Name: लेखक स्पॉटलाइट: मोतियाबिंद के रहस्यों को अनलॉक करना - लेंस उपकला कोशिकाओं में रेडॉक्स मरम्मत एंजाइमों की जांच करना
Uploaded: 2024-06-21T12:30:00
Description: Lens epithelial cells (LECs) play multiple important roles in maintaining the homeostasis and normal function of the lens. LECs determine lens growth, ...

इस काम को एनईआई R21EY033941 (होंगली वू को) द्वारा समर्थित किया गया था; रक्षा विभाग W81XWH2010896 (होंगली वू को); R15GM123463-02 (कायला ग्रीन और होंगली वू को)

सभी पशु प्रयोगों नेत्र और दृष्टि अनुसंधान में जानवरों के उपयोग के लिए विजन और नेत्र विज्ञान दिशा निर्देशों में अनुसंधान के लिए एसोसिएशन के अनुसार प्रदर्शन किया गया. यूनिवर्सिटी ऑफ नॉर्थ टेक्सास हेल्...

लेंस उपकला कोशिकाओं की खेती और लक्षण वर्णन

<ol>
	<li>Bermbach, G., Mayer, U., Naumann, G. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lens+epithelial+cells+in+tissue+culture.">Human lens epithelial cells in tissue culture.</a> Experimental Eye Research. 52 (2), 113-119 (1991).</li><li>Reddy, V. N., Lin, L. R., Arita, T., Zigler, J. S., Huang, Q. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystallins+and+their+synthesis+in+human+lens+epithelial+cells+in+tissue+culture.">Crystallins and their synthesis in human lens epithelial cells in tissue culture.</a> Experimental Eye Research. 47 (3), 465-478 (1988).</li><li>Lee, C. M., Afshari, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+state+of+cataract+blindness.">The global state of cataract blindness.</a> Current Opinion in Ophthalmology. 28 (1), 98-103 (2017).</li><li>Khairallah, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Number+of+people+blind+or+visually+impaired+by+cataract+worldwide+and+in+world+regions,+1990+to+2010.">Number of people blind or visually impaired by cataract worldwide and in world regions, 1990 to 2010.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 56 (11), 6762-6769 (2015).</li><li>Beebe, D. C., Holekamp, N. M., Shui, Y. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+damage+and+the+prevention+of+age-related+cataracts.">Oxidative damage and the prevention of age-related cataracts.</a> Ophthalmic Research. 44 (3), 155-165 (2010).</li><li>Lou, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Redox+regulation+in+the+lens.">Redox regulation in the lens.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 22 (5), 657-682 (2003).</li><li>Charakidas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lens+epithelial+apoptosis+and+cell+proliferation+in+human+age-related+cortical+cataract.">Lens epithelial apoptosis and cell proliferation in human age-related cortical cataract.</a> European Journal of Ophthalmology. 15 (2), 213-220 (2005).</li><li>Lou, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutathione+and+glutaredoxin+in+redox+regulation+and+cell+signaling+of+the+lens.">Glutathione and glutaredoxin in redox regulation and cell signaling of the lens.</a> Antioxidants (Basel). 11 (10), 1973 (2022).</li><li>Wilhelm, J., Smistik, Z., Mahelkova, G., Vytasek, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Redox+regulation+of+proliferation+of+lens+epithelial+cells+in+culture.">Redox regulation of proliferation of lens epithelial cells in culture.</a> Cell Biochemistry &amp; Function. 25 (3), 317-321 (2007).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+progress+concerning+a+novel+intraocular+lens+for+the+prevention+of+posterior+capsular+opacification.">Research progress concerning a novel intraocular lens for the prevention of posterior capsular opacification.</a> Pharmaceutics. 14 (7), 1343 (2022).</li><li>Konopinska, J., Mlynarczyk, M., Dmuchowska, D. A., Obuchowska, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Posterior+capsule+opacification:+A+review+of+experimental+studies.">Posterior capsule opacification: A review of experimental studies.</a> Journal of Clinical Medicine. 10 (13), 2847 (2021).</li><li>Pandey, S. K., Apple, D. J., Werner, L., Maloof, A. J., Milverton, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Posterior+capsule+opacification:+A+review+of+the+aetiopathogenesis,+experimental+and+clinical+studies+and+factors+for+prevention.">Posterior capsule opacification: A review of the aetiopathogenesis, experimental and clinical studies and factors for prevention.</a> Indian Journal of Ophthalmology. 52 (2), 99-112 (2004).</li><li>Wei, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aged+lens+epithelial+cells+suppress+proliferation+and+epithelial-mesenchymal+transition-relevance+for+posterior+capsule+opacification.">Aged lens epithelial cells suppress proliferation and epithelial-mesenchymal transition-relevance for posterior capsule opacification.</a> Cells. 11 (13), 2001 (2022).</li><li>Creighton, M. O., Mousa, G. Y., Miller, G. G., Blair, D. G., Trevithick, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+rat+lens+epithelial+cells+in+tissue+culture--iv.+Some+characteristics+of+the+process,+including+possible+in+vitro+models+for+pathogenic+processes+in+cataractogenesis.">Differentiation of rat lens epithelial cells in tissue culture--iv. Some characteristics of the process, including possible in vitro models for pathogenic processes in cataractogenesis.</a> Vision Research. 21 (1), 25-35 (1981).</li><li>Creighton, M. O., Mousa, G. Y., Trevithick, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+rat+lens+epithelial+cells+in+tissue+culture.+(i)+effects+of+cell+density,+medium+and+embryonic+age+of+initial+culture.">Differentiation of rat lens epithelial cells in tissue culture. (i) effects of cell density, medium and embryonic age of initial culture.</a> Differentiation. 6 (3), 155-167 (1976).</li><li>Ibaraki, N., Ohara, K., Shimizu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Explant+culture+of+human+lens+epithelial+cells+from+senile+cataract+patients.">Explant culture of human lens epithelial cells from senile cataract patients.</a> Japanese Journal of Ophthalmology. 37 (3), 310-317 (1993).</li><li>Sundelin, K., Petersen, A., Soltanpour, Y., Zetterberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+growth+of+lens+epithelial+cells+from+cataract+patients+-+association+with+possible+risk+factors+for+posterior+capsule+opacification.">In vitro growth of lens epithelial cells from cataract patients - association with possible risk factors for posterior capsule opacification.</a> The Open Ophthalmology Journal. 8, 19-23 (2014).</li><li>Parreno, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodologies+to+unlock+the+molecular+expression+and+cellular+structure+of+ocular+lens+epithelial+cells.">Methodologies to unlock the molecular expression and cellular structure of ocular lens epithelial cells.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 10, 983178 (2022).</li><li>Andjelic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+and+proliferative+studies+on+ex+vivo+cultured+human+anterior+lens+epithelial+cells+-+relevance+to+capsular+opacification.">Morphological and proliferative studies on ex vivo cultured human anterior lens epithelial cells - relevance to capsular opacification.</a> Acta Ophthalmologica. 93 (6), e499-e506 (2015).</li><li>Andjelic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+establishing+adherent+ex+vivo+explant+cultures+from+human+eye+pathologies+for+use+in+subsequent+calcium+imaging+and+inflammatory+studies.">A simple method for establishing adherent ex vivo explant cultures from human eye pathologies for use in subsequent calcium imaging and inflammatory studies.</a> Journal of Immunology Research. 2014, 232659 (2014).</li><li>Andley, U. P., Rhim, J. S., Chylack, L. T., Fleming, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propagation+and+immortalization+of+human+lens+epithelial+cells+in+culture.">Propagation and immortalization of human lens epithelial cells in culture.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 35 (7), 3094-3102 (1994).</li><li>Zhou, M., Leiberman, J., Xu, J., Lavker, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+hierarchy+of+proliferative+cells+exists+in+mouse+lens+epithelium:+Implications+for+lens+maintenance.">A hierarchy of proliferative cells exists in mouse lens epithelium: Implications for lens maintenance.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 47 (7), 2997-3003 (2006).</li><li>Wolffe, A. P., Glover, J. F., Tata, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+shock.+Synthesis+of+heat-shock-like+proteins+in+fresh+primary+cell+cultures.">Culture shock. Synthesis of heat-shock-like proteins in fresh primary cell cultures.</a> Experimental Cell Research. 154 (2), 581-590 (1984).</li><li>Haykin, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioimage+analysis+of+cell+physiology+of+primary+lens+epithelial+cells+from+diabetic+and+non-diabetic+cataract+patients.">Bioimage analysis of cell physiology of primary lens epithelial cells from diabetic and non-diabetic cataract patients.</a> Biotechnology &amp; Biotechnological Equipment. 35 (1), 170-178 (2021).</li><li>Menko, A. S., Klukas, K. A., Johnson, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chicken+embryo+lens+cultures+mimic+differentiation+in+the+lens.">Chicken embryo lens cultures mimic differentiation in the lens.</a> Developmental Biology. 103 (1), 129-141 (1984).</li><li>Zelenka, P. S., Gao, C. Y., Saravanamuthu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+culture+of+rat+lens+epithelial+explants+for+studying+terminal+differentiation.">Preparation and culture of rat lens epithelial explants for studying terminal differentiation.</a> Journal of Visualized Experiments. (31), 1591 (2009).</li></ol>

इस पत्र में प्रस्तुत प्रोटोकॉल प्राथमिक एलईसी के सफल अलगाव, संस्कृति और उपसंस्कृति के लिए एक व्यापक, चरण-दर-चरण मार्गदर्शिका प्रदान करता है, जो वीडियो प्रलेखन के साथ पूरा होता है। लिखित निर्देशों के स?...

आंख का लेंस रेटिना पर आने वाली रोशनी को केंद्रित करके दृष्टि में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। इसमें विशेष कोशिकाओं से बना एक पारदर्शी, अवशिष्ट संरचना होती है, जिनमें से लेंस उपकला कोशिकाएं (एलईसी) प्रमुख खिलाड़ी होती हैं। एलईसी लेंस के पूर्वकाल सतह पर स्थित हैं और इसकी पारदर्शिता बनाए रखने, पानी के संतुलन को विनियमित करने, और लेंस विकास औरविकास 1,2 में भाग लेने के लिए जिम्मेदार हैं. एलईसी लेंस के पूर्वकाल भाग में स्थित एक अद्वितीय प्रकार की कोशिकाएं हैं, जो जीवन भर लेंस फाइबर का लगातार उत्पादन करके लेंस स्पष्टता और कार्य को बनाए रखने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती हैं।
मोतियाबिंद लेंस के प्रगतिशील बादल की विशेषता है, विरूपण और प्रकाश के प्रकीर्णन में जिसके परिणामस्वरूप, समझौता दृष्टि 3,4 के लिए अग्रणी. मोतियाबिंद गठन अंतर्निहित सटीक तंत्र जटिल और बहुक्रियाशील हैं, जिसमें यूवी विकिरण, ऑक्सीडेटिव क्षति और ग्लाइकेशन 5,6जैसे विभिन्न सेलुलर और आणविक प्रक्रियाएं शामिल हैं। एलईसी मोतियाबिंद के विकास में महत्वपूर्ण योगदान करने के लिए पाया गया है, जिससे उन्हेंअनुसंधान 1,2,7,8,9का एक महत्वपूर्ण केंद्र बना दिया गया है।
इसके अलावा, नेत्र विज्ञान में सबसे अधिक दबाव वाले मुद्दों में से एक आज पोस्टीरियर कैप्सूल ओपेसिफिकेशन (पीसीओ) की अपेक्षाकृत उच्च घटना है, जिसे माध्यमिक मोतियाबिंद भी कहा जाता है। पीसीओ मोतियाबिंद सर्जरी के बाद सबसे आम जटिलता बनी हुई है, जो 20-40% वयस्क रोगियों और 100% बच्चों को 5 साल के भीतर सर्जरी के बादप्रभावित करती है। पीसीओ मुख्य रूप से अवशिष्ट एलईसी के कारण होता है जो मोतियाबिंद निष्कर्षण के बाद कैप्सुलर बैग में रहते हैं। इन कोशिकाओं को एक बहुआयामी पैथोफिजियोलॉजिकल परिवर्तन से गुजरना पड़ता है जिसमें न केवल उपकला-से-मेसेनकाइमल संक्रमण (ईएमटी) बल्कि लेंस फाइबर के लिए एलईसी का भेदभाव भी होता है, जिसके परिणामस्वरूप सेल आबादी होती है जो एलईसी, फाइबर और मायोफिब्रोब्लास्ट्स 11,12,13का मिश्रण होती है। रूपांतरित कोशिकाएं पीछे के लेंस कैप्सूल में फैलती हैं और पलायन करती हैं, जिससे दृश्य हानि होती है। संस्कृति मॉडल में एलईसी के व्यवहार और नियंत्रण तंत्र को समझना पीसीओ की रोकथाम और प्रबंधन में मूल्यवान अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकता है। इसलिए, एलईसी संवर्धन का यह प्रोटोकॉल नेत्र शोधकर्ताओं के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण प्रस्तुत करता है जिसका उद्देश्य इस प्रचलित पश्चात जटिलता का अध्ययन, समझना और अंततः मुकाबला करना है।
एलईसी जीव विज्ञान की पेचीदगियों और मोतियाबिंद गठन और पीसीओ में इसकी भूमिका को जानने के लिए, इन विट्रो प्राथमिक सेल संस्कृति प्रणालियों में मजबूत और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य स्थापित करना आवश्यक है। प्राथमिक एलईसी संस्कृति शोधकर्ताओं को एलईसी के कार्यों, सिग्नलिंग और आणविक विशेषताओं का अध्ययन करने के लिए एक नियंत्रित वातावरण प्रदान करती है। इसके अलावा, यह सेलुलर प्रक्रियाओं की जांच और विभिन्न प्रयोगात्मक स्थितियों के प्रभावों की अनुमति देता है, लेंस शरीर विज्ञान और विकृति विज्ञान में मूल्यवान अंतर्दृष्टि प्रदान करता है।
पूर्व अनुसंधान ने एलईसी संस्कृति तकनीकों 14,15,16,17,18,19,20की हमारी समझ को समृद्ध किया है। यद्यपि इन अध्ययनों ने विभिन्न पद्धतियों को नियोजित किया है और एलईसी व्यवहार और विशेषताओं पर महत्वपूर्ण निष्कर्ष निकाले हैं, एलईसी संवर्धन के लिए एक व्यापक और सुलभ वीडियो रिकॉर्डिंग प्रोटोकॉल वर्तमान साहित्य में अनुपस्थित है। यह सीमा नौसिखिए शोधकर्ताओं की तकनीकों को सटीक रूप से पुन: पेश करने की क्षमता में बाधा डाल सकती है और प्रयोगात्मक परिणामों में विसंगतियों और विविधताओं को जन्म दे सकती है। एक वीडियो रिकॉर्डिंग प्रोटोकॉल प्रदान करके, इस शोध पत्र का उद्देश्य इस अंतर को पाटना और एक मानकीकृत संसाधन प्रदान करना है जो प्रजनन क्षमता को बढ़ा सकता है और एलईसी संस्कृति के क्षेत्र में ज्ञान हस्तांतरण की सुविधा प्रदान कर सकता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.05% Trypsin-EDTA</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>#25300054</td>
			<td>For LECs dissociation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Secondary Antibody&#160;</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>#715-545-150</td>
			<td>For cell validation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>111-605-003</td>
			<td>For cell validation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibody dilution buffer</td>
			<td>Licor</td>
			<td>#927-60001</td>
			<td>For cell validation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beaver safety knife</td>
			<td>Beaver-Visitec International</td>
			<td>#3782235</td>
			<td>For lens dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blocking buffer</td>
			<td>Licor</td>
			<td>#927-60001</td>
			<td>For cell validation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capsulorhexis forceps</td>
			<td>Titan Medical Instruments</td>
			<td>TMF-124</td>
			<td>For lens capsule isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D6429</td>
			<td>For LECs culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>#D2650</td>
			<td>For making freezing medium&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>#J67802</td>
			<td>For lens dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont tweezers</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-4976</td>
			<td>For lens capsule isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EpiCGS-a (optional)</td>
			<td>ScienCell</td>
			<td>4182</td>
			<td>For LECs culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F2442</td>
			<td>For LECs culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin (50&#160;mg/mL)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G1397</td>
			<td>For LECs culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342 solution</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>#62249</td>
			<td>For cell validation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument&#160;</td>
			<td>RS-5983</td>
			<td>For lens dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting tweezers</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument&#160;</td>
			<td>RS5137&#160;</td>
			<td>For lens dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PROX1 antibody</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>11067-2-AP</td>
			<td>For cell validation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas micro-dissecting spring scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-5608</td>
			<td>For lens capsule isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;A-crystallin antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-28306</td>
			<td>For cell validation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#947;-crystallin antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-365256</td>
			<td>For cell validation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

optimizing mouse primary lens epithelial cell culture: a comprehensive guide to trypsinization

लेंस उपकला कोशिकाएं (एलईसी) होमियोस्टैसिस और लेंस के सामान्य कार्य को बनाए रखने में कई महत्वपूर्ण भूमिका निभाती हैं। एलईसी लेंस वृद्धि, विकास, आकार और पारदर्शिता निर्धारित करते हैं। इसके विपरीत, बेकार एलईसी मोतियाबिंद गठन और पीछे कैप्सूल अपारदर्शिता (पीसीओ) का कारण बन सकता है। नतीजतन, लेंस विकास, जैव रसायन, मोतियाबिंद चिकित्सा विज्ञान और पीसीओ की रोकथाम में लगे शोधकर्ताओं के लिए एक मजबूत प्राथमिक एलईसी संस्कृति प्रणाली स्थापित करना महत्वपूर्ण है। हालांकि, प्राथमिक एलईसी की खेती ने उनकी सीमित उपलब्धता, धीमी प्रसार दर और नाजुक प्रकृति के कारण लंबे समय से चुनौतियां पेश की हैं। 
यह अध्ययन प्राथमिक एलईसी संस्कृति के लिए एक व्यापक प्रोटोकॉल पेश करके इन बाधाओं को संबोधित करता है। प्रोटोकॉल में आवश्यक कदम शामिल हैं जैसे कि एक अनुकूलित संस्कृति माध्यम का निर्माण, लेंस कैप्सूल का सटीक अलगाव, ट्रिप्सिनाइजेशन तकनीक, उपसंस्कृति प्रक्रियाएं, फसल प्रोटोकॉल और भंडारण और शिपमेंट के लिए दिशानिर्देश। संस्कृति प्रक्रिया के दौरान, सेल आकृति विज्ञान चरण विपरीत माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर निगरानी की गई थी. 
सुसंस्कृत एलईसी की प्रामाणिकता की पुष्टि करने के लिए, महत्वपूर्ण लेंस प्रोटीन, अर्थात् αA- और γ-क्रिस्टलीय की उपस्थिति और उपकोशिकीय वितरण का पता लगाने के लिए इम्यूनोफ्लोरेसेंस परख आयोजित किए गए थे। यह विस्तृत प्रोटोकॉल शोधकर्ताओं को प्राथमिक एलईसी की खेती और विशेषता के लिए एक मूल्यवान संसाधन से लैस करता है, लेंस जीव विज्ञान की हमारी समझ में प्रगति और लेंस से संबंधित विकारों के लिए चिकित्सीय रणनीतियों के विकास को सक्षम करता है।

The lens of the eye plays a crucial role in vision by focusing incoming light onto the retina. It consists of a transparent, avascular structure composed of specialized cells, among which lens epithelial cells (LECs) are key players. LECs are located at the anterior surface of the lens and are responsible for maintaining its transparency, regulating water balance, and participating in lens growth and development1,2. LECs are a unique type of cells located at the anterior part of the lens, playing a critical role in maintaining lens clarity and function by continuously producing lens fibers throughout life.
Cataracts are characterized by the progressive clouding of the lens, resulting in the distortion and scattering of light, leading to compromised vision3,4. The precise mechanisms underlying cataract formation are complex and multifactorial, involving various cellular and molecular processes such as UV radiation, oxidative damage, and glycation5,6. LECs have been found to contribute significantly to the development of cataracts, making them a vital focus of research1,2,7,8,9.
Furthermore, one of the most pressing issues in ophthalmology today is the relatively high incidence of posterior capsule opacification (PCO), also known as secondary cataract. PCO remains the most common complication after cataract surgery, affecting up to 20-40% of adult patients and 100% of children within 5 years post surgery10. PCO is primarily caused by the residual LECs that remain in the capsular bag following cataract extraction. These cells undergo a multifaceted pathophysiological transformation involving not only epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) but also the differentiation of LECs to lens fibers, resulting in a cell population that is a mixture of LECs, fibers, and myofibroblasts11,12,13. The transformed cells proliferate and migrate across the posterior lens capsule, leading to visual impairment. Understanding the behavior and control mechanisms of LECs in culture models can provide valuable insights into the prevention and management of PCO. Therefore, this protocol of culturing LECs presents a vital tool for ophthalmic researchers aiming to study, understand, and ultimately combat this prevalent postoperative complication.
To unravel the intricacies of LEC biology and its role in cataract formation and PCO, it is essential to establish robust and reproducible in vitro primary cell culture systems. Primary LEC culture provides researchers with a controlled environment to study the functions, signaling, and molecular characteristics of LECs. Furthermore, it allows for the investigation of cellular processes and the effects of different experimental conditions, providing valuable insights into lens physiology and pathology.
Prior research has enriched our understanding of LEC culture techniques14,15,16,17,18,19,20. Although these studies have employed various methodologies and yielded significant findings on LEC behavior and characteristics, a comprehensive and accessible video recording protocol for culturing LECs is absent in the current literature. This limitation can hinder novice researchers&#39; ability to accurately reproduce the techniques and can lead to inconsistencies and variations in experimental results. By providing a video recording protocol, this research paper aims to bridge this gap and provide a standardized resource that can enhance reproducibility and facilitate knowledge transfer in the field of LEC culture.

लेखक स्पॉटलाइट: मोतियाबिंद के रहस्यों को अनलॉक करना - लेंस उपकला कोशिकाओं में रेडॉक्स मरम्मत एंजाइमों की जांच करना

माउस प्राथमिक लेंस उपकला सेल संस्कृति का अनुकूलन: Trypsinization के लिए एक व्यापक गाइड

Our research objective is to explore the underlying causes of cataracts with a particular emphasis on the function of redox repair enzymes. Our aim is to identify the critical role this enzyme play in lens protection, and to establish their potential as drug targets for cataract prevention and treatment. Among many exciting technologies, our research uses lens epithelial cells as a foundational platform.This approach is critical for unraveling the mechanism behind cataract formation, posterior capsule opacification, and the discovery of new anti-cataract drugs. Moving forward, we will focus on understanding the impact of antioxidant enzymes and aging on lens functionality. Our goal is to discover innovative antioxidant treatments that can delay lens aging, prevent cataracts, and provide effective intervention for PCO.

जैसा कि चित्र 2 में दिखाया गया है, इस प्रोटोकॉल का पालन करके, C57BL/6J चूहों से प्राथमिक LECs ने 4 घंटे की अवधि के भीतर व्यंजनों का पालन किया। विशेष रूप से, अन्य ऊतकों के दृश्य अवशेष थे जैसे कि पीछे के कै?...

यह पांडुलिपि प्राथमिक लेंस उपकला कोशिकाओं (एलईसी) के संवर्धन के लिए एक विस्तृत वीडियो प्रोटोकॉल की रूपरेखा तैयार करती है, जिसका उद्देश्य मोतियाबिंद और पीछे कैप्सूल ओपेसिफिकेशन (पीसीओ) में प्रजनन क्षमता और सहायता अनुसंधान में सुधार करना है। यह लेंस विच्छेदन, एलईसी अलगाव और सत्यापन पर चरण-दर-चरण निर्देश प्रदान करता है, विशेष रूप से क्षेत्र में नए लोगों के लिए एक मूल्यवान मार्गदर्शक के रूप में कार्य करता है।

Lens epithelial cells (LECs) play multiple important roles in maintaining the homeostasis and normal function of the lens. LECs determine lens growth, ...

हमारा शोध उद्देश्य रेडॉक्स मरम्मत एंजाइमों के कार्य पर विशेष जोर देने के साथ मोतियाबिंद के अंतर्निहित कारणों का पता लगाना है। हमारा उद्देश्य लेंस संरक्षण में इस एंजाइम की महत्वपूर्ण भूमिका की पहचान करना है, और मोतियाबिंद की रोकथाम और उपचार के लिए दवा लक्ष्य के रूप में उनकी क्षमता स्थापित करना है। कई रोमांचक प्रौद्योगिकियों के बीच, हमारा शोध एक मूलभूत मंच के रूप में लेंस उपकला कोशिकाओं का उपयोग करता है।यह दृष्टिकोण मोतियाबिंद गठन, पश्च कैप्सूल अपारदर्शिता और नई एंटी-मोतियाबिंद दवाओं की खोज के पीछे तंत्र को उजागर करने के लिए महत्वपूर्ण है। आगे बढ़ते हुए, हम लेंस की कार्यक्षमता पर एंटीऑक्सिडेंट एंजाइमों और उम्र बढ़ने के प्रभाव को समझने पर ध्यान केंद्रित करेंगे। हमारा लक्ष्य अभिनव एंटीऑक्सिडेंट उपचारों की खोज करना है जो लेंस उम्र बढ़ने में देरी कर सकते हैं, मोतियाबिंद को रोक सकते हैं और पीसीओ के लिए प्रभावी हस्तक्षेप प्रदान कर सकते हैं।

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Research

JoVE Journal

Biology

Optimizing Mouse Primary Lens Epithelial Cell Culture: A Comprehensive Guide to Trypsinization

Lens epithelial cells (LECs) play multiple important roles in maintaining the homeostasis and normal function of the lens. LECs determine lens growth, development, size, and transparency. Conversely, dysfunctional LECs can lead to cataract formation and posterior capsule opacification (PCO). Consequently, establishing a robust primary LEC culture system is important to researchers engaged in lens development, biochemistry, cataract therapeutics, and PCO prevention. However, cultivating primary LECs has long presented challenges due to their limited availability, slow proliferation rate, and delicate nature. 
This study addresses these hurdles by presenting a comprehensive protocol for primary LEC culture. The protocol encompasses essential steps such as the formulation of an optimized culture medium, precise isolation of lens capsules, trypsinization techniques, subculture procedures, harvest protocols, and guidelines for storage and shipment. Throughout the culture process, cell morphology was monitored using phase-contrast microscopy. 
To confirm the authenticity of the cultured LECs, immunofluorescence assays were conducted to detect the presence and subcellular distribution of critical lens proteins, namely &#945;A- and &#947;-crystallins. This detailed protocol equips researchers with a valuable resource for cultivating and characterizing primary LECs, enabling advancements in our comprehension of lens biology and the development of therapeutic strategies for lens-related disorders.

This manuscript outlines a detailed video protocol for culturing primary lens epithelial cells (LECs), aiming to improve reproducibility and aid research in cataracts and posterior capsule opacification (PCO). It offers step-by-step instructions on lens dissection, LECs isolation, and validation, serving as a valuable guide, especially for newcomers in the field.