Mitokondriyal ağın yeniden şekillenmesi fizyolojik stres ve patolojik koşullarda meydana gelir. Bununla birlikte, bir iskelet kasında mitokondriyal yeniden şekillenmenin etkileri tam olarak anlaşılamamıştır. Bu protokol, canlı iskelet kasındaki mitokondri değişikliklerinin ölçülmesini sağlar ve mitokondriyal değişiklikler ile hücresel işlev arasındaki etkileşimi anlamamızı sağlar.
Canlı iskelet kaslarıyla çalışmak, izolasyon sırasında lif kasılması ve konfokal tarama sırasında görüntüye duyarlılık nedeniyle zorluklar ortaya çıkarır. Bu protokol, konfokal mikroskopi yoluyla mitokondriyal değerlendirme için canlı kas liflerinin analizini sağlayan bir gevşeme solüsyonu kullanan bir izolasyon sürecini açıklar. Protokolümüz, iskelet kası liflerindeki mitokondriyal ağları kantitatif olarak analiz etmek için iş akışlarının eksikliğini giderir.
Burada açıklanan adımlar, kullanıcıların mitokondriyal yoğunluk ve dağılımın nicelleştirilmesini sağlamak için eşikleme ve hızlı Fourier analizi ile görüntü işleme kullanılarak konfokal mikroskopi ile elde edilen görüntülerden daha fazla yararlanmalarını sağlar. İskelet kası değişikliği, özellikle mitokondriyal dinamikler ve sıkıntı sırasında mitokondriyal yapısal yeniden şekillenme ve bunların egzersiz ve orta düzeyde açlık gibi müdahalelerle nasıl modüle edilebileceği ile ilgileniyoruz.
