Name: in situ imaging of the mouse thymus using 2-photon microscopy
Uploaded: 2008-01-25T19:52:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy at JoVE.com

Vi tackar Matt Paul och Jimmy Wu för tekniskt stöd.

Adoptiv transfer Injicera nyfödda med 50-100ul av benmärg med en spruta 2-4 gånger under de första 3-7 dagarna av liv, med en sista givare till host 1:1. Sikta på ett injektionsställe nedanför bröstbenet och bröstkorgen, men framför tarmen och magen. In nålen tillräckligt långt för att tränga igenom bukhinnan, noga med att inte punktera membranet. Det är inte ovanligt för en del av benmärgen att gå förlorade under injektionen. Du kan minska förlusten genom att lossa greppet om valpen när du in...

<ol>
	<li>Kyewski, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seeding+of+thymic+microenvironments+defined+by+distinct+thymocyte-stromal+cell+interactions+is+developmentally+controlled.">Seeding of thymic microenvironments defined by distinct thymocyte-stromal cell interactions is developmentally controlled.</a> J Exp Med. 166, 520-538 (1987).</li><li>Ladi, E., Yin, X., Chtanova, T., Robey, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymic+microenvironments+for+T+cell+differentiation+and+selection.">Thymic microenvironments for T cell differentiation and selection.</a> Nat Immunol. 7, 338-343 (2006).</li><li>Witt, C. M., Raychaudhuri, S., Schaefer, B., Chakraborty, A. K., Robey, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+Migration+of+Positively+Selected+Thymocytes+Visualized+in+Real+Time.">Directed Migration of Positively Selected Thymocytes Visualized in Real Time.</a> PLoS Biol. 3, (2005).</li></ol>

Två-foton avbildning i tymus ger oss möjlighet att undersöka i levande, intakta organ interaktionen och migration som ligger bakom valet händelser inom bräss.

in situ imaging of the mouse thymus using 2-photon microscopy

Två-foton mikroskopi (TPM) ger oss möjlighet att bilden djupt in i tymus och dokumentera händelser som är viktiga för tymocyt utveckling. För att följa migrationen av individer i en folkmassa av tymocyter skapar vi neonatal chimärer där mindre än en procent av tymocyter kommer från en donator som är transgena för en ubiquitously uttrycka fluorescerande protein. För att generera dessa partiella hematopoetisk chimärer, är neonatal mottagare injiceras med benmärg mellan 3-7 dagars ålder. Efter 4-6 veckor är musen offras och bräss är noggrant dissekeras och bissected bevara arkitekturen i den vävnad som ska avbildas. Bräss är limmad på ett täckglas som förberedelse för ex vivo avbildning av TPM. Under avbildning bräss hålls i DMEM utan fenolrött som är perfusion med 95% syrgas och 5% koldioxid och uppvärmd till 37 ° C. Med denna metod kan vi studera de händelser som krävs för generering av en mängd T-cell repertoar.

Watch this Scientific Journal Video about In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy at JoVE.com

In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy

Vi presenterar steg-för-steg-instruktioner för generering av neonatal chimärer samt dissekering och förberedelse av bräss för ex vivo imaging med 2-Photon mikroskopi.

In situ avbildning av Mouse Thymus Använda 2-Photon Mikroskopi

Two-photon Microscopy (TPM) enables us to image deep into the thymus and document the events that are important for thymocyte development.  To follow the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection and 2-Photon Imaging of Peripheral Lymph Nodes in Mice

Dissektion och 2-Photon Imaging för perifera lymfkörtlar på möss

Two-photon imaging has revealed an elegant choreography of motility and cellular interactions within the lymph node under basal conditions and at the ...

A Method for 2-Photon Imaging of Blood Flow in the Neocortex through a Cranial Window

En metod för 2-Photon Imaging av blodflödet i hjärnbarken genom en Kraniell fönster

The ability to image the cerebral vasculature (from large vessels to capillaries) and record blood flow dynamics in the intact brain of living rodents is ...

In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice

In Vivo 2-Photon Kalcium Imaging i Layer 2 / 3 av Möss

To understand network dynamics of microcircuits in the neocortex, it is essential to simultaneously record the activity of a large number of neurons .  ...

Generation of Bone Marrow Derived Murine Dendritic Cells for Use in 2-photon Imaging

Generering av benmärg härledda Murine dendritiska celler för användning i 2-fotonen Imaging

Several methods for the preparation of murine dendritic cells can be found in the literature. Here, we present a method that produces greater than 85% ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging och terapeutiska behandlingar i en Orthotopic musmodell av äggstockscancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualisering och analys av mRNA-molekyler användning av fluorescens<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering i<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Spårning av Hematopoietic Stem och stamceller i vuxen mus calvarial Benmärg

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Detection and Analysis of DNA Damage in Mouse Skeletal Muscle In Situ Using the TUNEL Method

Detection and Analysis of DNA Damage in Mouse Skeletal Muscle In Situ Using the TUNEL Method

Detektion och analys av DNA-skador i Mouse skelettmuskulatur<em&gt; In situ</em&gt; Använda TUNEL metoden

Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) deoxyuridine triphosphate (dUTP) nick end labeling (TUNEL) is the method of using the TdT enzyme to covalently ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Mätning av styvheten hos<em&gt; Ex vivo</em&gt; Mus Aorta Använda atomkraftsmikroskopi

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Micropuncture of Bowman's Space in Mice Facilitated by 2 Photon Microscopy

Micropuncture Bowmans utrymme hos möss som underlättas av 2 foton mikroskopi

Renal micropuncture and renal 2-photon imaging are seminal techniques in renal physiology. However, micropuncture is limited by dependence on conventional ...