Name: Author Spotlight: Advancing Cancer Therapeutics Using Tumor Xenotransplantation in Zebrafish
Uploaded: 2024-07-12T12:40:00
Description: In vivo studies of tumor behavior are a staple of cancer research; however, the use of mice presents significant challenges in cost and time. Here, we ...

Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni NIH R37AI110985 e P30CA006927, uno stanziamento del Commonwealth della Pennsylvania, della Leukemia and Lymphoma Society e del Bishop Fund. Questo studio è stato supportato anche dalle strutture principali di Fox Chase, tra cui la coltura cellulare, la citometria a flusso e la struttura per animali da laboratorio. Ringraziamo la dottoressa Jennifer Rhodes per aver mantenuto la struttura di zebrafish e microiniezione presso FCCC.

Il mantenimento, l'alimentazione e l'allevamento del pesce zebra sono avvenuti in condizioni di acquacoltura standard a 28,5 °C, come descritto31. Tutti gli esperimenti relativi al pesce zebra sono stati fatti a questa temperatura; tuttavia, dopo lo xenotrapianto, gli animali sono stati coltivati a 34 °C per tutta la durata dell'esperimento, in conformità con le procedure approvate dal Comitato Istituzionale per la Cura e l'Uso degli Animali (IACUC).
1. Allevam...

Utilizing Larval Zebrafish for Efficient In Vivo Tumor Studies

<ol>
	<li>Sharma, G., Goyal, Y., Bhatia, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Handbook+of+Animal+Models+and+its+Uses+in+Cancer+Research.">Handbook of Animal Models and its Uses in Cancer Research.</a> Preclinical Animal Models of Cancer: Applications and Limitations. , (2022).</li><li>Singhal, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advancement+in+breast+cancer+research:+Insights+from+model+organisms-Mouse+models+to+zebrafish.">Recent advancement in breast cancer research: Insights from model organisms-Mouse models to zebrafish.</a> Cancers. 15 (11), 2961 (2023).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+xenograft+models+in+cancer+therapy:+technologies+and+applications.">Patient-derived xenograft models in cancer therapy: technologies and applications.</a> Signal Transduction and Targeted Therapy. 8 (1), 160 (2023).</li><li>Fuochi, S., Galligioni, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disease+Animal+Models+for+Cancer+Research.">Disease Animal Models for Cancer Research.</a> Cancer Cell Culture: Methods and Protocols. , (2023).</li><li>Shaw, T. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis.">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2 (2), 183-189 (2008).</li><li>Hill, D., Chen, L., Snaar-Jagalska, E., Chaudhry, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+zebrafish+xenograft+assay+of+human+cancer+metastasis.">Embryonic zebrafish xenograft assay of human cancer metastasis.</a> F1000Res. 7, 1682 (2018).</li><li>Corkery, D. P., Dellaire, G., Berman, J. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+zebrafish+pediatric+brain+tumors+into+immune-competent+hosts+for+long-term+study+of+tumor+cell+behavior+and+drug+response.">Transplantation of zebrafish pediatric brain tumors into immune-competent hosts for long-term study of tumor cell behavior and drug response.</a> J Vis Exp. (123), e55712 (2017).</li><li>Soh, G. H., K&#246;gler, A. C., M&#252;ller, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+effective+transplantation+device+for+zebrafish+embryos.">A simple and effective transplantation device for zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. (174), e62767 (2021).</li><li>Martinez-Lopez, M., P&#243;voa, V., Fior, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+zebrafish+larval+xenografts+and+tumor+behavior+analysis.">Generation of zebrafish larval xenografts and tumor behavior analysis.</a> J Vis Exp. (172), e62373 (2021).</li><li>Ren, J., Liu, S., Cui, C., Ten Dijke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasive+behavior+of+human+breast+cancer+cells+in+embryonic+zebrafish.">Invasive behavior of human breast cancer cells in embryonic zebrafish.</a> J Vis Exp. (122), e55459 (2017).</li><li>Zhao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+xenograft+model+in+zebrafish+for+high-resolution+investigating+dynamics+of+neovascularization+in+tumors.">A novel xenograft model in zebrafish for high-resolution investigating dynamics of neovascularization in tumors.</a> PloS One. 6 (7), e21768 (2011).</li><li>Cabezas-S&#225;inz, P., Pensado-L&#243;pez, A., S&#225;inz Jr, B., S&#225;nchez, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+cancer+using+zebrafish+xenografts:+drawbacks+for+mimicking+the+human+microenvironment.">Modeling cancer using zebrafish xenografts: drawbacks for mimicking the human microenvironment.</a> Cells. 9 (9), 1978 (2020).</li><li>Haraoka, Y., Akieda, Y., Ishitani, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-imaging+analyses+using+small+fish+models+reveal+new+mechanisms+that+regulate+primary+tumorigenesis.">Live-imaging analyses using small fish models reveal new mechanisms that regulate primary tumorigenesis.</a> Yakugaku Zasshi. 139 (5), 733-741 (2019).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book. 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K., Khanna, P., Kishore, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+survival+analysis:+Kaplan-Meier+estimate.">Understanding survival analysis: Kaplan-Meier estimate.</a> Int J Ayurveda Res. 1 (4), 274-278 (2010).</li><li>Usai, A., Di Franco, G., Gabellini, C., Morelli, L., Raffa, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+zebrafish+patient-derived+xenografts+from+pancreatic+cancer+for+chemosensitivity+testing.">Establishment of zebrafish patient-derived xenografts from pancreatic cancer for chemosensitivity testing.</a> J Vis Exp. (195), e63744 (2023).</li><li>Murali Shankar, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+assessment+of+CAR-NK+cell-mediated+killing+efficacy+and+pharmacokinetics+in+a+rapid+zebrafish+xenograft+model+of+metastatic+breast+cancer.">Preclinical assessment of CAR-NK cell-mediated killing efficacy and pharmacokinetics in a rapid zebrafish xenograft model of metastatic breast cancer.</a> Front Immunol. 14, 1254821 (2023).</li><li>Takahi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenograft+of+human+pluripotent+stem+cell-derived+cardiac+lineage+cells+on+zebrafish+embryo+heart.">Xenograft of human pluripotent stem cell-derived cardiac lineage cells on zebrafish embryo heart.</a> Biochem Biophys Res Commun. 674, 190-198 (2023).</li><li>Rudner, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shared+acquired+genomic+changes+in+zebrafish+and+human+T-ALL.">Shared acquired genomic changes in zebrafish and human T-ALL.</a> Oncogene. 30 (41), 4289-4296 (2011).</li><li>Regan, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+sequencing+of+long-term+label-retaining+colon+cancer+stem+cells+identifies+novel+regulators+of+quiescence.">RNA sequencing of long-term label-retaining colon cancer stem cells identifies novel regulators of quiescence.</a> iScience. 24 (6), 102618 (2021).</li></ol>

Lo xenotrapianto di pesce zebra è emerso come un'alternativa rapida, robusta ed economica agli studi sui topi12. Sebbene siano stati riportati diversi approcci allo xenotrapianto di pesce zebra, il nostro adattamento ha portato a miglioramenti significativi. Oltre a standardizzare i parametri relativi alla procedura, questi miglioramenti si concentrano specificamente sull'accelerazione della velocità con cui possono essere eseguite le iniezioni tumorali, consentendo così un aumento del numero d...

L'analisi del comportamento dei tumori in risposta ad alterazioni genetiche o al trattamento farmacologico in vivo è un elemento essenziale della ricerca sul cancro 1,2,3,4. Tali studi comportano il più delle volte l'uso di modelli murini immunocompromessi (Mus musculus)5; Tuttavia, gli studi sugli xenotrapianti nei topi sono limitati sotto molti aspetti, tra cui capacità limitata, durata prolungata, spese significative e la necessità di sofisticate apparecchiature di imaging per monitorare la progressione dei tumori interni 6,7. Al contrario, il modello del pesce zebra (Danio rerio) consente una maggiore capacità, una durata più breve, una spesa inferiore e, grazie alla loro trasparenza, un semplice monitoraggio della progressione della malattia 8,9.
Il pesce zebra è un sistema modello di vertebrato ben sviluppato con sviluppo ex-utero e alta fecondità, con singole femmine che producono più di 100 embrioni10. Inoltre, gli embrioni di zebrafish sono trasparenti e consentono una facile visualizzazione dei processi di sviluppo utilizzando tecniche legate alla fluorescenza come i reporter. Infine, la conservazione dei processi critici di sviluppo li rende un modello ideale per molti tipi di studi, incluso il comportamento delle cellule maligne trapiantate11,12. Gli embrioni di zebrafish wild-type sviluppano melanociti, che li rendono otticamente opachi entro le 2 settimane di età, ma questo è stato superato dalla generazione di embrioni di casper (roya9; mitfaw2), che rimangono trasparenti per tutta la vita13. A causa delle loro proprietà ottiche, i pesci zebra casper sono riceventi ideali di cellule tumorali trapiantate 14,15,16. Lo xenotrapianto di cellule tumorali in zebrafish ha acquisito importanza negli ultimi 2 decenni 17,18,19,20,21. Gli embrioni di pesce zebra hanno un'immunità innata; Tuttavia, mancano di immunità adattativa durante il loro stadio larvale, rendendoli immunocompromessi dal punto di vista funzionale, il che consente loro di fungere da ospiti efficaci per gli xenotrapianti tumorali trapiantati22.
Sono stati sviluppati protocolli per l'attecchimento tumorale in embrioni di zebrafish e adulti che hanno considerato una serie di variabili diverse 23,24,25,26,27. Questi hanno esplorato numerosi siti di deposizione tumorale nel pesce zebra, comprese le iniezioni nel tuorlo, nello spazio peri-vitellino e nel cuore e in diversi stadi di sviluppo16,28. Anche la temperatura ambiente dell'acquacoltura per gli xenotrapianti di pesce zebra è importante poiché l'allevamento del pesce zebra avviene in genere a 28 °C, mentre le cellule dei mammiferi crescono a 37 °C. Di conseguenza, deve essere impiegata una temperatura di compromesso che sia tollerata dai pesci ma che supporti la crescita del tumore, e 34 °C sembra raggiungere entrambi gli obiettivi29. L'analisi del comportamento e della progressione dei tumori a seguito di xenotrapianto è un'altra importante area di interesse, e ciò comporta l'uso di una varietà di modalità di imaging e l'analisi della sopravvivenza30. Uno dei principali vantaggi del modello zebrafish è la disponibilità di un gran numero di animali in studio per fornire un'immensa potenza statistica agli studi in vivo del comportamento tumorale; Tuttavia, gli approcci precedenti hanno fortemente limitato questo potenziale a causa della necessità di noiose procedure di montaggio per le iniezioni.
Qui, affrontiamo questa limitazione attraverso lo sviluppo di un metodo semplice e rapido con cui mettere in scena gli embrioni che consente un'elevata produttività e il monitoraggio della qualità dell'iniezione utilizzando la linea trasparente casper zebrafish. Ciò comporta l'iniezione di xenotrapianti nel sacco vitellino degli embrioni di pesce zebra casper a 2 giorni dalla fecondazione (dpf). Osserviamo la sopravvivenza degli embrioni dopo lo xenotrapianto come parte dell'analisi del comportamento tumorale. Mostriamo inoltre la valutazione del carico di malattia dopo xenotrapianto effettuando sospensioni di singole cellule e analizzando mediante citometria a flusso (Figura 1).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1-phenyl 2-thiourea (PTU)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 micron cell strainer</td>
			<td>Corning&#160;</td>
			<td>CLS431751-50EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90 mm Petri dish</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>S43565</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Apex bioresearch</td>
			<td>20-102GP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC APC anti-mouse CD45.2 Antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>109814</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSymphony A5 Cell Analyzer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>BD FACSymphony A5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>calibration capillaries</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>P1424-1PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell tracker CM-dil dye</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C7001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collageanse IV</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17104019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps number 55</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>11255-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Corning&#160;</td>
			<td>35-015-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>model SMZ1500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass capillaries (Borosilicate)</td>
			<td>World precision instruments</td>
			<td>1B100-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Corning&#160;</td>
			<td>21-023-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Helix NP Blue</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>425305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instant Ocean Sea Salt</td>
			<td>Instant ocean</td>
			<td>SS15-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>model SMZ1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M9140-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microloader (long tips for laoding cells)</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>930001007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P1000 micropipette puller</td>
			<td>Sutter instruments</td>
			<td>model P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PM 1000 cell microinjector</td>
			<td>MicroData Instruments, Inc. (MDI)</td>
			<td>PM1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine methanesulphate (Ethyl 3- aminobenzoate methanesulphate)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E10521-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.5%), no phenol red</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15400054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zebrafish adult irradiated diet (dry feed)</td>
			<td>Zeigler</td>
			<td>388763</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple, rapid, and effective method for tumor xenotransplantation analysis in transparent zebrafish embryos

Gli studi in vivo sul comportamento dei tumori sono un punto fermo della ricerca sul cancro; Tuttavia, l'uso dei topi presenta sfide significative in termini di costi e tempo. Qui, presentiamo il pesce zebra larvale come un modello di trapianto che presenta numerosi vantaggi rispetto ai modelli murini, tra cui facilità di manipolazione, bassa spesa e breve durata sperimentale. Inoltre, l'assenza di un sistema immunitario adattativo durante gli stadi larvali ovvia alla necessità di generare e utilizzare ceppi immunodeficienti. Sebbene esistano protocolli consolidati per lo xenotrapianto in embrioni di zebrafish, presentiamo qui un metodo migliorato che coinvolge la stadiazione degli embrioni per un trasferimento più rapido, l'analisi della sopravvivenza e l'uso della citometria a flusso per valutare il carico della malattia. Gli embrioni vengono messi in scena per facilitare l'iniezione rapida di cellule nel tuorlo delle larve e la marcatura delle cellule per monitorare la consistenza del bolo cellulare iniettato. Dopo l'iniezione, l'analisi della sopravvivenza dell'embrione viene valutata fino a 7 giorni dopo l'iniezione (dpi). Infine, il carico di malattia viene valutato anche marcando le cellule trasferite con una proteina fluorescente e analizzando mediante citometria a flusso. La citometria a flusso è resa possibile da un metodo standardizzato di preparazione di sospensioni cellulari da embrioni di zebrafish, che potrebbe essere utilizzato anche per stabilire la coltura primaria di cellule di zebrafish. In sintesi, la procedura qui descritta consente una valutazione più rapida del comportamento delle cellule tumorali in vivo con un numero maggiore di animali per braccio di studio e in modo più economico.

Analysis of the behavior of tumors in response to genetic alteration or drug treatment in vivo is an essential element of cancer research1,2,3,4. Such studies most often involve the use of immunocompromised mouse (Mus musculus) models5; however, xenotransplantation studies in mice are limited in many respects, including limited capacity, extended duration, significant expense, and the requirement for sophisticated imaging equipment to monitor the progression of internal tumors6,7. By contrast, the zebrafish model (Danio rerio) enables greater capacity, shorter duration, lower expense, and, due to their transparency, simple monitoring of disease progression8,9.
Zebrafish is a well-developed vertebrate model system with ex-utero development and high fecundity, with individual females producing more than 100 embryos10. Moreover, zebrafish embryos are transparent, enabling easy visualization of developmental processes using fluorescence-related techniques such as reporters. Finally, the conservation of critical developmental processes makes them an ideal model for many types of studies, including the behavior of transplanted malignant cells11,12. Wild-type zebrafish embryos develop melanocytes, which render them optically opaque by 2 weeks of age, but this has been overcome by the generation of casper embryos (roya9; mitfaw2), which remain transparent throughout life13. Because of their optical properties, casper zebrafish are ideal recipients of transplanted tumor cells14,15,16. Xenotransplantation of tumor cells into zebrafish has gained importance in the past 2 decades17,18,19,20,21. Zebrafish embryos have innate immunity; however, they lack adaptive immunity during their larval stage, rendering them functionally immunocompromised, which enables them to serve as effective hosts for transplanted tumor xenografts22.
Protocols have been developed for tumor engraftment in zebrafish embryos as well as adults that have considered a number of different variables23,24,25,26,27. These have explored numerous sites of tumor deposition in zebrafish, including injections in yolk, peri-vitelline space, and heart and at different developmental stages16,28. The ambient temperature of aquaculture for zebrafish xenografts is also important as zebrafish rearing typically occurs at 28 &#176;C, while mammalian cells grow at 37 &#176;C. Consequently, a compromise temperature must be employed that is tolerated by the fish yet supports tumor growth, and 34 &#176;C appears to achieve both goals29. Analysis of the behavior and progression of tumors following xenotransplantation is another major area of focus, and this involves the use of a variety of imaging modalities as well as survival analysis30. One of the major advantages of the zebrafish model is the availability of large numbers of study animals to provide immense statistical power to in vivo studies of tumor behavior; however, previous approaches have severely limited this potential because of the requirement of tedious mounting procedures for injections.
Here, we address this limitation through the development of a simple, rapid method with which to stage embryos that enables high throughput and monitoring of injection quality using the transparent casper zebrafish line. This entails the injection of xenografts into the yolk sac of the casper zebrafish embryos at 2 days post fertilization (dpf). We observe the survival of embryos following xenotransplantation as part of tumor behavior analysis. We further show the assessment of disease burden after xenotransplantation by making single cell suspensions and analyzing by flow cytometry (Figure 1).

Author Spotlight: Advancing Cancer Therapeutics Using Tumor Xenotransplantation in Zebrafish

Un metodo semplice, rapido ed efficace per l'analisi dello xenotrapianto tumorale in embrioni trasparenti di zebrafish

Xenotrapianto Una visione completa dell'intero esperimento e dell'analisi è illustrata nella Figura 1, che va dalla produzione di embrioni alla valutazione della progressione della malattia mediante analisi della sopravvivenza e del carico di malattia mediante citometria a flusso. Questo approccio apporta diversi miglioramenti che migliorano la riproducibilità e la scalabilità dello xenotrapianto, oltre ad aggiungere un nuovo modo di valutare il carico di malattia. Il ...

Descriviamo un protocollo per lo xenotrapianto nel tuorlo di embrioni trasparenti di zebrafish ottimizzato con un metodo di stadiazione semplice e rapido. Le analisi post-iniezione includono la sopravvivenza e la valutazione del carico di malattia delle cellule xenotrapiantate mediante citometria a flusso.

In vivo studies of tumor behavior are a staple of cancer research; however, the use of mice presents significant challenges in cost and time. Here, we ...

Cerchiamo di ottenere informazioni molecolari sul controllo dell'emopoiesi normale e maligna e quindi di sfruttare tali informazioni per sviluppare nuove terapie per il trattamento dei tumori del sangue. Gli xenotrapianti tumorali sono uno strumento indispensabile per valutare l'impatto di un'alterazione genetica o di un trattamento sul comportamento del tumore. Tuttavia, gli xenotrapianti di topi sono costosi, richiedono tempo e hanno una portata limitata.L'uso del pesce zebra per lo xenotrapianto tumorale supera tutti questi inconvenienti. In questo protocollo, dimostriamo un processo di montaggio facile e rapido per lo xenotrapianto, che aumenta la produttività. Utilizziamo inoltre la colorazione cellulare per conoscere la qualità dell'inoculo e quindi la citometria a flusso per valutare la progressione del tumore valutando o quantificando il carico di malattia.Intendiamo utilizzare questo approccio per identificare nuovi modi per bloccare la funzione della cascata chinasica Ras/MAP, che guida la stragrande maggioranza dei tumori umani. E lo faremo non cercando di bloccare l'attività catalitica della cascata della chinasi Ras/MAP, ma piuttosto impedendo la sua capacità di fosforilare quei substrati cancerogeni che modifica.