Name: Автор в центре внимания: новый метод комплексного анализа клеточных компонентов тромбов в головном мозге
Uploaded: 2023-07-21T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Novel Method for Comprehensive Cell Component Analysis of Cerebral Blood Clots at JoVE.com

Это исследование финансировалось Бюро науки и технологий города Сямынь (3502Z20227197) и Бюро науки и технологий провинции Фуцзянь (No 2019J01070, No 2021Y0027).

Исследование выполнено в соответствии с руководящими принципами Комитета по медицинской этике Университета Хуацяо. Тромбы головного мозга были удалены хирургическим путем и собраны в Первой больнице Цюаньчжоу, филиале Фуцзяньского медицинского университета, с информированного сог?...

Метод исследования компонентов клеток тромба головного мозга на основе фибринолитических ферментов

<ol>
	<li>Park, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Edoxaban+versus+dual+antiplatelet+therapy+for+leaflet+thrombosis+and+cerebral+thromboembolism+after+TAVR:+The+ADAPT-TAVR+Randomized+clinical+trial.">Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial.</a> Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).</li><li>Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+venous+sinus+thrombosis+incidence+is+higher+than+previously+thought:+a+retrospective+population-based+study.">Cerebral venous sinus thrombosis incidence is higher than previously thought: a retrospective population-based study.</a> Stroke. 47 (9), 2180-2182 (2016).</li><li>Sacco, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+updated+definition+of+stroke+for+the+21st+century:+a+statement+for+healthcare+professionals+from+the+American+Heart+Association/American+Stroke+Association.">An updated definition of stroke for the 21st century: a statement for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association.</a> Stroke. 44 (7), 2064-2089 (2013).</li><li>Thalin, C., Hisada, Y., Lundstrom, S., Mackman, N., Wallen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps:+villains+and+targets+in+arterial,+venous,+and+cancer-associated+thrombosis.">Neutrophil extracellular traps: villains and targets in arterial, venous, and cancer-associated thrombosis.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 39 (9), 1724-1738 (2019).</li><li>Mocsai, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+novel+functions+of+neutrophils+in+immunity,+inflammation,+and+beyond.">Diverse novel functions of neutrophils in immunity, inflammation, and beyond.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (7), 1283-1299 (2013).</li><li>Dhanesha, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PKM2+promotes+neutrophil+activation+and+cerebral+thromboinflammation:+therapeutic+implications+for+ischemic+stroke.">PKM2 promotes neutrophil activation and cerebral thromboinflammation: therapeutic implications for ischemic stroke.</a> Blood. 139 (8), 1234-1245 (2022).</li><li>Ducroux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombus+neutrophil+extracellular+traps+content+impair+tpa-induced+thrombolysis+in+acute+ischemic+stroke.">Thrombus neutrophil extracellular traps content impair tpa-induced thrombolysis in acute ischemic stroke.</a> Stroke. 49 (3), 754-757 (2018).</li><li>Solomon, C., Ranucci, M., Hochleitner, G., Schochl, H., Schlimp, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+methodology+for+calculating+platelet+contribution+to+clot+strength+(platelet+component)+in+thromboelastometry+and+thrombelastography.">Assessing the methodology for calculating platelet contribution to clot strength (platelet component) in thromboelastometry and thrombelastography.</a> Anesthesia and Analgesia. 121 (4), 868-878 (2015).</li><li>Daraei, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+fiber+diameter+and+porosity+measurements+of+plasma+clots+in+scanning+electron+microscopy+images.">Automated fiber diameter and porosity measurements of plasma clots in scanning electron microscopy images.</a> Biomolecules. 11 (10), 1536 (2021).</li><li>Abbasi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+thrombus+composition+in+thrombectomy+stroke+patients+with+longer+time+to+recanalization.">Diverse thrombus composition in thrombectomy stroke patients with longer time to recanalization.</a> Thrombosis Research. 209, 99-104 (2022).</li><li>C W Francis, a., Marder, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concepts+of+clot+lysis.">Concepts of clot lysis.</a> Annual Review of Medicine. 37 (1), 187-204 (1986).</li><li>Xu, R., Ma, G., Chen, L., Cui, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Preparation and application of natural fibrinolytic enzyme from peanut worm. , (2019).</li><li>Fotso Fotso, A., Drancourt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+Diagnosis+of+tick-borne+african+relapsing+fevers:+latest+developments.">Laboratory Diagnosis of tick-borne african relapsing fevers: latest developments.</a> Front Public Health. 3, 254 (2015).</li><li>Liou, G. Y., Byrd, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+bioliquid+markers+for+pancreatic+cancer:+What+we+have+vs.+what+we+need.">Diagnostic bioliquid markers for pancreatic cancer: What we have vs. what we need.</a> Cancers (Basel). 15 (9), 2446 (2023).</li><li>Tang, M., Lin, H., Hu, C., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Affinity+purification+of+a+fibrinolytic+enzyme+from+Sipunculus+nudus.">Affinity purification of a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus.</a> Journal of Visualized Experiments. 196, e65631 (2023).</li><li>Ge, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+antithrombotic+protease+from+marine+worm+Sipunculus+Nudus.">A Novel antithrombotic protease from marine worm Sipunculus Nudus.</a> International Journal Of Molecular Sciences. 19 (10), 3023 (2018).</li><li>Talukder, M. A., Menyuk, C. R., Kostov, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinguishing+between+whole+cells+and+cell+debris+using+surface+plasmon+coupled+emission.">Distinguishing between whole cells and cell debris using surface plasmon coupled emission.</a> Biomedical Optics Express. 9 (4), 1977-1991 (2018).</li><li>Shapiro, D. J., Hicks, L. A., Pavia, A. T., Hersh, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+prescribing+for+adults+in+ambulatory++care+in+the+USA,+2007-09.">Antibiotic prescribing for adults in ambulatory care in the USA, 2007-09.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 69 (1), 234-240 (2014).</li></ol>

sFE является фибринолитическим агентом, который может непосредственно и эффективно разрушать фибрин12,16. Здесь sFE использовали для разрушения сшитого фибрина церебральных тромбов, высвобождения заключенных клеток внутри сгустков и качественного и колич?...

Цереброваскулярная болезнь является одним из трех основных заболеваний, которые могут угрожать здоровью человека, среди которых более 80% приходится на ишемическую цереброваскулярную болезнь. Церебральный тромбоз и тромбоз церебральных вен являются наиболее распространенными ишемическими цереброваскулярными заболеваниями на сегодняшний день, в основном вызываемыми церебральными тромбами 1,2. Если лечение не проводится должным образом, оно будет иметь высокие показатели инвалидности и смертности, а также высокую частоту рецидивовпосле выписки.
В последнее время все большее число исследований показало, что клеточные компоненты церебральных тромбов тесно коррелируют с диагностикой, лечением и прогнозом церебрального тромбоза 4,5,6. Поэтому наличие данных о составе тромба, особенно клеточных компонентов, имеет важное значение для клинической диагностики и лечения. К сожалению, имеющиеся в настоящее время методы не могут всесторонне проанализировать компонент тромба количественно и качественно. Например, окрашивание на основе Martius Scarlett Blue in situ позволяет исследовать только красные/белые кровяные тельца определенных срезов сгустка7. Окрашивание in situ на основе иммуногистохимии (ИГХ) позволяет изучать только ограниченные компоненты крови определенных срезов тромба с использованием их антител8. Методы, основанные на микроскопических изображениях, касаются только специфической структуры сгустка9. Более того, все эти способы трудоемки и отнимают много времени10. На сегодняшний день о процедурах количественного и качественного исследования церебральных тромбальных клеточных компонентов не сообщается. Широко признано, что сшитый фибрин плотно обволакивает клетки крови в сгустки11. Следовательно, специфическая деградация сшитого фибрина и высвобождение интактных клеток имеет решающее значение для точного анализа клеточных компонентов.
Предыдущие работы выделили фибринолитический фермент из Sipunculus nudus (sFE), который может специфически и быстро расщеплять фибрин12. В работе предложен метод анализа клеточных компонентов церебральных тромбов, основанный на уникальной активности sFE. В этом протоколе сначала использовали sFE для разрушения фибрина сгустков, а затем анализировали клеточные компоненты с помощью окрашивания по методу Райта и рутинного анализа крови13,14. Согласно этому методу, клеточные компоненты церебральных тромбов могут быть количественно и качественно изучены. Этот простой и эффективный протокол может быть применен для анализа клеточных компонентов других тромбов.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agglutination Reaction Plate</td>
			<td>ROTEST</td>
			<td>RTB-4003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Auto Hematology Analyzer</td>
			<td>SYSMEX</td>
			<td>XNB2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Vertical Pressure Steam Sterilizer&#160;</td>
			<td>SANYO</td>
			<td>MLS-3750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge Tube (1.5 mL)</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BS-15-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clean bench</td>
			<td>AIRTECH</td>
			<td>BLB-1600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant Temperature Incubator</td>
			<td>JINGHONG</td>
			<td>JHS-400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture Dish (100 mm)</td>
			<td>NEST</td>
			<td>704001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DHG Series Heating and Drying Oven&#160;</td>
			<td>SENXIN</td>
			<td>DGG-9140AD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Analytical Balance</td>
			<td>DENVER</td>
			<td>TP-213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter Membrane (0.22 &#181;m)</td>
			<td>Millex GP</td>
			<td>SLGP033NK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Refrigerated Centrifuge&#160;</td>
			<td>Cence</td>
			<td>H1650-W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>CITOGLAS</td>
			<td>01-30253-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q Reference</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>Z00QSV0CN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Saline</td>
			<td>CISEN</td>
			<td>H37022337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>ECLIPSE E100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM-996</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C0221A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Tip (1 mL )</td>
			<td>Axygene</td>
			<td>T-1000XT-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Tip (200 &#181;L)</td>
			<td>Axygene</td>
			<td>T-200XT-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettor (1 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ZY18723</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettor (200 &#181;L)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ZY20280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>MARTOR</td>
			<td>23111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small-sized Vortex Oscillator</td>
			<td>Kylin-Bell</td>
			<td>VORTEX KB3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer</td>
			<td>Hystic</td>
			<td>HKQS-180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wright Staining Solution</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C0135-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a comprehensive approach to analyze the cell components of cerebral blood clots

Церебральный тромбоз, тромб в мозговой артерии или вене, является наиболее распространенным типом инфаркта головного мозга. Исследование клеточных компонентов церебральных тромбов важно для диагностики, лечения и прогноза. Однако современные подходы к изучению клеточных компонентов сгустков в основном основаны на окрашивании in situ , которое не подходит для комплексного изучения клеточных компонентов, так как клетки плотно завернуты в сгустки. Предыдущие исследования успешно выделили фибринолитический фермент (sFE) из Sipunculus nudus, который может разрушать сшитый фибрин напрямую, высвобождая клеточные компоненты. В данном исследовании был создан комплексный метод изучения клеточных компонентов церебрального тромба на основе sFE. Этот протокол включает в себя растворение сгустка, высвобождение клеток, окрашивание клеток и рутинный анализ крови. Согласно этому методу, компоненты клетки могут быть изучены количественно и качественно. Приведены репрезентативные результаты экспериментов с использованием данного метода.

Cerebrovascular disease is one of three major diseases that can threaten human health, among which ischemic cerebrovascular disease accounts for more than 80%. Cerebral thrombosis and cerebral vein thrombosis are the most concerned ischemic cerebrovascular diseases today, mainly caused by cerebral blood clots1,2. If the treatment is not done properly, it will have high disability and mortality rates and a high recurrence rate after discharge3.
Recently, a growing number of studies have shown that the cell components of cerebral blood clots are tightly correlated with the diagnosis, treatment, and prognosis of cerebral thrombosis4,5,6. Therefore, the availability of data on thrombus composition, especially the cell components, is important for clinical diagnosis and treatment. Unfortunately, the currently available methods cannot comprehensively analyze the blood clot component quantitatively and qualitatively. For example, Martius Scarlett Blue based in-situ staining can only study the red/white blood cells of certain slices of the clot7. Immunohistochemistry (IHC) based in-situ staining can only study limited blood components of certain slices of the clot using their antibodies8. The microscopic image-based methods are only concerned with the specific structure of the clot9. Moreover, all those methods are laborious and time-consuming10. To date, the procedures for quantitatively and qualitatively studying cerebral thrombi cell components have not been reported. It is widely acknowledged that the cross-linked fibrin tightly wraps the blood cells in the clots11. Consequently, the specific degradation of the cross-linked fibrin and release of the intact cells is critical for the accurate analysis of cell components.
Previous works isolated a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus (sFE), which can degrade the fibrin specifically and quickly12. Herein, a method for analyzing the cell components of the cerebral thrombi based on the unique activity of sFE was proposed. This protocol utilized sFE to degrade the fibrin of clots first and then analyzed the cell components by Wright&#39;s Staining and routine blood examination13,14. According to this method, the cell components of cerebral thrombi can be quantitatively and qualitatively studied. This simple and effective protocol might be applied for the cell component analysis of other blood clots.

Автор в центре внимания: новый метод комплексного анализа клеточных компонентов тромбов в головном мозге 

Комплексный подход к анализу клеточных компонентов церебральных тромбов

Our research mainly focuses on cerebral thrombosis. Many studies have shown that cerebral blood clot cell component correlate with the diagnosis, treatment, and prognosis of cerebral thrombosis. In this study, we established a novel method for the analysis of cell component of cerebral blood clots.This challenge in analyzing cell components of cerebral blood clots is the release of entire shaft from blood clots. This is because the clots leaked fibering tiry rash, the blood cells in the clots. Targeted approaches to starting the cell components of the clots are best done in C2 standing, which is unsuitable for the comprehensive starting of the cell components.On the contrary, our method enables both quantitative and qualitative enlightenings of the cerebral slope cell components. Our method utilizes fibrinolytic enzyme to delay the fibering in blood clots, releasing the intact cells. The data obtained from the analysis of the cell components will facilitate the study of the mechanisms of cerebral thrombosis at a molecular level.Our team will continue to focus on the study of fibrinolysis and coagulation system.

На начальном этапе процесса деградации было установлено, что тромбы имели красную компактную структуру, а рабочий раствор был бесцветным. После инкубации в течение 30 мин рабочий раствор становился светло-красным, что указывало на то, что скрещенные клетки крови были высвобождены в раб?...

Watch this Scientific Journal Video about A Novel Method for Comprehensive Cell Component Analysis of Cerebral Blood Clots at JoVE.com

В этом исследовании описывается быстрый и эффективный метод анализа клеточных компонентов церебральных тромбов путем растворения сгустка, окрашивания клеток и рутинного исследования крови.

Cerebral thrombosis, a blood clot in a cerebral artery or vein, is the most common type of cerebral infarction. The study of the cell components of ...

Наши исследования в основном посвящены церебральному тромбозу. Многие исследования показали, что клеточный компонент церебрального тромба коррелирует с диагностикой, лечением и прогнозом церебрального тромбоза. В этом исследовании мы разработали новый метод анализа клеточного компонента церебральных тромбов.Сложность анализа клеточных компонентов церебральных тромбов заключается в высвобождении всего стержня из сгустков крови. Это происходит из-за того, что сгустки вытекают из волокон, высыпаются, клетки крови находятся в сгустках. Целенаправленные подходы к запуску клеточных компонентов сгустков лучше всего проводить в положении стоя С2, что непригодно для комплексного запуска клеточных компонентов.Напротив, наш метод позволяет проводить как количественные, так и качественные исследования клеточных компонентов церебрального склона. Наш метод использует фибринолитический фермент для задержки образования волокон в тромбах, высвобождая неповрежденные клетки. Данные, полученные в результате анализа клеточных компонентов, облегчат изучение механизмов церебрального тромбоза на молекулярном уровне.Наша команда продолжит фокусироваться на изучении фибринолиза и системы свертывания крови.

a-comprehensive-approach-to-analyze-cell-components-cerebral-blood

Research

JoVE Journal

Biochemistry

A Comprehensive Approach to Analyze the Cell Components of Cerebral Blood Clots

Cerebral thrombosis, a blood clot in a cerebral artery or vein, is the most common type of cerebral infarction. The study of the cell components of cerebral blood clots is important for diagnosis, treatment, and prognosis. However, the current approaches to studying the cell components of the clots are mainly based on in situ staining, which is unsuitable for the comprehensive study of the cell components because cells are tightly wrapped in the clots. Previous studies have successfully isolated a fibrinolytic enzyme (sFE) from Sipunculus nudus, which can degrade the cross-linked fibrin directly, releasing the cell components. This study established a comprehensive method based on the sFE to study the cell components of cerebral thrombus. This protocol includes clot dissolving, cell releasing, cell staining, and routine blood examination. According to this method, the cell components could be studied quantitatively and qualitatively. The representative results of experiments using this method are shown.

This study describes a fast and effective method for the cell component analysis of cerebral blood clots through clot dissolving, cell staining, and routine blood examination.

Cerebral Thrombus Clot Dissolution and Cell Staining for Cell Component Analyses

Растворение тромба головного мозга и окрашивание клеток для анализа клеточных компонентов  

To begin, place the collected cerebral blood clot samples on a clean dish using tweezers. Then, using a pipette, add five milliliters of physiological saline to it and gently shake the dish. Remove the saline using a pipette.Using a pair of scissors, chop the clots into small pieces. Once again, add five milliliters of physiological saline to the clots and shake the dish gently before aspirating the saline with a pipette. Then, using tweezers, transfer the pieces of clots to a new, clean U-plate.Prepare the SFE working solution by adjusting the concentration of SFE to 2, 000 units per milliliter using physiological saline. Add 300 microliters of the SFE working solution to the pretreated clots. To initiate the first round of degradation, incubate the mixture of SFE and clots at 37 degrees Celsius for half an hour.After that, gently shake to mix the SFE treated sample. And using a clean pipette, transfer the liquid portion to a sterile tube. Set aside the remaining clot for another round of degradation.Centrifuge the collected liquid at 200 G for five minutes at four degrees Celsius. Next, using a pipette, transfer the supernatant or the recovered SFE solution to another clean tube. Resuspend the resultant cell pellet in 50 microliters of physiological saline by gentle mixing.After this, perform subsequent rounds of degradation on the remaining clots using the recovered SFE solution as demonstrated previously. Gather the cell mixture from each round of degradation to prepare the blood cell sample. Add five microliters of the obtained cell sample to the poly-L-lysine-coated glass slide.And using a cover slip, smear the cells. Allow the liquid to evaporate at room temperature. To perform cell staining, gently add 100 microliters of rights dye to the cell smear.Allow the cells to stain for 30 minutes at room temperature before gently rinsing the dye off with clean water. Finally, examine the stained cells using a light microscope. Compact red blood clots with a colorless working solution were observed during the early stage of degradation.Clot dissolution was observed after a 30-minute incubation and a prolonged incubation of up to five hours dissolved most clots, while there was no significant change in the negative control group, even after a 10-hour incubation. After a right staining, mature red blood cells, platelets, and various granulocytes were clearly identifiable under a light microscope. The cell components could be quantitatively analyzed with the aid of autohematology successfully.