Name: Yazar Spotlight: Geliştirilmiş Fare Modelleri ile Dental Pulpa Araştırmalarını Geliştirme
Uploaded: 2023-10-27T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishment of a Murine Pulp Exposure Model with a Novel Mouth-Gag for Pulpitis Research at JoVE.com

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı U21A20368 (LY), 82101000 (HW) ve 82100982 (FL) ve Sichuan Bilim ve Teknoloji Programı 2023NSFSC1499 (HW) tarafından sağlanan hibelerle finanse edilmiştir. Tüm orijinal veriler ve görüntüler bu belgeye dahil edilmiştir.

Bu çalışmadaki deneysel prosedürler, Sichuan Üniversitesi Batı Çin Stomatoloji Okulu etik komitesi tarafından onaylanmıştır (WCHSIRB-D-2021-125). Yetişkin C57BL / 6 fareleri, Gempharmatech Deney Hayvanları Şirketi, Chengdu, Çin'den elde edildi. Maksiller birinci azı dişinin tüm tacı doğumdan 21 gün sonra patlar. Ameliyat için fareler normal canlılık ile 21 günden daha eski olmalıdır11. Burada, modelleme için 6 ila 8 haftalık fareler kullanıldı. ?...

Yeni Bir Ağız Tıkaç Kullanarak Pulpa İltihabı Fare Modeli Oluşturma 

<ol>
	<li>Kleinert, A., Kleinert, L., Ozimirska, M., Cha&#322;as, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endodontium+-+together+or+separately.">Endodontium - together or separately.</a> Folia Morphol. 77 (3), 409-415 (2018).</li><li>Dhillon, H., Kaushik, M., Sharma, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+endodontics-Creating+new+horizons.">Regenerative endodontics-Creating new horizons.</a> J Biomed Mater Res B Appl Biomater. 104 (4), 676-685 (2016).</li><li>Prati, C., Pirani, C., Zamparini, F., Gatto, M. R., Gandolfi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+20-year+historical+prospective+cohort+study+of+root+canal+treatments.+A+Multilevel+analysis.">A 20-year historical prospective cohort study of root canal treatments. A Multilevel analysis.</a> Int Endod J. 51 (9), 955-968 (2018).</li><li>Su, Y., Wang, C., Ye, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Healing+rate+and+post-obturation+pain+of+single-+versus+multiple-visit+endodontic+treatment+for+infected+root+canals:+a+systematic+review.">Healing rate and post-obturation pain of single- versus multiple-visit endodontic treatment for infected root canals: a systematic review.</a> J Endod. 37 (2), 125-132 (2011).</li><li>Murray, P. E., Garcia-Godoy, F., Hargreaves, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+endodontics:+a+review+of+current+status+and+a+call+for+action.">Regenerative endodontics: a review of current status and a call for action.</a> J Endod. 33 (4), 377-390 (2007).</li><li>Arora, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+application+of+immunotherapy+for+modulation+of+pulp+inflammation:+opportunities+for+vital+pulp+treatment.">Potential application of immunotherapy for modulation of pulp inflammation: opportunities for vital pulp treatment.</a> Int Endod J. 54 (8), 1263-1274 (2021).</li><li>Eramo, S., Natali, A., Pinna, R., Milia, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+regeneration+via+cell+homing.">Dental pulp regeneration via cell homing.</a> Int Endod J. 51 (4), 405-419 (2018).</li><li>Hasan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+Toll-like+receptor+2,+Dectin-1,+and+Osteopontin+in+murine+model+of+pulpitis.">Expression of Toll-like receptor 2, Dectin-1, and Osteopontin in murine model of pulpitis.</a> Clin Oral Investig. 27 (3), 1177-1192 (2023).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DDIT3+aggravates+pulpitis+by+modulating+M1+polarization+through+EGR1+in+macrophages.">DDIT3 aggravates pulpitis by modulating M1 polarization through EGR1 in macrophages.</a> Int Immunopharmacol. 120, 110328 (2023).</li><li>Richert, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+analysis+of+research+methods+and+experimental+models+to+study+pulpitis.">A critical analysis of research methods and experimental models to study pulpitis.</a> Int Endod J. 55 (Suppl 1), 14-36 (2022).</li><li>Huang, X. F., Zhao, Y. B., Zhang, F. M., Han, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+of+gene+expression+during+tooth+eruption+and+orthodontic+tooth+movement+in+mice.">Comparative study of gene expression during tooth eruption and orthodontic tooth movement in mice.</a> Oral Dis. 15 (8), 573-579 (2009).</li><li>Kwon, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+irritation+of+teeth+during+dental+treatment+procedures.">Thermal irritation of teeth during dental treatment procedures.</a> Restor Dent Endod. 38 (3), 105-112 (2013).</li><li>He, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulpal+tissue+inflammatory+reactions+after+experimental+pulpal+exposure+in+mice.">Pulpal tissue inflammatory reactions after experimental pulpal exposure in mice.</a> J Endod. 43 (1), 90-95 (2017).</li><li>Karrar, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+biomarkers+for+objective+assessment+of+symptomatic+pulpitis:+A+systematic+review+and+meta-analysis.">Molecular biomarkers for objective assessment of symptomatic pulpitis: A systematic review and meta-analysis.</a> Int Endod J. 56 (10), 1160-1177 (2023).</li><li>Goldman, E., Reich, E., Abramovitz, I., Klutstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducing+apical+periodontitis+in+mice.">Inducing apical periodontitis in mice.</a> J Vis Exp. (150), e59521 (2019).</li><li>Duncan, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Present+status+and+future+directions-Vital+pulp+treatment+and+pulp+preservation+strategies.">Present status and future directions-Vital pulp treatment and pulp preservation strategies.</a> Int Endod J. 55 (Suppl 3), 497-511 (2022).</li><li>Shi, X., Li, Z., He, Y., Jiang, Q., Yang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+different+dental+burs+for+experimental+induction+of+pulpitis+in+mice.">Effect of different dental burs for experimental induction of pulpitis in mice.</a> Arch Oral Biol. 83, 252-257 (2017).</li><li>Du, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indigenous+microbiota+protects+development+of+medication-related+osteonecrosis+induced+by+periapical+disease+in+mice.">Indigenous microbiota protects development of medication-related osteonecrosis induced by periapical disease in mice.</a> Int J Oral Sci. 14 (1), 16 (2022).</li></ol>

Dişlerin içindeki tek yumuşak doku olan diş pulpası, dişin biyoaktivitesinin korunmasında çok önemli bir rol oynar, ancak oldukça hassas kalır. Bu hayati pulpanın korunması, son endodontik tedavilerde tercih edilen ilk yaklaşım haline gelmiştir ve dental pulpanın enflamatuar mekanizmalarının kapsamlı bir şekilde anlaşılmasını gerektirmiştir16. İnflamatuar mikroçevrenin uzay-zamansal dalgalanması ve pulpitiste yerleşik hücre tipleri arasındaki etkileşimler, in v...

Dişin ayrılmaz bir parçası olan diş pulpası, besin temini, dentin oluşumu, duyusal fonksiyon ve savunma reaksiyonları gibi birçok temel fonksiyondan sorumludur1. Bununla birlikte, sert doku ile çevrili diş pulpası, derin çürükler, pulpitis, travma veya sonraki tedavilerden kaynaklanan yaralanmalara ve hasarlara karşı hassastır 2,3. Fonksiyonel diş pulpasının olmaması diş kırılganlığı riskini artırır4. Ayrıca, genç kalıcı dişlerde pulpa canlılığının kaybı diş olgunlaşmasını olumsuz etkileyebilir ve mevcut protez teknikleri, sağlıklı pulpanın sunduğu nöral geri bildirimi geri kazandırmakta başarısız olur4. Bu durum, araştırmacıları iltihaplı posayı sadece çıkarmanın ötesinde yönetmek için alternatif çözümler keşfetmeye yöneltti.
2007 yılında Murray ve ark. rejeneratif endodontide doku mühendisliği uygulamasını başlatmış ve böylece pulpanın korunması ve rejenerasyonuna olan ilginin artmasına neden olmuştur5. Bununla birlikte, iltihaplı pulpa dokusu, hücrelerin enflamatuar hücreleri işe alan ve hücre nekrozu, pulpa canlılığının kaybı ve fonksiyonel iyileşmede komplikasyonlarla sonuçlanan IL-6 gibi enflamatuar faktörleri serbest bırakması nedeniyle bir zorluk teşkil eder 6,7. Bu nedenle, iltihabı ve buna bağlı hücre ölümünü anlamak, hayati pulpanın korunmasındaki ilerlemeler için çok önemlidir. İnflamasyon pulpasının moleküler biyolojisini in vivo veya in vitroolarak araştırmak için yapılmış bir dizi deney vardır 8,9. Her ne kadar 2D veya 3D hücre kültürleri gibi in vitro deneyler yıllardır geliştirilmiş ve olgunlaşmakta ve pulpa hücrelerinin enflamatuar faktörlere reaksiyonlarını test etmek için yaygın olarak kullanılsa da, bu deneyler pulpa dokusu ile sistemik bağışıklık sistemi arasındaki etkileşimi yansıtamamaktadır10. İncelenen fenomen, bağışıklık, vasküler ve sinir sistemi gibi diğer doku kökenli hücrelerden türetilirse, saf pulpa hücre kültürü bir çıkmaza yol açacaktır. Bu nedenle, in vivo deneyler çok gerekli ve referanslıdır.
Fareler, maliyet etkinlikleri, yüksek doğurganlıkları ve canlılıkları nedeniyle in vivo inflamasyon araştırmalarında giderek daha yaygın bir seçim haline gelmiştir. Bununla birlikte, fareler pulpitis modeli için kapsamlı bir protokol şu anda mevcut değildir ve bu bir referans olarak hizmet edebilir. Farelerin küçük boyutları ve stimülasyona karşı duyarlılıkları, deneysel prosedürler sırasında önemli zorluklar ortaya çıkarmaktadır. Fare ağzının derinliklerine gizlenmiş küçük dişleri gözlemlemek, laboratuvarlarda masaüstü mikroskopların daha yaygın olmasına rağmen, genellikle bir konsol mikroskobunun kullanılmasını gerektirir. Ağız açıcının olmaması başkalarının yardımını gerektirir. Bunu ele almak için grup, fare pulpitis modelini oluşturmak için standartlaştırılmış ve tekrarlanabilir bir protokol sağlamayı amaçlayan, hazır malzemeleri kullanarak bir ağız tıkaç tasarladı. Bu makale, C57 farelerinde preoperatif hazırlık, immobilizasyon, pulpa maruziyet cerrahisi ve numune toplamayı kapsayan prosedürü detaylandırmaktadır. Bu protokol, diğer araştırmacıların prosedürü tekrarlamasını kolaylaştırmak için yapısı, üretimi ve uygulaması hakkında bilgi sağlayarak ağız tıkaçının kullanılmasını önerir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Animal</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57/B6J mice</td>
			<td>Gempharmatech Experimental Animals Company</td>
			<td>C57/B6J</td>
			<td>For the establishment of pulp exposure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus &#38; Instruments Co. LTD.</td>
			<td>SB1-074(IV)</td>
			<td>Apply in drug injection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8# C+ file</td>
			<td>Readysteel</td>
			<td>0010047</td>
			<td>Apply in exposing the roof of pulp chamber.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Mix solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>10% ketamine hydrochloride+ 5% xylazine + 85% sterile isotonic saline.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Staining Solution</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C1005</td>
			<td>Apply in immunofluorescence staining for counter-staining of nucleus.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental high-speed dental handpiece</td>
			<td>Jing yuan electronic commerce technology</td>
			<td>WJ-422</td>
			<td>Apply in pulp exposure.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heavy wire cutter</td>
			<td>Jirui Medical Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>none</td>
			<td>Apply inarc cutting.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Stain kit</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BL700B</td>
			<td>For the histological analysis of the slides.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-6 antibody</td>
			<td>Novus</td>
			<td>NBP2-89149</td>
			<td>Apply in immunofluorescence staining to detect the inflammation of the dental pulp.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine(Ketamine hydrochloride)</td>
			<td>Vet One, Boise, Idaho, USA</td>
			<td>C3N VT1</td>
			<td>100mg/kg, IP. Apply in nesthetization.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical tap</td>
			<td>3M</td>
			<td>1530</td>
			<td>Apply in mice immobilization.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orthodontic arch wire&#160;</td>
			<td>Shanghai Wei Rong Medical Apparatus Co. LTD.</td>
			<td>K417</td>
			<td>Diameter of 8&#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round dental burr (0.6 mm)</td>
			<td>Shofu global</td>
			<td>072208</td>
			<td>Apply in removing enamel and shallow layer of dentin.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Young loop bending plier</td>
			<td>Jirui Medical Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>none</td>
			<td>Apply in arc bending.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of a murine pulp exposure model with a novel mouth-gag for pulpitis research

Doğal diş kaybının yaygın bir nedeni olan pulpitis, iltihaplı diş pulpasında nekroza ve biyoaktivite kaybına yol açar. Pulpitisin altında yatan mekanizmaların çözülmesi ve etkili tedavisi, endodontik araştırmaların devam eden bir odak noktasıdır. Bu nedenle, diş pulpasındaki enflamatuar süreci anlamak, pulpanın korunmasını iyileştirmek için hayati önem taşır. Diğer in vitro deneylerle karşılaştırıldığında, bir murin pulpitis modeli, pulpitisin patolojik ilerlemesini gözlemlemek için daha otantik ve genetik olarak çeşitli bir bağlam sunar. Bununla birlikte, maliyet etkinliği ve erişilebilirliğine rağmen farelerin kullanılması, küçük boyutları, zayıf koordinasyonları ve düşük toleransları nedeniyle ağız içi ve diş prosedürlerini karmaşıklaştıran zorluklar doğurmaktadır. Bu protokol, fare pulpasını ortaya çıkarmak için yeni bir ağız tıkaç tasarımı ve uygulaması sunarak daha verimli ağız içi prosedürleri kolaylaştırır. Ağız tıkacı, çoğu diş hekimi tarafından kolayca bulunabilen bir diş kemerinden oluşur ve ilk kez yapılan prosedürler için bile cerrahi hazırlığı önemli ölçüde hızlandırabilir. Morfoloji ve hücre ekspresyonundaki değişiklikleri tanımlamak için mikro-BT, hematoksilen-eozin (HE) boyaması ve immünofloresan boyama kullanıldı. Bu makalenin amacı, araştırmacıların bu yeni ağız tıkaç kullanarak bir pulpa iltihabı modeli oluşturmak için daha tekrarlanabilir ve daha az talepkar bir prosedür oluşturmalarına yardımcı olmaktır.

The dental pulp, an integral part of the tooth, is responsible for multiple essential functions such as nutrient supply, dentin formation, sensory function, and defense reactions1. Nevertheless, the dental pulp, surrounded by hard tissue, is susceptible to injuries and damages from deep caries, pulpitis, trauma, or subsequent therapies2,3. The absence of functional dental pulp increases the risk of tooth fragility4. Moreover, the loss of pulp vitality in young permanent teeth can adversely affect tooth maturation, and current denture techniques fail to restore the neural feedback offered by healthy pulp4. This situation has led researchers to explore alternative solutions for managing inflamed pulp beyond mere removal.
In 2007, Murray et al. initiated the application of tissue engineering in regenerative endodontics, thereby sparking increased interest in pulp preservation and regeneration5. However, inflamed pulp tissue poses a challenge as cells release inflammatory factors such as IL-6, which recruit inflammatory cells and results in cell necrosis, loss of pulp vitality, and complications in functional recovery6,7. Understanding inflammation and the associated cell death is, therefore, crucial for advancements in the preservation of vital pulp. There are a number of experiments that have been conducted to explore the molecular biology of the inflame pulp in vivo or in vitro8,9. Though in vitro&#160;experiments like 2D or 3D cell cultures have been developed for years and are becoming mature and widely used to test reactions of pulp cells to inflammatory factors, these experiments cannot reflect the interaction between pulp tissue and the systemic immune system10. If the phenomenon being studied is derived from cells of other tissue origin like immune, vascular and nervous system, then pure pulp cell culture will lead to a dead end. Therefore, in vivo experiments are very necessary and referential.
Mice have increasingly become a common choice in inflammation research in vivo&#160;due to their cost-effectiveness, high fertility, and vitality. However, a comprehensive protocol for mice pulpitis model is currently absent, which can serve as a reference. The small size of mice and their sensitivity to stimulation pose significant challenges during experimental procedures. Observing the minuscule teeth concealed deep within the mouse mouth often necessitates the use of a cantilever microscope, notwithstanding the more common presence of desktop microscopes in laboratories. The absence of a mouth opener requires assistance from others. To address this, the group has devised a mouth-gag using readily available materials which aims to provide a standardized and reproducible protocol for constructing the mice pulpitis model. This article details the procedure, covering preoperative preparation, immobilization, pulp exposure surgery, and sample collection on C57 mice. This protocol recommends the use of the mouth-gag, providing information on its structure, production, and application to facilitate other researchers in replicating the procedure.

Yazar Spotlight: Geliştirilmiş Fare Modelleri ile Dental Pulpa Araştırmalarını Geliştirme

Pulpitis Araştırmaları için Yeni Bir Ağız Tıkaç ile Murin Pulpa Maruziyet Modelinin Kurulması

Individual experiments like 2D or 3D cell cultures have been widely used to test the reactions of dental pulp cells. These experiments cannot reflect the interaction between pulp tissue and the systemic immune system. Therefore, in vivo experiments are becoming increasingly popular in endodontic research.C57 mice have increasingly become a common choice in inflammation research on dental pulp due to their cost effectiveness, high fertility and vitality. However, the small size of mice and lack of coordination posed significant challenges during experimental procedures. The fixation process is an important factor that higher the technical threshold.We devised a novel mouth gag using readily available materials and simple assemblies to assist researchers in pulp exposure surgery. According to our research, this mouth gag can significantly shorten the time required for beginners to immobilize the mouth and expose the maxillary first molar of mice.

Yukarıda tarif edilen işlem 3, 6-8 haftalık C57BL/6 farelerin sağ maksiller birinci azı dişlerine uygulanırken, sol maksiller birinci azı dişleri kontrol olarak korundu. Boş kontrolden elde edilen histoloji ve immünofloresan sonuçları, 12 saat pulpitis ve 24 saat pulpitis örnekleri gösterim için kullanıldı.
Goldman ve ark.15'ten alınan BT analizi protokolünü takiben, pulpa maruziyeti Şekil 4 A-C'de mik...

Watch this Scientific Journal Video about Establishment of a Murine Pulp Exposure Model with a Novel Mouth-Gag for Pulpitis Research at JoVE.com

Bu makale, yenilikçi bir ağız tıkaç kullanarak farelerde bir pulpitis modeli oluşturmak için kolaylaştırılmış bir protokol ve ardından müteakip histolojik analiz sunmaktadır.

Pulpitis, a common cause of natural tooth loss, leads to necrosis and loss of bioactivity in the inflamed dental pulp. Unraveling the mechanisms ...

2D veya 3D hücre kültürleri gibi bireysel deneyler, diş pulpası hücrelerinin reaksiyonlarını test etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu deneyler, pulpa dokusu ile sistemik bağışıklık sistemi arasındaki etkileşimi yansıtamaz. Bu nedenle, in vivo deneyler endodontik araştırmalarda giderek daha popüler hale gelmektedir.C57 fareleri, maliyet etkinlikleri, yüksek doğurganlıkları ve canlılıkları nedeniyle diş pulpası üzerine yapılan inflamasyon araştırmalarında giderek daha yaygın bir seçenek haline gelmiştir. Bununla birlikte, farelerin küçük boyutu ve koordinasyon eksikliği, deneysel prosedürler sırasında önemli zorluklar ortaya çıkardı. Fiksasyon işlemi, teknik eşiği yükselten önemli bir faktördür.Pulpa maruziyeti cerrahisinde araştırmacılara yardımcı olmak için hazır malzemeler ve basit düzenekler kullanarak yeni bir ağız tıkaç tasarladık. Araştırmamıza göre, bu ağız tıkası, yeni başlayanlar için ağzı hareketsiz hale getirmek ve farelerin maksiller birinci azı dişini ortaya çıkarmak için gereken süreyi önemli ölçüde kısaltabilir.

establishment-murine-pulp-exposure-model-with-novel-mouth-gag-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Establishment of a Murine Pulp Exposure Model with a Novel Mouth-Gag for Pulpitis Research

Pulpitis, a common cause of natural tooth loss, leads to necrosis and loss of bioactivity in the inflamed dental pulp. Unraveling the mechanisms underlying pulpitis and its efficient treatment is an ongoing focus of endodontic research. Therefore, understanding the inflammatory process within the dental pulp is vital for improving pulp preservation. Compared to other in vitro experiments, a murine pulpitis model offers a more authentic and genetically diverse context to observe the pathological progression of pulpitis. However, using mice, despite their cost-effectiveness and accessibility, poses difficulties due to their small size, poor coordination, and low tolerance, complicating intraoral and dental procedures. This protocol introduces a novel design and application of a mouth-gag to expose mouse pulp, facilitating more efficient intraoral procedures. The mouth-gag, comprised of a dental arch readily available to most dentists and can significantly expedite surgical preparation, even for first-time procedures. Micro-CT, hematoxylin-eosin (HE) staining, and immunofluorescence staining were used to identify changes in morphology and cell expression. The aim of this article is to help researchers establish a more reproducible and less demanding procedure for creating a pulp inflammation model using this novel mouth-gag.

This article presents a streamlined protocol for establishing a pulpitis model in mice using an innovative mouth-gag, followed by subsequent histological analysis.

Tıp

Preparation of the Mouth Gag for a Mouse Pulpitis Model

To begin, straighten an 8 micron thick orthodontic arch wire with your left hand while keeping the right hand slightly bent against the wire arc. Use a Young loop bending plier to bend the top edge of the trapezoid about eight millimeters at the midpoint of the bow wire. Ensure that point A is on the edge of the plier beak.Now hold the plier with the left hand. Clamp the free end of the bow wire with the right thumb and forefinger, then bend the bow wire from point A to make a 120-degree angle. Place the arch wire on a horizontal table to check if it is on a single plane.Leave about nine millimeters on each side of the wire and use pliers to bend the free end to a 75-degree angle. Now locate point C which is about five millimeters from point B.Bend the wire at point C to make a 105-degree angle. Similarly, bend the wire at points D and E.Clamp the IK and KJ parts simultaneously.Duplicate the A, B, C bending at points L, J, and K, then bend the free end at point J to make it vertical to the IKJ plane. Bend an extra tongue depressor for the mandibular part. Clamp point I five millimeters from point J and bend the free end to make it parallel to both the IKJ plane and the CD part.Next, leave a five millimeter gap from point I and at point H, bend the arch vertically to the IH and JIH planes. Locate point G five millimeters from H and clamp the JIHG lane. Then bend the arch at point G.Now bend the free end symmetrical to the KJ plane.The free end after point F should be symmetrical to the free end at point E.Finally, place rubber caps on the free ends.

Bir fare pulpitis modeli için ağız tıkaç hazırlanması

Using A Mouth Gag for Pulpitis Assessment in Mice

To begin, fix an anesthetized mouse in a supine position on a fixation plate. Secure the limbs with skin tape. Compress the free ends of a prepared mouth gag with the thumb and the index finger.Fix the mouse's front incisors in the trapezoidal groove between the two arms of the mouth gag. Ensure the arm with the tongue depressor is placed on the mandibula. Check the maxillary first molar to ensure it is free of dental caries, trauma, and odontogenesis.Assess the surrounding gingiva to ensure absence of redness, swelling, or fistula. Then, check the health of the opposite teeth. Next, with a dental burr, drill the occlusal side of the maxillary first molar at 20, 000 RPM.Remove the enamel. With a syringe, drop normal saline every three minutes over the tooth to prevent overheating. Put a number 8 C+file on the lowest position of the drilled pit and pierce the last dentine to expose the pulp chamber.Clean the fragments around the tooth, then remove the mouth gag. The time taken to fix the mouth with the mouth gag and to find the maxillary first molar was significantly shortened relative to the traditional method. The pulp exposure was confirmed through micro CT and reconstruction modeling.At 24 hours post-surgery, most of the pulp tissue retained its morphology.