva Injetar recém-nascidos com 50 100ul de medula óssea usando uma seringa de insulina 2-4 vezes durante os primeiros 3-7 dias de vida, com uma relação de doadores para hospedar-final de 1:1. Apontar para um local da injeção abaixo do esterno e costelas, mas acima do intestino e estômago. Inserir a agulha longe o suficiente para penetrar no peritônio, cuidado para não perfurar o diafragma. Não é incomum para alguns de medula óssea para ser perdido durante a injecção. Você pode redu...

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	<li>Kyewski, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seeding+of+thymic+microenvironments+defined+by+distinct+thymocyte-stromal+cell+interactions+is+developmentally+controlled.">Seeding of thymic microenvironments defined by distinct thymocyte-stromal cell interactions is developmentally controlled.</a> J Exp Med. 166, 520-538 (1987).</li><li>Ladi, E., Yin, X., Chtanova, T., Robey, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymic+microenvironments+for+T+cell+differentiation+and+selection.">Thymic microenvironments for T cell differentiation and selection.</a> Nat Immunol. 7, 338-343 (2006).</li><li>Witt, C. M., Raychaudhuri, S., Schaefer, B., Chakraborty, A. K., Robey, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+Migration+of+Positively+Selected+Thymocytes+Visualized+in+Real+Time.">Directed Migration of Positively Selected Thymocytes Visualized in Real Time.</a> PLoS Biol. 3, (2005).</li></ol>

Imagem de dois fótons no timo nos permite examinar em que vivem, órgãos intactos as interações e as migrações que fundamentam eventos de seleção dentro do timo.

in situ imaging of the mouse thymus using 2-photon microscopy

Microscopia de dois fótons (TPM) nos permite imagem profundamente no timo e documentar os eventos que são importantes para o desenvolvimento timócito. Para acompanhar a migração de indivíduos em uma multidão de timócitos, geramos quimeras neonatal, onde menos de um por cento dos timócitos são derivados de um doador que é transgênico para expressar uma proteína fluorescente ubiquitously. Para gerar estas quimeras parcial hematopoéticas, os destinatários neonatal são injetados com medula óssea entre 3-7 dias de idade. Após 4-6 semanas, o rato é sacrificado e do timo é cuidadosamente dissecado e bissected preservar a arquitetura do tecido que será trabalhada. O timo é colado em uma lamela em preparação para ex vivo de imagens por TPM. Durante a gravação do timo é mantido em DMEM sem vermelho de fenol que é perfundido com 95% de oxigênio e dióxido de carbono de 5% e aquecido a 37 ° C. Usando essa abordagem, podemos estudar os eventos necessários para a geração de um repertório diversificado de células T.

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In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy

Nós apresentamos o passo-a-passo para a geração de quimeras neonatal, bem como a dissecação e preparação do timo ex vivo de imagens por 2-Photon Microscopia.

Na imagem situ da Thymus Mouse Usando 2-Photon Microscopia

Two-photon Microscopy (TPM) enables us to image deep into the thymus and document the events that are important for thymocyte development.  To follow the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection and 2-Photon Imaging of Peripheral Lymph Nodes in Mice

Dissecção e 2-Photon Imagens de linfonodos periféricos em ratos

Two-photon imaging has revealed an elegant choreography of motility and cellular interactions within the lymph node under basal conditions and at the ...

Biologia

A Method for 2-Photon Imaging of Blood Flow in the Neocortex through a Cranial Window

Um método para 2-Photon Imagens de Fluxo de Sangue no neocórtex através de uma janela Cranial

The ability to image the cerebral vasculature (from large vessels to capillaries) and record blood flow dynamics in the intact brain of living rodents is ...

In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice

Vivo em 2-Photon Imagens de cálcio na camada 2 / 3 dos Ratos

To understand network dynamics of microcircuits in the neocortex, it is essential to simultaneously record the activity of a large number of neurons .  ...

Generation of Bone Marrow Derived Murine Dendritic Cells for Use in 2-photon Imaging

Geração de Medula Óssea Derivado Células Dendríticas murino para uso em dois fótons de imagem

Several methods for the preparation of murine dendritic cells can be found in the literature. Here, we present a method that produces greater than 85% ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

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In vivo de imagens e tratamentos terapêuticos em um modelo de camundongo ortotópico de câncer de ovário

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

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Visualização e análise de moléculas de mRNA Usando Fluorescência<em&gt; In Situ</em&gt; A hibridação em<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

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In Vivo Rastreamento 4-Dimensional de tronco hematopoéticas e células progenitoras em adultos mouse na calota craniana de Medula Óssea

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Detection and Analysis of DNA Damage in Mouse Skeletal Muscle In Situ Using the TUNEL Method

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Detecção e análise de danos no DNA em Rato Músculo Esquelético<em&gt; In Situ</em&gt; Usando o método TUNEL

Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) deoxyuridine triphosphate (dUTP) nick end labeling (TUNEL) is the method of using the TdT enzyme to covalently ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

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Medindo a rigidez<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Mouse aortas Usando Microscopia de Força Atômica

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Micropuncture of Bowman's Space in Mice Facilitated by 2 Photon Microscopy

Micropunção do espaço de Bowman em camundongos facilitada pela microscopia de fóton 2

Renal micropuncture and renal 2-photon imaging are seminal techniques in renal physiology. However, micropuncture is limited by dependence on conventional ...