Name: Author Spotlight: Developing an Efficient Blood Collection Method in Non-Anesthetized Rats
Uploaded: 2023-11-03T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Developing an Efficient Blood Collection Method in Non-Anesthetized Rats at JoVE.com

Denna studie stöddes av Cuiying Plan Project vid Lanzhou University Second Hospital (Grant No. PR0121015) och Gansu Provincial Key Laboratory of Urinary System Disease Research (anslag nr 0412D2).

Denna studie följde de riktlinjer som beskrivs i den 8:e upplagan av Guide for the Care and Use of Laboratory Animals13. Forskningen godkändes av den etiska kommittén vid Lanzhou University Second Hospital och dokumenterades i enlighet med riktlinjerna för ARRIVE 2.014. Tolv friska Wistar-råttor (sex hanar som vägde 290-330 g och sex honor som vägde 250-280 g) i åldrarna 12-16 veckor inkvarterades i GLP Animal Laboratory vid Lanzhou University i 3 dagar före själv...

Subclavian Vein Puncture Method for Repeated Blood Collection in Conscious Rats

<ol>
	<li>. Blood collection: The rat IACUC Guideline Available from: <a target="_blank" href="https://iacuc.ucsf.edu/sites/g/files/tkssra751/f/wysiwyg/GUIDELINE%20-%20Blood%20Collection%20-%20Rat.pdf">https://iacuc.ucsf.edu/sites/g/files/tkssra751/f/wysiwyg/GUIDELINE%20-%20Blood%20Collection%20-%20Rat.pdf</a> (2022)</li><li>Hattori, N., Takumi, A., Saito, K., Saito, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+serial+cervical+or+tail+blood+sampling+on+toxicity+and+toxicokinetic+evaluation+in+rats.">Effects of serial cervical or tail blood sampling on toxicity and toxicokinetic evaluation in rats.</a> The Journal of Toxicological Sciences. 45 (10), 599-609 (2020).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+blood+collection+from+tail+veins+of+non-anesthetized+mice+with+a+vacuum+blood+collection+system+and+eyeglass+magnifier.">Modified blood collection from tail veins of non-anesthetized mice with a vacuum blood collection system and eyeglass magnifier.</a> Journal of Visualized Experiments. (144), e65513 (2019).</li><li>Zou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeated+blood+collection+from+tail+vein+of+non-anesthetized+rats+with+a+vacuum+blood+collection+system.">Repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system.</a> Journal of Visualized Experiments. (130), e55852 (2017).</li><li>Charl&#232;s, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+tail+vein+and+penile+vein+puncture+for+blood+sampling+in+the+rat+model.">Modified tail vein and penile vein puncture for blood sampling in the rat model.</a> Journal of Visualized Experiments. (196), e65513 (2023).</li><li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repetitive+blood+sampling+from+the+subclavian+vein+of+conscious+rat.">Repetitive blood sampling from the subclavian vein of conscious rat.</a> Journal of Visualized Experiments. (180), e63439 (2022).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subclavian+vein+puncture+as+an+alternative+method+of+blood+sample+collection+in+rats.">Subclavian vein puncture as an alternative method of blood sample collection in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (141), e58499 (2018).</li><li>Tochitani, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+microsampling+on+toxicity+assessment+of+hematotoxic+compounds+in+a+general+toxicity+study+in+rats.">Effects of microsampling on toxicity assessment of hematotoxic compounds in a general toxicity study in rats.</a> The Journal of Toxicological Sciences. 47 (7), 269-276 (2022).</li><li>Harikrishnan, V. S., Hansen, A. K., Abelson, K. S., S&#248;rensen, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+various+methods+of+blood+sampling+in+mice+and+rats:+Effects+on+animal+welfare.">A comparison of various methods of blood sampling in mice and rats: Effects on animal welfare.</a> Laboratory Animals. 52 (3), 253-264 (2018).</li><li>Yokoyama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+toxicological+influences+by+microsampling+(50+&#181;L)+from+jugular+vein+of+rats+in+a+collaborative+28-day+study.">Lack of toxicological influences by microsampling (50 &#181;L) from jugular vein of rats in a collaborative 28-day study.</a> The Journal of Toxicological Sciences. 45 (6), 319-325 (2020).</li><li>Korfmacher, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+capillary+microsampling+for+rat+pharmacokinetic+studies:+Comparison+of+tail-vein+bleed+to+jugular+vein+cannula+sampling.">Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).</li><li>Lu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microsurgical+skills+of+establishing+permanent+jugular+vein+cannulation+in+rats+for+serial+blood+sampling+of+orally+administered+drug.">Microsurgical skills of establishing permanent jugular vein cannulation in rats for serial blood sampling of orally administered drug.</a> Journal of Visualized Experiments. (178), e63167 (2021).</li><li>National Research Council of the National Academies, Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , (2011).</li><li>Perciedu Sert, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ARRIVE+guidelines+2.0:+updated+guidelines+for+reporting+animal+research.">The ARRIVE guidelines 2.0: updated guidelines for reporting animal research.</a> The Journal of Physiology. 598 (18), 3793-3801 (2020).</li><li>Charan, J., Kantharia, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+calculate+sample+size+in+animal+studies.">How to calculate sample size in animal studies.</a> Journal of Pharmacology &amp; Pharmacotherapeutics. 4 (4), 303-306 (2013).</li><li>Turner, P. V., Pang, D. S., Lofgren, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+pain+assessment+methods+in+laboratory+rodents.">A review of pain assessment methods in laboratory rodents.</a> Comparative Medicine. 69 (6), 451-467 (2019).</li><li>Kurata, M., Misawa, K., Noguchi, N., Kasuga, Y., Matsumoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+blood+collection+imitating+toxicokinetic+study+on+rat+hematological+parameters.">Effect of blood collection imitating toxicokinetic study on rat hematological parameters.</a> The Journal of Toxicological Sciences. 22 (3), 231-238 (1997).</li><li>Zeller, W., Weber, H., Panoussis, B., B&#252;rge, T., Bergmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refinement+of+blood+sampling+from+the+sublingual+vein+of+rats.">Refinement of blood sampling from the sublingual vein of rats.</a> Laboratory Animals. 32 (4), 369-376 (1998).</li></ol>

Även om blodinsamling i svansvenen är den vanligaste metoden för upprepad blodprovstagning hos råttor, kan den påverkas av anestesiläkemedel, och på grund av svansvenens lilla storlek är mängden blod som kan samlas in vid ett enda tillfälle begränsad, vilket leder till en längre tid för blodinsamling 4,5. Även om högpresterande vätskekromatografi (HPLC) -tandemmasspektrometri (MS/MS) system i kombination med kapillär mikroprovtagning (CMS) av rå...

This corrects the article <a href="https://dx.doi.org/10.3791/66075">10.3791/66075</a>

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/t/66075">Subclavian Vein Blood Sampling in Conscious Rats</a>. The Discussion section was&#160;updated.

Erratum: Subclavian Vein Blood Sampling in Conscious Rats

Råttor är ett av de vanligaste försöksdjuren och det finns många sätt att ta blodprover. För försök med en enda blodprovstagning i slutskedet kan en tillräcklig mängd blod erhållas genom hjärtpunktion eller blodinsamling av bukaorta1. Vissa studier kräver dock upprepad blodinsamling från råttor för rutinmässig blodanalys eller biokemisk analys, särskilt i farmakokinetiska och toxikologiska studier, där upprepad blodinsamling krävs för att bestämma absorption, distribution och metabolism av läkemedel2.
För närvarande, även om blodinsamling från svansvener är den vanligaste metoden för blodprovstagning från råttor, trots att den inte kräver anestesi, kan denna metod vara utmanande för upprepade insamlingar, och volymen blod som samlas in är relativt liten 3,4. Dessutom, även om blod kan samlas in från venerna saphenus och penis, är mängden blod som erhålls begränsad och anestesi krävs 1,5. Dessutom ger blodprover som samlas in från den submandibulära venösa plexus, såväl som sublinguala, jugulära och subclavian vener av högre kvalitet men kräver vanligtvis anestesi eller hjälp av flera individer 1,6,7,8,9. Slutligen kräver blodinsamling i retroorbital sinus/kanal inte bara anestesi utan kan också potentiellt orsaka skada och stress för råttorna9.
Kvaliteten på blodprover som vanligtvis tas från större vener är i allmänhet av högsta standard1. För närvarande har vissa studier visat att kontinuerlig mikroprovtagning genom halsvenen är en mycket lämplig metod för toxikologisk forskning på råttor, även om denna metod vanligtvis kräver jugular venkateterisering 10,11,12. Därför är det värt att undersöka hur man kan få blodprover av hög kvalitet i enlighet med 3R-principen för djurförsök utan kirurgiska ingrepp. Syftet med denna studie var att presentera en metod för att effektivt extrahera blod från nyckelbensvenen hos råttor. Denna teknik möjliggör snabb insamling av tillfredsställande prover genom ett förfarande med en person utan behov av anestesi.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.75% normal saline</td>
			<td>Gansu Fuzheng Pharmaceutical Technology Co., Ltd.</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Prepared heparin sodium solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Pasteur pipette&#160;</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BS-XG-01-NS</td>
			<td>Blood collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringe (26 G, 0.45 mm x 12 mm)</td>
			<td>Shinva Medical Instrument Co.,Ltd.</td>
			<td>0.45*12RWLB</td>
			<td>Blood collection&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL Eppendorf tube</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BS-15-M</td>
			<td>Blood storage and collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% medical alcohol</td>
			<td>Shandong Lircon Medical Technology Co., Ltd.</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Disinfection of rat blood collection site</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tube holder</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BS-05/15-SM60</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic scale</td>
			<td>Shanghai PUCHUN Measure Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>JE1002</td>
			<td>Weigh</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium injection</td>
			<td>Hebei Changshan Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd.</td>
			<td>&#8212;&#8212;</td>
			<td>Rinse the syringe and EP tube; dilute with normal saline to 25 U/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low temperature centrifuge</td>
			<td>HuNan Xiang Yi Centrifuge Instrument&#160; Co., Ltd.</td>
			<td>&#160;H1750R</td>
			<td>Separation of serum</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

subclavian vein blood sampling in conscious rats

Det finns flera etablerade metoder för att ta upprepade blodprover från råttor, där de vanligaste metoderna är lateral svansvensprovtagning utan bedövning och jugulära venprovtagning med anestesi. De flesta av dessa metoder kräver dock assistans och anestesiutrustning och innebär ibland svårigheter när det gäller blodinsamling eller dålig kvalitet på blodprover. Dessutom tar dessa metoder för blodinsamling betydande tid och mänskliga resurser när upprepad blodprovstagning krävs för ett stort antal råttor. Denna studie presenterar en teknik för upprepad blodprovstagning på icke-sövda råttor av en enda skicklig individ. Mycket tillfredsställande blodprover kan erhållas genom att punktera venen subclavia. Metoden visade en imponerande total framgångsfrekvens på 95 %, med en mediantid på bara 2 minuter från råttans fasthållning till avslutad blodinsamling. Att utföra på varandra följande blodinsamlingar inom det angivna intervallet orsakar inte heller någon skada på råttorna. Denna metod är värd att främja för blodinsamling, särskilt i storskaliga farmakokinetiska studier.

Rats are one of the most common experimental animals, and there are many ways to obtain blood samples. For experiments involving a single blood collection at the concluding stage, a sufficient amount of blood can be obtained through cardiac puncture or abdominal aorta blood collection1. However, some studies require repeated blood collection from rats for routine blood or biochemical analysis, especially in pharmacokinetics and toxicology studies, where repeated blood collection is required to determine the absorption, distribution, and metabolism of drugs2.
Currently, although tail vein blood collection is the most common method for blood sampling from rats, despite not requiring anesthesia, this method can be challenging for repeated collections, and the volume of blood collected is relatively small3,4. Additionally, although blood can be collected from the saphenous and penile veins, the amount of blood obtained is limited, and anesthesia is required1,5. Furthermore, blood samples collected from the submandibular venous plexus, as well as sublingual, jugular, and subclavian veins provide higher-quality samples but typically require anesthesia or the assistance of multiple individuals1,6,7,8,9. Finally, retro-orbital sinus/canal blood collection not only necessitates anesthesia but may also potentially cause injury and stress to the rats9.
The quality of blood samples typically obtained from major veins is generally of the highest standard1. At present, some studies have found that continuous microsampling through the jugular vein is a very suitable method for toxicological research in rats although this method usually requires jugular vein catheterization10,11,12. Therefore, it is worth exploring how to obtain high-quality blood samples in accordance with the 3R principle of animal research without surgical intervention. The objective of this study was to present a method for efficiently extracting blood from the subclavian vein in rats. This technique enables the swift collection of satisfactory samples through a single-person procedure without the need for anesthesia.

Author Spotlight: Developing an Efficient Blood Collection Method in Non-Anesthetized Rats 

Blodprovstagning av nyckelbensvenen hos medvetna råttor

The scope of our research is centered on devising infection methodologies for collecting blood samples from rats. Our aim is to ensure rapid and set procedures that align with our principle, utilizing minimal manpower and resources. One of the current experimental challenges is to effectively immobilize the rat in a manner that simultaneously maintains the subclavian vein enclosed proximately to the skin surface for optimal blood collection.The advantages of our protocol is that high quality blood samples can be obtained quickly by a person without anesthesizing the rats.

Plasmaprover av hög kvalitet uppvisar en blekgul nyans, klarhet och transparens, utan någon röd nyans eller koagulering, som avbildas i figur 2A. Figur 2B visar hemolys (vänster sida) respektive koagulation (höger sida) som ett resultat av felaktiga procedurer. Under loppet av 96 blodprovstagningar inom 4 dagar var de genomsnittliga enskilda blodinsamlingstiderna för grupperna A och B 119,87 ± 33,62 s respektive 123,28 ±...

Watch this Scientific Journal Video about Developing an Efficient Blood Collection Method in Non-Anesthetized Rats at JoVE.com

Här presenterar vi en kombination av effektiv råttrestriktion och subclavian venpunktionsmetoder som möjliggör snabb, säker och upprepad blodinsamling hos råttor utan bedövning.

There are several established methods for obtaining repeated blood samples from rats, with the most commonly employed methods being lateral tail vein ...

Omfattningen av vår forskning är inriktad på att utforma infektionsmetoder för att samla in blodprover från råttor. Vårt mål är att säkerställa snabba och fastställda procedurer som överensstämmer med vår princip, med minimal arbetskraft och resurser. En av de nuvarande experimentella utmaningarna är att effektivt immobilisera råttan på ett sätt som samtidigt bibehåller den subclavian venen som är innesluten nära hudytan för optimal blodinsamling.Fördelarna med vårt protokoll är att högkvalitativa blodprover kan erhållas snabbt av en person utan bedövning av råttorna.