Name: Auteur in de schijnwerpers: onderzoek naar tandpulp verbeteren met verbeterde muismodellen
Uploaded: 2023-10-27T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishment of a Murine Pulp Exposure Model with a Novel Mouth-Gag for Pulpitis Research at JoVE.com

Deze studie werd gefinancierd door subsidies van de National Natural Science Foundation of China U21A20368 (L. Y.), 82101000 (H. W.) en 82100982 (F. L.), en door Sichuan Science and Technology Program 2023NSFSC1499 (H. W.). Alle originele gegevens en afbeeldingen zijn opgenomen in dit document.

De experimentele procedures in deze studie werden goedgekeurd door de ethische commissie van de West China School of Stomatology, Sichuan University (WCHSIRB-D-2021-125). Volwassen C57BL/6 muizen werden verkregen van Gempharmatech Experimental Animals Company, Chengdu, China. De hele kroon van de maxillaire eerste kies barst 21 dagen na de geboorte uit. Muizen voor een operatie moeten ouder zijn dan 21 dagen met een normale vitaliteit11. Hier werden muizen van 6 tot 8 weken oud gebruikt voor model...

Het creëren van een pulpa-ontsteking muismodel met behulp van een nieuwe mondknevel 

<ol>
	<li>Kleinert, A., Kleinert, L., Ozimirska, M., Cha&#322;as, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endodontium+-+together+or+separately.">Endodontium - together or separately.</a> Folia Morphol. 77 (3), 409-415 (2018).</li><li>Dhillon, H., Kaushik, M., Sharma, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+endodontics-Creating+new+horizons.">Regenerative endodontics-Creating new horizons.</a> J Biomed Mater Res B Appl Biomater. 104 (4), 676-685 (2016).</li><li>Prati, C., Pirani, C., Zamparini, F., Gatto, M. R., Gandolfi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+20-year+historical+prospective+cohort+study+of+root+canal+treatments.+A+Multilevel+analysis.">A 20-year historical prospective cohort study of root canal treatments. A Multilevel analysis.</a> Int Endod J. 51 (9), 955-968 (2018).</li><li>Su, Y., Wang, C., Ye, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Healing+rate+and+post-obturation+pain+of+single-+versus+multiple-visit+endodontic+treatment+for+infected+root+canals:+a+systematic+review.">Healing rate and post-obturation pain of single- versus multiple-visit endodontic treatment for infected root canals: a systematic review.</a> J Endod. 37 (2), 125-132 (2011).</li><li>Murray, P. E., Garcia-Godoy, F., Hargreaves, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+endodontics:+a+review+of+current+status+and+a+call+for+action.">Regenerative endodontics: a review of current status and a call for action.</a> J Endod. 33 (4), 377-390 (2007).</li><li>Arora, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+application+of+immunotherapy+for+modulation+of+pulp+inflammation:+opportunities+for+vital+pulp+treatment.">Potential application of immunotherapy for modulation of pulp inflammation: opportunities for vital pulp treatment.</a> Int Endod J. 54 (8), 1263-1274 (2021).</li><li>Eramo, S., Natali, A., Pinna, R., Milia, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+regeneration+via+cell+homing.">Dental pulp regeneration via cell homing.</a> Int Endod J. 51 (4), 405-419 (2018).</li><li>Hasan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+Toll-like+receptor+2,+Dectin-1,+and+Osteopontin+in+murine+model+of+pulpitis.">Expression of Toll-like receptor 2, Dectin-1, and Osteopontin in murine model of pulpitis.</a> Clin Oral Investig. 27 (3), 1177-1192 (2023).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DDIT3+aggravates+pulpitis+by+modulating+M1+polarization+through+EGR1+in+macrophages.">DDIT3 aggravates pulpitis by modulating M1 polarization through EGR1 in macrophages.</a> Int Immunopharmacol. 120, 110328 (2023).</li><li>Richert, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+analysis+of+research+methods+and+experimental+models+to+study+pulpitis.">A critical analysis of research methods and experimental models to study pulpitis.</a> Int Endod J. 55 (Suppl 1), 14-36 (2022).</li><li>Huang, X. F., Zhao, Y. B., Zhang, F. M., Han, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+of+gene+expression+during+tooth+eruption+and+orthodontic+tooth+movement+in+mice.">Comparative study of gene expression during tooth eruption and orthodontic tooth movement in mice.</a> Oral Dis. 15 (8), 573-579 (2009).</li><li>Kwon, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+irritation+of+teeth+during+dental+treatment+procedures.">Thermal irritation of teeth during dental treatment procedures.</a> Restor Dent Endod. 38 (3), 105-112 (2013).</li><li>He, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulpal+tissue+inflammatory+reactions+after+experimental+pulpal+exposure+in+mice.">Pulpal tissue inflammatory reactions after experimental pulpal exposure in mice.</a> J Endod. 43 (1), 90-95 (2017).</li><li>Karrar, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+biomarkers+for+objective+assessment+of+symptomatic+pulpitis:+A+systematic+review+and+meta-analysis.">Molecular biomarkers for objective assessment of symptomatic pulpitis: A systematic review and meta-analysis.</a> Int Endod J. 56 (10), 1160-1177 (2023).</li><li>Goldman, E., Reich, E., Abramovitz, I., Klutstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducing+apical+periodontitis+in+mice.">Inducing apical periodontitis in mice.</a> J Vis Exp. (150), e59521 (2019).</li><li>Duncan, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Present+status+and+future+directions-Vital+pulp+treatment+and+pulp+preservation+strategies.">Present status and future directions-Vital pulp treatment and pulp preservation strategies.</a> Int Endod J. 55 (Suppl 3), 497-511 (2022).</li><li>Shi, X., Li, Z., He, Y., Jiang, Q., Yang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+different+dental+burs+for+experimental+induction+of+pulpitis+in+mice.">Effect of different dental burs for experimental induction of pulpitis in mice.</a> Arch Oral Biol. 83, 252-257 (2017).</li><li>Du, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indigenous+microbiota+protects+development+of+medication-related+osteonecrosis+induced+by+periapical+disease+in+mice.">Indigenous microbiota protects development of medication-related osteonecrosis induced by periapical disease in mice.</a> Int J Oral Sci. 14 (1), 16 (2022).</li></ol>

Als het solitaire zachte weefsel in de tanden vervult tandpulpa een cruciale rol bij het handhaven van de bioactiviteit van de tand, maar blijft het zeer gevoelig. Het behoud van deze vitale pulpa is de eerste benadering geworden die de voorkeur geniet bij recente endodontische behandelingen, waardoor een uitgebreid begrip van de ontstekingsmechanismen van tandpulpa nodig is. De spatiotemporele fluctuatie van de inflammatoire micro-omgeving en interacties tussen residente celtypen bij pulpitis bem...

De tandpulpa, een integraal onderdeel van de tand, is verantwoordelijk voor meerdere essentiële functies, zoals de toevoer van voedingsstoffen, dentinevorming, sensorische functie enafweerreacties. Desalniettemin is de tandpulpa, omgeven door hard weefsel, vatbaar voor verwondingen en schade door diepe cariës, pulpitis, trauma of daaropvolgende therapieën 2,3. De afwezigheid van functionele tandpulp verhoogt het risico op tandbreekbaarheid4. Bovendien kan het verlies van de vitaliteit van de pulpa in jonge blijvende tanden de tandrijping nadelig beïnvloeden, en de huidige prothesetechnieken slagen er niet in om de neurale feedback van gezonde pulpa teherstellen. Deze situatie heeft ertoe geleid dat onderzoekers alternatieve oplossingen hebben onderzocht voor het beheersen van ontstoken pulp die verder gaan dan alleen verwijdering.
In 2007 startten Murray et al. de toepassing van weefselmanipulatie in regeneratieve endodontie, waardoor de belangstelling voor pulpaconserveringen -regeneratie toenam. Ontstoken pulpaweefsel vormt echter een uitdaging, aangezien cellen ontstekingsfactoren zoals IL-6 afgeven, die ontstekingscellen rekruteren en resulteren in celnecrose, verlies van pulpavitaliteit en complicaties bij functioneel herstel 6,7. Het begrijpen van ontstekingen en de daarmee gepaard gaande celdood is daarom cruciaal voor vooruitgang in het behoud van vitale pulpa. Er zijn een aantal experimenten uitgevoerd om de moleculaire biologie van de ontstoken pulp in vivo of in vitro te onderzoeken 8,9. Hoewel in vitro experimenten zoals 2D- of 3D-celculturen al jaren worden ontwikkeld en volwassen worden en op grote schaal worden gebruikt om reacties van pulpacellen op ontstekingsfactoren te testen, kunnen deze experimenten de interactie tussen pulpaweefsel en het systemische immuunsysteem nietweerspiegelen. Als het bestudeerde fenomeen is afgeleid van cellen van andere weefseloorsprong, zoals het immuunsysteem, het vasculaire systeem en het zenuwstelsel, dan zal pure pulpacelcultuur leiden tot een doodlopende weg. Daarom zijn in vivo experimenten zeer noodzakelijk en referentieel.
Muizen zijn steeds meer een veel voorkomende keuze geworden in ontstekingsonderzoek in vivo vanwege hun kosteneffectiviteit, hoge vruchtbaarheid en vitaliteit. Er is momenteel echter geen uitgebreid protocol voor het pulpitismodel van muizen, dat als referentie kan dienen. De kleine omvang van muizen en hun gevoeligheid voor stimulatie vormen aanzienlijke uitdagingen tijdens experimentele procedures. Het observeren van de minuscule tanden die diep in de mond van de muis zijn verborgen, vereist vaak het gebruik van een uitkragende microscoop, ondanks de meer gebruikelijke aanwezigheid van desktopmicroscopen in laboratoria. Het ontbreken van een mondopener vraagt om hulp van anderen. Om dit aan te pakken, heeft de groep een mondknevel bedacht met behulp van direct beschikbare materialen die tot doel heeft een gestandaardiseerd en reproduceerbaar protocol te bieden voor het construeren van het pulpitismodel van de muizen. Dit artikel beschrijft de procedure, met betrekking tot preoperatieve voorbereiding, immobilisatie, pulpablootstellingschirurgie en monsterafname op C57-muizen. Dit protocol beveelt het gebruik van de mondknevel aan en geeft informatie over de structuur, productie en toepassing ervan om andere onderzoekers te helpen bij het repliceren van de procedure.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Animal</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57/B6J mice</td>
			<td>Gempharmatech Experimental Animals Company</td>
			<td>C57/B6J</td>
			<td>For the establishment of pulp exposure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus &#38; Instruments Co. LTD.</td>
			<td>SB1-074(IV)</td>
			<td>Apply in drug injection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8# C+ file</td>
			<td>Readysteel</td>
			<td>0010047</td>
			<td>Apply in exposing the roof of pulp chamber.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Mix solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>10% ketamine hydrochloride+ 5% xylazine + 85% sterile isotonic saline.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Staining Solution</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C1005</td>
			<td>Apply in immunofluorescence staining for counter-staining of nucleus.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental high-speed dental handpiece</td>
			<td>Jing yuan electronic commerce technology</td>
			<td>WJ-422</td>
			<td>Apply in pulp exposure.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heavy wire cutter</td>
			<td>Jirui Medical Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>none</td>
			<td>Apply inarc cutting.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Stain kit</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BL700B</td>
			<td>For the histological analysis of the slides.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-6 antibody</td>
			<td>Novus</td>
			<td>NBP2-89149</td>
			<td>Apply in immunofluorescence staining to detect the inflammation of the dental pulp.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine(Ketamine hydrochloride)</td>
			<td>Vet One, Boise, Idaho, USA</td>
			<td>C3N VT1</td>
			<td>100mg/kg, IP. Apply in nesthetization.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical tap</td>
			<td>3M</td>
			<td>1530</td>
			<td>Apply in mice immobilization.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orthodontic arch wire&#160;</td>
			<td>Shanghai Wei Rong Medical Apparatus Co. LTD.</td>
			<td>K417</td>
			<td>Diameter of 8&#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round dental burr (0.6 mm)</td>
			<td>Shofu global</td>
			<td>072208</td>
			<td>Apply in removing enamel and shallow layer of dentin.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Young loop bending plier</td>
			<td>Jirui Medical Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>none</td>
			<td>Apply in arc bending.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of a murine pulp exposure model with a novel mouth-gag for pulpitis research

Pulpitis, een veel voorkomende oorzaak van natuurlijk tandverlies, leidt tot necrose en verlies van bioactiviteit in de ontstoken tandpulpa. Het ontrafelen van de mechanismen die ten grondslag liggen aan pulpitis en de efficiënte behandeling ervan is een voortdurende focus van endodontisch onderzoek. Daarom is het begrijpen van het ontstekingsproces in de tandpulpa van vitaal belang voor het verbeteren van de conservering van de pulpa. Vergeleken met andere in vitro experimenten biedt een muizen pulpitismodel een meer authentieke en genetisch diverse context om de pathologische progressie van pulpitis te observeren. Het gebruik van muizen levert echter, ondanks hun kosteneffectiviteit en toegankelijkheid, problemen op vanwege hun kleine formaat, slechte coördinatie en lage tolerantie, wat intraorale en tandheelkundige procedures bemoeilijkt. Dit protocol introduceert een nieuw ontwerp en toepassing van een mondknevel om muizenpulp bloot te leggen, waardoor efficiëntere intraorale procedures mogelijk worden. De mondknevel, bestaande uit een tandboog, is direct beschikbaar voor de meeste tandartsen en kan de chirurgische voorbereiding aanzienlijk versnellen, zelfs voor de eerste ingrepen. Micro-CT, hematoxyline-eosine (HE)-kleuring en immunofluorescentiekleuring werden gebruikt om veranderingen in morfologie en celexpressie te identificeren. Het doel van dit artikel is om onderzoekers te helpen bij het vaststellen van een meer reproduceerbare en minder veeleisende procedure voor het maken van een pulpa-ontstekingsmodel met behulp van deze nieuwe mondknevel.

The dental pulp, an integral part of the tooth, is responsible for multiple essential functions such as nutrient supply, dentin formation, sensory function, and defense reactions1. Nevertheless, the dental pulp, surrounded by hard tissue, is susceptible to injuries and damages from deep caries, pulpitis, trauma, or subsequent therapies2,3. The absence of functional dental pulp increases the risk of tooth fragility4. Moreover, the loss of pulp vitality in young permanent teeth can adversely affect tooth maturation, and current denture techniques fail to restore the neural feedback offered by healthy pulp4. This situation has led researchers to explore alternative solutions for managing inflamed pulp beyond mere removal.
In 2007, Murray et al. initiated the application of tissue engineering in regenerative endodontics, thereby sparking increased interest in pulp preservation and regeneration5. However, inflamed pulp tissue poses a challenge as cells release inflammatory factors such as IL-6, which recruit inflammatory cells and results in cell necrosis, loss of pulp vitality, and complications in functional recovery6,7. Understanding inflammation and the associated cell death is, therefore, crucial for advancements in the preservation of vital pulp. There are a number of experiments that have been conducted to explore the molecular biology of the inflame pulp in vivo or in vitro8,9. Though in vitro&#160;experiments like 2D or 3D cell cultures have been developed for years and are becoming mature and widely used to test reactions of pulp cells to inflammatory factors, these experiments cannot reflect the interaction between pulp tissue and the systemic immune system10. If the phenomenon being studied is derived from cells of other tissue origin like immune, vascular and nervous system, then pure pulp cell culture will lead to a dead end. Therefore, in vivo experiments are very necessary and referential.
Mice have increasingly become a common choice in inflammation research in vivo&#160;due to their cost-effectiveness, high fertility, and vitality. However, a comprehensive protocol for mice pulpitis model is currently absent, which can serve as a reference. The small size of mice and their sensitivity to stimulation pose significant challenges during experimental procedures. Observing the minuscule teeth concealed deep within the mouse mouth often necessitates the use of a cantilever microscope, notwithstanding the more common presence of desktop microscopes in laboratories. The absence of a mouth opener requires assistance from others. To address this, the group has devised a mouth-gag using readily available materials which aims to provide a standardized and reproducible protocol for constructing the mice pulpitis model. This article details the procedure, covering preoperative preparation, immobilization, pulp exposure surgery, and sample collection on C57 mice. This protocol recommends the use of the mouth-gag, providing information on its structure, production, and application to facilitate other researchers in replicating the procedure.

Auteur in de schijnwerpers: onderzoek naar tandpulp verbeteren met verbeterde muismodellen

Opstelling van een blootstellingsmodel voor muizenpulp met een nieuwe mondknevel voor onderzoek naar pulpitis

Individual experiments like 2D or 3D cell cultures have been widely used to test the reactions of dental pulp cells. These experiments cannot reflect the interaction between pulp tissue and the systemic immune system. Therefore, in vivo experiments are becoming increasingly popular in endodontic research.C57 mice have increasingly become a common choice in inflammation research on dental pulp due to their cost effectiveness, high fertility and vitality. However, the small size of mice and lack of coordination posed significant challenges during experimental procedures. The fixation process is an important factor that higher the technical threshold.We devised a novel mouth gag using readily available materials and simple assemblies to assist researchers in pulp exposure surgery. According to our research, this mouth gag can significantly shorten the time required for beginners to immobilize the mouth and expose the maxillary first molar of mice.

De hierboven beschreven procedure werd uitgevoerd op de rechter maxillaire eerste kies van 3, 6-8 weken oude C57BL/6 muizen, terwijl de linker maxillaire eerste molaren als controle werden bewaard. Histologie- en immunofluorescentieresultaten van blanco controle, 12 uur pulpitis en 24 uur pulpitis monsters werden gebruikt voor demonstratie.
Volgens het protocol van CT-analyse van Goldman et al.15 werd de blootstelling aan pulpa bevestigd door middel van micro-CT en reco...

Watch this Scientific Journal Video about Establishment of a Murine Pulp Exposure Model with a Novel Mouth-Gag for Pulpitis Research at JoVE.com

Dit artikel presenteert een gestroomlijnd protocol voor het opstellen van een pulpitismodel bij muizen met behulp van een innovatieve mondknevel, gevolgd door daaropvolgende histologische analyse.

Pulpitis, a common cause of natural tooth loss, leads to necrosis and loss of bioactivity in the inflamed dental pulp. Unraveling the mechanisms ...

Individuele experimenten zoals 2D- of 3D-celculturen zijn op grote schaal gebruikt om de reacties van tandpulpacellen te testen. Deze experimenten kunnen de interactie tussen pulpaweefsel en het systemische immuunsysteem niet weerspiegelen. Daarom worden in vivo experimenten steeds populairder in endodontisch onderzoek.C57-muizen zijn steeds meer een veel voorkomende keuze geworden in onderzoek naar ontstekingen op tandpulp vanwege hun kosteneffectiviteit, hoge vruchtbaarheid en vitaliteit. De kleine omvang van de muizen en het gebrek aan coördinatie vormden echter aanzienlijke uitdagingen tijdens experimentele procedures. Het fixatieproces is een belangrijke factor die de technische drempel verhoogt.We hebben een nieuwe mondknevel bedacht met behulp van direct beschikbare materialen en eenvoudige assemblages om onderzoekers te helpen bij pulpa-blootstellingschirurgie. Volgens ons onderzoek kan deze mondknevel de tijd die beginners nodig hebben om de mond te immobiliseren en de maxillaire eerste kies van muizen bloot te leggen, aanzienlijk verkorten.

establishment-murine-pulp-exposure-model-with-novel-mouth-gag-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Establishment of a Murine Pulp Exposure Model with a Novel Mouth-Gag for Pulpitis Research

Pulpitis, a common cause of natural tooth loss, leads to necrosis and loss of bioactivity in the inflamed dental pulp. Unraveling the mechanisms underlying pulpitis and its efficient treatment is an ongoing focus of endodontic research. Therefore, understanding the inflammatory process within the dental pulp is vital for improving pulp preservation. Compared to other in vitro experiments, a murine pulpitis model offers a more authentic and genetically diverse context to observe the pathological progression of pulpitis. However, using mice, despite their cost-effectiveness and accessibility, poses difficulties due to their small size, poor coordination, and low tolerance, complicating intraoral and dental procedures. This protocol introduces a novel design and application of a mouth-gag to expose mouse pulp, facilitating more efficient intraoral procedures. The mouth-gag, comprised of a dental arch readily available to most dentists and can significantly expedite surgical preparation, even for first-time procedures. Micro-CT, hematoxylin-eosin (HE) staining, and immunofluorescence staining were used to identify changes in morphology and cell expression. The aim of this article is to help researchers establish a more reproducible and less demanding procedure for creating a pulp inflammation model using this novel mouth-gag.

This article presents a streamlined protocol for establishing a pulpitis model in mice using an innovative mouth-gag, followed by subsequent histological analysis.

Preparation of the Mouth Gag for a Mouse Pulpitis Model

To begin, straighten an 8 micron thick orthodontic arch wire with your left hand while keeping the right hand slightly bent against the wire arc. Use a Young loop bending plier to bend the top edge of the trapezoid about eight millimeters at the midpoint of the bow wire. Ensure that point A is on the edge of the plier beak.Now hold the plier with the left hand. Clamp the free end of the bow wire with the right thumb and forefinger, then bend the bow wire from point A to make a 120-degree angle. Place the arch wire on a horizontal table to check if it is on a single plane.Leave about nine millimeters on each side of the wire and use pliers to bend the free end to a 75-degree angle. Now locate point C which is about five millimeters from point B.Bend the wire at point C to make a 105-degree angle. Similarly, bend the wire at points D and E.Clamp the IK and KJ parts simultaneously.Duplicate the A, B, C bending at points L, J, and K, then bend the free end at point J to make it vertical to the IKJ plane. Bend an extra tongue depressor for the mandibular part. Clamp point I five millimeters from point J and bend the free end to make it parallel to both the IKJ plane and the CD part.Next, leave a five millimeter gap from point I and at point H, bend the arch vertically to the IH and JIH planes. Locate point G five millimeters from H and clamp the JIHG lane. Then bend the arch at point G.Now bend the free end symmetrical to the KJ plane.The free end after point F should be symmetrical to the free end at point E.Finally, place rubber caps on the free ends.

Voorbereiding van de mondknevel voor een muispulpitismodel

Using A Mouth Gag for Pulpitis Assessment in Mice

To begin, fix an anesthetized mouse in a supine position on a fixation plate. Secure the limbs with skin tape. Compress the free ends of a prepared mouth gag with the thumb and the index finger.Fix the mouse's front incisors in the trapezoidal groove between the two arms of the mouth gag. Ensure the arm with the tongue depressor is placed on the mandibula. Check the maxillary first molar to ensure it is free of dental caries, trauma, and odontogenesis.Assess the surrounding gingiva to ensure absence of redness, swelling, or fistula. Then, check the health of the opposite teeth. Next, with a dental burr, drill the occlusal side of the maxillary first molar at 20, 000 RPM.Remove the enamel. With a syringe, drop normal saline every three minutes over the tooth to prevent overheating. Put a number 8 C+file on the lowest position of the drilled pit and pierce the last dentine to expose the pulp chamber.Clean the fragments around the tooth, then remove the mouth gag. The time taken to fix the mouth with the mouth gag and to find the maxillary first molar was significantly shortened relative to the traditional method. The pulp exposure was confirmed through micro CT and reconstruction modeling.At 24 hours post-surgery, most of the pulp tissue retained its morphology.