Ombygningen af mitokondrienetværket forekommer i fysiologisk stress og patologiske tilstande. Imidlertid forbliver virkningerne af mitokondriel remodellering i en skeletmuskel ufuldstændigt forstået. Denne protokol muliggør kvantificering af ændringer i mitokondrier i levende skeletmuskulatur, hvilket forbedrer vores forståelse af samspillet mellem mitokondrieændringer og cellulær funktion.
Arbejde med levende skeletmuskler giver udfordringer på grund af fiberkontraktion under isolering og følsomhed over for billede under konfokal scanning. Denne protokol beskriver en isolationsproces ved hjælp af en afslapningsløsning, der muliggør analyse af levedygtige muskelfibre til mitokondrievurdering via konfokal mikroskopi. Vores protokol adresserer manglen på arbejdsgange til at analysere kvantitativt mitokondrienetværk i skeletmuskelfibre.
De trin, der er beskrevet her, giver brugerne mulighed for at drage større fordel af billeder opnået ved konfokal mikroskopi ved hjælp af billedbehandling ved tærskelværdi og hurtig Fourier-analyse for at opnå kvantificering af mitokondrietæthed og distribution. Vi er interesserede i undersøgelsen af skeletmuskelændring, især mitokondriedynamik og mitokondriel strukturel ombygning under modgang, og hvordan kan de moduleres gennem intervention som motion og mellemliggende faste.
