Name: लेखक स्पॉटलाइट: सेरेब्रल रक्त के थक्कों के व्यापक सेल घटक विश्लेषण के लिए एक उपन्यास विधि
Uploaded: 2023-07-21T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Novel Method for Comprehensive Cell Component Analysis of Cerebral Blood Clots at JoVE.com

इस शोध को ज़ियामेन सिटी के विज्ञान और प्रौद्योगिकी ब्यूरो (3502Z20227197), और फ़ुज़ियान प्रांत के विज्ञान और प्रौद्योगिकी ब्यूरो (संख्या 2019J01070, No.2021Y0027) द्वारा वित्त पोषित किया गया था।

शोध हुआकियाओ विश्वविद्यालय की चिकित्सा नैतिकता समिति के संस्थागत दिशानिर्देशों के अनुपालन में किया गया था। मरीजों की सहमति से फुजियान मेडिकल यूनिवर्सिटी से संबद्ध क्वानझोउ फर्स्ट अस्पताल में सेर?...

सेरेब्रल थ्रोम्बस सेल घटकों का अध्ययन करने के लिए एक फाइब्रिनोलिटिक एंजाइम-आधारित विधि

<ol>
	<li>Park, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Edoxaban+versus+dual+antiplatelet+therapy+for+leaflet+thrombosis+and+cerebral+thromboembolism+after+TAVR:+The+ADAPT-TAVR+Randomized+clinical+trial.">Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial.</a> Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).</li><li>Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+venous+sinus+thrombosis+incidence+is+higher+than+previously+thought:+a+retrospective+population-based+study.">Cerebral venous sinus thrombosis incidence is higher than previously thought: a retrospective population-based study.</a> Stroke. 47 (9), 2180-2182 (2016).</li><li>Sacco, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+updated+definition+of+stroke+for+the+21st+century:+a+statement+for+healthcare+professionals+from+the+American+Heart+Association/American+Stroke+Association.">An updated definition of stroke for the 21st century: a statement for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association.</a> Stroke. 44 (7), 2064-2089 (2013).</li><li>Thalin, C., Hisada, Y., Lundstrom, S., Mackman, N., Wallen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps:+villains+and+targets+in+arterial,+venous,+and+cancer-associated+thrombosis.">Neutrophil extracellular traps: villains and targets in arterial, venous, and cancer-associated thrombosis.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 39 (9), 1724-1738 (2019).</li><li>Mocsai, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+novel+functions+of+neutrophils+in+immunity,+inflammation,+and+beyond.">Diverse novel functions of neutrophils in immunity, inflammation, and beyond.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (7), 1283-1299 (2013).</li><li>Dhanesha, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PKM2+promotes+neutrophil+activation+and+cerebral+thromboinflammation:+therapeutic+implications+for+ischemic+stroke.">PKM2 promotes neutrophil activation and cerebral thromboinflammation: therapeutic implications for ischemic stroke.</a> Blood. 139 (8), 1234-1245 (2022).</li><li>Ducroux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombus+neutrophil+extracellular+traps+content+impair+tpa-induced+thrombolysis+in+acute+ischemic+stroke.">Thrombus neutrophil extracellular traps content impair tpa-induced thrombolysis in acute ischemic stroke.</a> Stroke. 49 (3), 754-757 (2018).</li><li>Solomon, C., Ranucci, M., Hochleitner, G., Schochl, H., Schlimp, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+methodology+for+calculating+platelet+contribution+to+clot+strength+(platelet+component)+in+thromboelastometry+and+thrombelastography.">Assessing the methodology for calculating platelet contribution to clot strength (platelet component) in thromboelastometry and thrombelastography.</a> Anesthesia and Analgesia. 121 (4), 868-878 (2015).</li><li>Daraei, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+fiber+diameter+and+porosity+measurements+of+plasma+clots+in+scanning+electron+microscopy+images.">Automated fiber diameter and porosity measurements of plasma clots in scanning electron microscopy images.</a> Biomolecules. 11 (10), 1536 (2021).</li><li>Abbasi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+thrombus+composition+in+thrombectomy+stroke+patients+with+longer+time+to+recanalization.">Diverse thrombus composition in thrombectomy stroke patients with longer time to recanalization.</a> Thrombosis Research. 209, 99-104 (2022).</li><li>C W Francis, a., Marder, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concepts+of+clot+lysis.">Concepts of clot lysis.</a> Annual Review of Medicine. 37 (1), 187-204 (1986).</li><li>Xu, R., Ma, G., Chen, L., Cui, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Preparation and application of natural fibrinolytic enzyme from peanut worm. , (2019).</li><li>Fotso Fotso, A., Drancourt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+Diagnosis+of+tick-borne+african+relapsing+fevers:+latest+developments.">Laboratory Diagnosis of tick-borne african relapsing fevers: latest developments.</a> Front Public Health. 3, 254 (2015).</li><li>Liou, G. Y., Byrd, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+bioliquid+markers+for+pancreatic+cancer:+What+we+have+vs.+what+we+need.">Diagnostic bioliquid markers for pancreatic cancer: What we have vs. what we need.</a> Cancers (Basel). 15 (9), 2446 (2023).</li><li>Tang, M., Lin, H., Hu, C., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Affinity+purification+of+a+fibrinolytic+enzyme+from+Sipunculus+nudus.">Affinity purification of a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus.</a> Journal of Visualized Experiments. 196, e65631 (2023).</li><li>Ge, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+antithrombotic+protease+from+marine+worm+Sipunculus+Nudus.">A Novel antithrombotic protease from marine worm Sipunculus Nudus.</a> International Journal Of Molecular Sciences. 19 (10), 3023 (2018).</li><li>Talukder, M. A., Menyuk, C. R., Kostov, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinguishing+between+whole+cells+and+cell+debris+using+surface+plasmon+coupled+emission.">Distinguishing between whole cells and cell debris using surface plasmon coupled emission.</a> Biomedical Optics Express. 9 (4), 1977-1991 (2018).</li><li>Shapiro, D. J., Hicks, L. A., Pavia, A. T., Hersh, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+prescribing+for+adults+in+ambulatory++care+in+the+USA,+2007-09.">Antibiotic prescribing for adults in ambulatory care in the USA, 2007-09.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 69 (1), 234-240 (2014).</li></ol>

एसएफई एक फाइब्रिनोलिटिक एजेंट है जो फाइब्रिन को सीधे और प्रभावी ढंग से12,16 कम कर सकता है। यहां, एसएफई को सेरेब्रल रक्त के थक्कों के क्रॉस-लिंक्ड फाइब्रिन को नीचा दिखाने, थक्कों के भ?...

सेरेब्रोवास्कुलर रोग तीन प्रमुख बीमारियों में से एक है जो मानव स्वास्थ्य को खतरे में डाल सकता है, जिनमें से इस्केमिक सेरेब्रोवास्कुलर रोग 80% से अधिक है। सेरेब्रल थ्रोम्बोसिस और सेरेब्रल वेन थ्रोम्बोसिस आज सबसे अधिक चिंतित इस्केमिक सेरेब्रोवास्कुलर रोग हैं, जो मुख्य रूप से सेरेब्रल रक्त के थक्कों 1,2 के कारण होते हैं। यदि उपचार ठीक से नहीं किया जाता है, तो इसमें उच्च विकलांगता और मृत्यु दर और डिस्चार्जके बाद उच्च पुनरावृत्ति दर होगी।
हाल ही में, अध्ययनों की बढ़ती संख्या से पता चला है कि सेरेब्रल रक्त के थक्कों के कोशिका घटक सेरेब्रल थ्रोम्बोसिस 4,5,6 के निदान, उपचार और पूर्वानुमान के साथ कसकर सहसंबद्ध हैं। इसलिए, थ्रोम्बस संरचना, विशेष रूप से सेल घटकों पर डेटा की उपलब्धता, नैदानिक निदान और उपचार के लिए महत्वपूर्ण है। दुर्भाग्य से, वर्तमान में उपलब्ध विधियां रक्त के थक्के घटक का मात्रात्मक और गुणात्मक रूप से व्यापक रूप से विश्लेषण नहीं कर सकती हैं। उदाहरण के लिए, मार्टियस स्कारलेट ब्लू आधारित इन-सीटू धुंधला केवल थक्के7 के कुछ स्लाइस के लाल / सफेद रक्त कोशिकाओं का अध्ययन कर सकता है। इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (आईएचसी) आधारित इन-सीटू धुंधला केवल उनके एंटीबॉडी8 का उपयोग करके थक्के के कुछ स्लाइस के सीमित रक्त घटकों का अध्ययन कर सकता है। सूक्ष्म छवि-आधारित विधियां केवल थक्के9 की विशिष्ट संरचना से संबंधित हैं। इसके अलावा, वे सभी विधियां श्रमसाध्य और समय लेने वालीहैं। आज तक, सेरेब्रल थ्रोम्बी सेल घटकों का मात्रात्मक और गुणात्मक अध्ययन करने की प्रक्रियाओं की सूचना नहीं दी गई है। यह व्यापक रूप से स्वीकार किया जाता है कि क्रॉस-लिंक्ड फाइब्रिन रक्त कोशिकाओं को थक्कोंमें कसकर लपेटता है। नतीजतन, सेल घटकों के सटीक विश्लेषण के लिए क्रॉस-लिंक्ड फाइब्रिन का विशिष्ट क्षरण और बरकरार कोशिकाओं की रिहाई महत्वपूर्ण है।
पिछले कार्यों ने सिपुन्कुलस न्यूडस (एसएफई) से एक फाइब्रिनोलिटिक एंजाइम को अलग किया, जो फाइब्रिन को विशेष रूप से और जल्दी से12 कम कर सकता है। इसमें, एसएफई की अनूठी गतिविधि के आधार पर सेरेब्रल थ्रोम्बी के सेल घटकों का विश्लेषण करने के लिए एक विधि प्रस्तावित की गई थी। इस प्रोटोकॉल ने पहले थक्कों के फाइब्रिन को नीचा दिखाने के लिए एसएफई का उपयोग किया और फिर राइट के स्टेनिंग और नियमित रक्त परीक्षा13,14 द्वारा सेल घटकों का विश्लेषण किया। इस विधि के अनुसार, सेरेब्रल थ्रोम्बी के कोशिका घटकों का मात्रात्मक और गुणात्मक अध्ययन किया जा सकता है। यह सरल और प्रभावी प्रोटोकॉल अन्य रक्त के थक्कों के सेल घटक विश्लेषण के लिए लागू किया जा सकता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agglutination Reaction Plate</td>
			<td>ROTEST</td>
			<td>RTB-4003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Auto Hematology Analyzer</td>
			<td>SYSMEX</td>
			<td>XNB2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Vertical Pressure Steam Sterilizer&#160;</td>
			<td>SANYO</td>
			<td>MLS-3750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge Tube (1.5 mL)</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BS-15-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clean bench</td>
			<td>AIRTECH</td>
			<td>BLB-1600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant Temperature Incubator</td>
			<td>JINGHONG</td>
			<td>JHS-400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture Dish (100 mm)</td>
			<td>NEST</td>
			<td>704001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DHG Series Heating and Drying Oven&#160;</td>
			<td>SENXIN</td>
			<td>DGG-9140AD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Analytical Balance</td>
			<td>DENVER</td>
			<td>TP-213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter Membrane (0.22 &#181;m)</td>
			<td>Millex GP</td>
			<td>SLGP033NK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Refrigerated Centrifuge&#160;</td>
			<td>Cence</td>
			<td>H1650-W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>CITOGLAS</td>
			<td>01-30253-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q Reference</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>Z00QSV0CN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Saline</td>
			<td>CISEN</td>
			<td>H37022337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>ECLIPSE E100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM-996</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C0221A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Tip (1 mL )</td>
			<td>Axygene</td>
			<td>T-1000XT-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Tip (200 &#181;L)</td>
			<td>Axygene</td>
			<td>T-200XT-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettor (1 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ZY18723</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettor (200 &#181;L)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ZY20280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>MARTOR</td>
			<td>23111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small-sized Vortex Oscillator</td>
			<td>Kylin-Bell</td>
			<td>VORTEX KB3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer</td>
			<td>Hystic</td>
			<td>HKQS-180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wright Staining Solution</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C0135-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a comprehensive approach to analyze the cell components of cerebral blood clots

सेरेब्रल थ्रोम्बोसिस, सेरेब्रल धमनी या नस में रक्त का थक्का, मस्तिष्क रोधगलन का सबसे आम प्रकार है। सेरेब्रल रक्त के थक्कों के कोशिका घटकों का अध्ययन निदान, उपचार और रोग का निदान के लिए महत्वपूर्ण है। हालांकि, थक्कों के सेल घटकों का अध्ययन करने के लिए वर्तमान दृष्टिकोण मुख्य रूप से सीटू धुंधला होने पर आधारित हैं, जो सेल घटकों के व्यापक अध्ययन के लिए अनुपयुक्त है क्योंकि कोशिकाओं को थक्कों में कसकर लपेटा जाता है। पिछले अध्ययनों ने सिपुन्कुलस न्यूडस से एक फाइब्रिनोलिटिक एंजाइम (एसएफई) को सफलतापूर्वक अलग किया है, जो सेल घटकों को जारी करते हुए सीधे क्रॉस-लिंक्ड फाइब्रिन को नीचा दिखा सकता है। इस अध्ययन ने सेरेब्रल थ्रोम्बस के सेल घटकों का अध्ययन करने के लिए एसएफई पर आधारित एक व्यापक विधि स्थापित की। इस प्रोटोकॉल में थक्का घुलना, सेल रिलीजिंग, सेल धुंधला होना और नियमित रक्त परीक्षा शामिल है। इस पद्धति के अनुसार, सेल घटकों का मात्रात्मक और गुणात्मक रूप से अध्ययन किया जा सकता है। इस विधि का उपयोग करने वाले प्रयोगों के प्रतिनिधि परिणाम दिखाए गए हैं।

Cerebrovascular disease is one of three major diseases that can threaten human health, among which ischemic cerebrovascular disease accounts for more than 80%. Cerebral thrombosis and cerebral vein thrombosis are the most concerned ischemic cerebrovascular diseases today, mainly caused by cerebral blood clots1,2. If the treatment is not done properly, it will have high disability and mortality rates and a high recurrence rate after discharge3.
Recently, a growing number of studies have shown that the cell components of cerebral blood clots are tightly correlated with the diagnosis, treatment, and prognosis of cerebral thrombosis4,5,6. Therefore, the availability of data on thrombus composition, especially the cell components, is important for clinical diagnosis and treatment. Unfortunately, the currently available methods cannot comprehensively analyze the blood clot component quantitatively and qualitatively. For example, Martius Scarlett Blue based in-situ staining can only study the red/white blood cells of certain slices of the clot7. Immunohistochemistry (IHC) based in-situ staining can only study limited blood components of certain slices of the clot using their antibodies8. The microscopic image-based methods are only concerned with the specific structure of the clot9. Moreover, all those methods are laborious and time-consuming10. To date, the procedures for quantitatively and qualitatively studying cerebral thrombi cell components have not been reported. It is widely acknowledged that the cross-linked fibrin tightly wraps the blood cells in the clots11. Consequently, the specific degradation of the cross-linked fibrin and release of the intact cells is critical for the accurate analysis of cell components.
Previous works isolated a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus (sFE), which can degrade the fibrin specifically and quickly12. Herein, a method for analyzing the cell components of the cerebral thrombi based on the unique activity of sFE was proposed. This protocol utilized sFE to degrade the fibrin of clots first and then analyzed the cell components by Wright&#39;s Staining and routine blood examination13,14. According to this method, the cell components of cerebral thrombi can be quantitatively and qualitatively studied. This simple and effective protocol might be applied for the cell component analysis of other blood clots.

लेखक स्पॉटलाइट: सेरेब्रल रक्त के थक्कों के व्यापक सेल घटक विश्लेषण के लिए एक उपन्यास विधि 

सेरेब्रल रक्त के थक्कों के कोशिका घटकों का विश्लेषण करने के लिए एक व्यापक दृष्टिकोण

Our research mainly focuses on cerebral thrombosis. Many studies have shown that cerebral blood clot cell component correlate with the diagnosis, treatment, and prognosis of cerebral thrombosis. In this study, we established a novel method for the analysis of cell component of cerebral blood clots.This challenge in analyzing cell components of cerebral blood clots is the release of entire shaft from blood clots. This is because the clots leaked fibering tiry rash, the blood cells in the clots. Targeted approaches to starting the cell components of the clots are best done in C2 standing, which is unsuitable for the comprehensive starting of the cell components.On the contrary, our method enables both quantitative and qualitative enlightenings of the cerebral slope cell components. Our method utilizes fibrinolytic enzyme to delay the fibering in blood clots, releasing the intact cells. The data obtained from the analysis of the cell components will facilitate the study of the mechanisms of cerebral thrombosis at a molecular level.Our team will continue to focus on the study of fibrinolysis and coagulation system.

गिरावट प्रक्रिया के प्रारंभिक चरण में, यह पाया गया कि रक्त के थक्कों में एक लाल कॉम्पैक्ट संरचना थी, और काम करने वाला समाधान रंगहीन था। 30 मिनट के लिए इनक्यूबेशन के बाद, काम करने वाला समाधान हल्का लाल हो ग?...

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यह अध्ययन थक्के के घुलने, सेल धुंधला होने और नियमित रक्त परीक्षा के माध्यम से मस्तिष्क रक्त के थक्कों के सेल घटक विश्लेषण के लिए एक तेज और प्रभावी विधि का वर्णन करता है।

Cerebral thrombosis, a blood clot in a cerebral artery or vein, is the most common type of cerebral infarction. The study of the cell components of ...

हमारा शोध मुख्य रूप से सेरेब्रल थ्रोम्बोसिस पर केंद्रित है। कई अध्ययनों से पता चला है कि सेरेब्रल ब्लड क्लॉट सेल घटक सेरेब्रल थ्रोम्बोसिस के निदान, उपचार और पूर्वानुमान के साथ सहसंबंधित है। इस अध्ययन में, हमने मस्तिष्क रक्त के थक्कों के कोशिका घटक के विश्लेषण के लिए एक नई विधि स्थापित की।सेरेब्रल रक्त के थक्कों के कोशिका घटकों का विश्लेषण करने में यह चुनौती रक्त के थक्कों से पूरे शाफ्ट की रिहाई है। ऐसा इसलिए है क्योंकि थक्कों में रक्त कोशिकाओं में फाइबरिंग टिरी रैश, लीक हो जाता है। थक्कों के सेल घटकों को शुरू करने के लिए लक्षित दृष्टिकोण सी 2 स्टैंडिंग में सबसे अच्छा किया जाता है, जो सेल घटकों की व्यापक शुरुआत के लिए अनुपयुक्त है।इसके विपरीत, हमारी विधि सेरेब्रल स्लोप सेल घटकों के मात्रात्मक और गुणात्मक ज्ञानवर्धक दोनों को सक्षम बनाती है। हमारी विधि रक्त के थक्कों में फाइबरिंग में देरी करने के लिए फाइब्रिनोलिटिक एंजाइम का उपयोग करती है, बरकरार कोशिकाओं को जारी करती है। सेल घटकों के विश्लेषण से प्राप्त डेटा आणविक स्तर पर सेरेब्रल थ्रोम्बोसिस के तंत्र के अध्ययन की सुविधा प्रदान करेगा।हमारी टीम फाइब्रिनोलिसिस और जमावट प्रणाली के अध्ययन पर ध्यान केंद्रित करना जारी रखेगी।

a-comprehensive-approach-to-analyze-cell-components-cerebral-blood

Research

JoVE Journal

Biochemistry

A Comprehensive Approach to Analyze the Cell Components of Cerebral Blood Clots

Cerebral thrombosis, a blood clot in a cerebral artery or vein, is the most common type of cerebral infarction. The study of the cell components of cerebral blood clots is important for diagnosis, treatment, and prognosis. However, the current approaches to studying the cell components of the clots are mainly based on in situ staining, which is unsuitable for the comprehensive study of the cell components because cells are tightly wrapped in the clots. Previous studies have successfully isolated a fibrinolytic enzyme (sFE) from Sipunculus nudus, which can degrade the cross-linked fibrin directly, releasing the cell components. This study established a comprehensive method based on the sFE to study the cell components of cerebral thrombus. This protocol includes clot dissolving, cell releasing, cell staining, and routine blood examination. According to this method, the cell components could be studied quantitatively and qualitatively. The representative results of experiments using this method are shown.

This study describes a fast and effective method for the cell component analysis of cerebral blood clots through clot dissolving, cell staining, and routine blood examination.

Cerebral Thrombus Clot Dissolution and Cell Staining for Cell Component Analyses

To begin, place the collected cerebral blood clot samples on a clean dish using tweezers. Then, using a pipette, add five milliliters of physiological saline to it and gently shake the dish. Remove the saline using a pipette.Using a pair of scissors, chop the clots into small pieces. Once again, add five milliliters of physiological saline to the clots and shake the dish gently before aspirating the saline with a pipette. Then, using tweezers, transfer the pieces of clots to a new, clean U-plate.Prepare the SFE working solution by adjusting the concentration of SFE to 2, 000 units per milliliter using physiological saline. Add 300 microliters of the SFE working solution to the pretreated clots. To initiate the first round of degradation, incubate the mixture of SFE and clots at 37 degrees Celsius for half an hour.After that, gently shake to mix the SFE treated sample. And using a clean pipette, transfer the liquid portion to a sterile tube. Set aside the remaining clot for another round of degradation.Centrifuge the collected liquid at 200 G for five minutes at four degrees Celsius. Next, using a pipette, transfer the supernatant or the recovered SFE solution to another clean tube. Resuspend the resultant cell pellet in 50 microliters of physiological saline by gentle mixing.After this, perform subsequent rounds of degradation on the remaining clots using the recovered SFE solution as demonstrated previously. Gather the cell mixture from each round of degradation to prepare the blood cell sample. Add five microliters of the obtained cell sample to the poly-L-lysine-coated glass slide.And using a cover slip, smear the cells. Allow the liquid to evaporate at room temperature. To perform cell staining, gently add 100 microliters of rights dye to the cell smear.Allow the cells to stain for 30 minutes at room temperature before gently rinsing the dye off with clean water. Finally, examine the stained cells using a light microscope. Compact red blood clots with a colorless working solution were observed during the early stage of degradation.Clot dissolution was observed after a 30-minute incubation and a prolonged incubation of up to five hours dissolved most clots, while there was no significant change in the negative control group, even after a 10-hour incubation. After a right staining, mature red blood cells, platelets, and various granulocytes were clearly identifiable under a light microscope. The cell components could be quantitatively analyzed with the aid of autohematology successfully.