Begynd med at sikre den udtrukne menneskelige tand på plads med tandpincet. Skær derefter tanden ved hjælp af en diamantskive, der er forbundet til et tandhåndstykke og en vandkølevæske. Brug en tandgraver til at fjerne pulpavævet fra tanden.
Brug derefter et sterilt kirurgisk blad til forsigtigt at hakke papirmassevævet i små fragmenter. Anbring derefter disse fragmenter i en minivævsslibemaskine med PBS for at danne en homogen blanding. Overfør de hakkede vævsfragmenter til et 15 milliliter rør og fordøje dem ved hjælp af en blanding af kollagenase type et og dispase.
Inkuber vævet i enzymblandingen ved 37 grader Celsius i to timer. Efter inkubation neutraliseres enzymerne. Overfør derefter det fordøjede væv til et 15 ml rør og drej ved 300 G i fem minutter ved stuetemperatur.
Kassér derefter forsigtigt supernatanten og suspender pelleten igen i frisk DMEM, suppleret med 10 til 20% FBS. Til cellekultur overføres forsigtigt cellesuspensionen til en 25 kvadratcentimeter dyrkningskolbe. Inkuber cellerne ved 37 grader Celsius i 5% kuldioxid.
Efter to til tre dage skal du forsigtigt aspirere mediet ved hjælp af en steril serologisk pipette og erstatte det med et nyt medium. Dernæst, for karakterisering af DPSC'er, tænd for flowcytometeret og bekræft de isolerede cellers mesenkymale stamcellenatur. Den vellykkede differentiering af DPSC'er i osteoblaster, adipocytter og kondrocytter validerer DPSC'ernes multipotente natur.
Fordoblingstiden for DPSC'er var i overensstemmelse med den, der blev rapporteret for mesenkymale stamceller, hvilket tyder på en sund og proliferativ cellepopulation. Flowcytometrianalysen viste, at et flertal af DPSC'erne var positive for CD-90, CD-73 og CD-105, hvilket bekræftede deres identitet som mesenkymale stamceller. Desuden var mindre end 2 % af cellerne positive for CD-34, CD-45 og HLADR, hvilket bekræfter fraværet af signifikant hæmatopoietisk eller endotelcellekontaminering.
