Name: लेखक स्पॉटलाइट: मल्टीपल स्केलेरोसिस रिसर्च में बी-सेल प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए उपन्यास परख
Uploaded: 2023-12-01T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Autoreactive Antibodies in Mice upon Experimental Autoimmune Encephalomyelitis at JoVE.com

इस अध्ययन को राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (R03NS131908) और रक्षा विभाग द्वारा पुरस्कार संख्या W81XWH-22-1-0517 के तहत मल्टीपल स्केलेरोसिस रिसर्च प्रोग्राम के माध्यम से समर्थित किया गया था। राय, व्याख्याएं, निष्कर्ष और सिफारिशें लेखक की हैं और जरूरी नहीं कि रक्षा विभाग द्वारा उनका समर्थन किया जाए। इस अध्ययन को पूर्वी कैरोलिना विश्वविद्यालय स्टार्टअप फंड द्वारा भी समर्थित किया गया था।

चूहों से जुड़े सभी प्रक्रियाओं पूर्वी कैरोलिना विश्वविद्यालय संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (आईएसीयूसी) द्वारा अनुमोदित प्रयोगात्मक दिशा निर्देशों के अनुपालन में प्रदर्शन किया गया. इस अध्यय...

ऑटोइम्यून डिमाइलिनेशन में हास्य प्रतिक्रिया की जांच करना

<ol>
	<li>Reich, D. S., Lucchinetti, C. F., Calabresi, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis.">Multiple sclerosis.</a> N Engl J Med. 378 (2), 169-180 (2018).</li><li>Baranzini, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B+cell+repertoire+diversity+and+clonal+expansion+in+multiple+sclerosis+brain+lesions.">B cell repertoire diversity and clonal expansion in multiple sclerosis brain lesions.</a> J Immunol. 163 (9), 5133-5144 (1999).</li><li>Genain, C. P., Cannella, B., Hauser, S. L., Raine, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+autoantibodies+associated+with+myelin+damage+in+multiple+sclerosis.">Identification of autoantibodies associated with myelin damage in multiple sclerosis.</a> Nat Med. 5 (2), 170-175 (1999).</li><li>Ma, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+hypomethylation+programs+underpin+b+cell+activation+in+early+multiple+sclerosis.">Specific hypomethylation programs underpin b cell activation in early multiple sclerosis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 118 (51), e2111920118 (2021).</li><li>Hauser, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocrelizumab+versus+interferon+beta-1a+in+relapsing+multiple+sclerosis.">Ocrelizumab versus interferon beta-1a in relapsing multiple sclerosis.</a> N Engl J Med. 376 (3), 221-234 (2017).</li><li>Montalban, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocrelizumab+versus+placebo+in+primary+progressive+multiple+sclerosis.">Ocrelizumab versus placebo in primary progressive multiple sclerosis.</a> N Engl J Med. 376 (3), 209-220 (2017).</li><li>Didonna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+models+of+multiple+sclerosis:+Advantages+and+limitations+towards+better+therapies.">Preclinical models of multiple sclerosis: Advantages and limitations towards better therapies.</a> Curr Med Chem. 23 (14), 1442-1459 (2016).</li><li>Steinman, L., Zamvil, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+successfully+apply+animal+studies+in+experimental+allergic+encephalomyelitis+to+research+on+multiple+sclerosis.">How to successfully apply animal studies in experimental allergic encephalomyelitis to research on multiple sclerosis.</a> Ann Neurol. 60 (1), 12-21 (2006).</li><li>Khare, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelin+oligodendrocyte+glycoprotein-specific+antibodies+from+multiple+sclerosis+patients+exacerbate+disease+in+a+humanized+mouse+model.">Myelin oligodendrocyte glycoprotein-specific antibodies from multiple sclerosis patients exacerbate disease in a humanized mouse model.</a> J Autoimmun. 86, 104-115 (2018).</li><li>Marta, C. B., Oliver, A. R., Sweet, R. A., Pfeiffer, S. E., Ruddle, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenic+myelin+oligodendrocyte+glycoprotein+antibodies+recognize+glycosylated+epitopes+and+perturb+oligodendrocyte+physiology.">Pathogenic myelin oligodendrocyte glycoprotein antibodies recognize glycosylated epitopes and perturb oligodendrocyte physiology.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (39), 13992-13997 (2005).</li><li>Flach, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibody-boosted+t-cell+reactivation+in+the+target+organ+triggers+manifestation+of+autoimmune+cns+disease.">Autoantibody-boosted t-cell reactivation in the target organ triggers manifestation of autoimmune cns disease.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (12), 3323-3328 (2016).</li><li>Didonna, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ataxin-1+regulates+b+cell+function+and+the+severity+of+autoimmune+experimental+encephalomyelitis.">Ataxin-1 regulates b cell function and the severity of autoimmune experimental encephalomyelitis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (38), 23742-23750 (2020).</li><li>Didonna, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex-specific+tau+methylation+patterns+and+synaptic+transcriptional+alterations+are+associated+with+neural+vulnerability+during+chronic+neuroinflammation.">Sex-specific tau methylation patterns and synaptic transcriptional alterations are associated with neural vulnerability during chronic neuroinflammation.</a> J Autoimmun. 101, 56-69 (2019).</li><li>Ma, Q., Matsunaga, A., Ho, B., Oksenberg, J. R., Didonna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligodendrocyte-specific+argonaute+profiling+identifies+micrornas+associated+with+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">Oligodendrocyte-specific argonaute profiling identifies micrornas associated with experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> J Neuroinflammation. 17 (1), 297 (2020).</li><li>Lanz, T. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonally+expanded+b+cells+in+multiple+sclerosis+bind+ebv+ebna1+and+glialcam.">Clonally expanded b cells in multiple sclerosis bind ebv ebna1 and glialcam.</a> Nature. 603 (7900), 321-327 (2022).</li></ol>

यहां, एमएस पैथोलॉजी के एक प्रासंगिक पशु मॉडल में हास्य प्रतिक्रिया को सटीक रूप से निर्धारित करने के लिए एक सरल और कुशल एलिसा-आधारित प्रोटोकॉल की सूचना दी गई थी। इस विधि को हाल ही में MOG35-55/C57BL6J EAE प्रतिमान<sup cla...

मल्टीपल स्केलेरोसिस (एमएस) केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) की एक पुरानी ऑटोइम्यून बीमारी है जो मस्तिष्क पैरेन्काइमा में प्रतिरक्षा कोशिकाओं के फोकल घुसपैठ की विशेषता है, माइलिन शीथ रैपिंग अक्षतंतु, ग्लिया सक्रियण और न्यूरोनल हानि का टूटना1. रोगजनक टी कोशिकाओं की अच्छी तरह से स्थापित भूमिका के अलावा, सबूतों की कई पंक्तियों ने सीएनएस के खिलाफ ऑटोइम्यून प्रतिक्रिया की मध्यस्थता में बी कोशिकाओं की भागीदारी पर प्रकाश डाला है। बी कोशिकाओं एमएस मस्तिष्क में क्लोनल विस्तार से गुजरना और माइलिन घटकों के खिलाफ एंटीबॉडी demyelinated घावों 2,3 के भीतर पता चला है. रोग की शुरुआत में परिधीय बी कोशिकाओं के चयनात्मक सक्रियण हाल ही में प्रलेखित किया गया है, रोग दीक्षा में इस प्रतिरक्षा सेल डिब्बे के लिए एक ख्यात भूमिका का सुझाव के रूप में अच्छी तरह से4. एंटी-सीडी 20 मोनोक्लोनल एंटीबॉडी जैसे बी सेल-घटने वाले उपचारों की सफलता आगे एबेरेंट बी सेल कामकाज और ऑटोइम्यूनडिमाइलिनेशन 5,6के बीच यंत्रवत संबंध की पुष्टि करती है। आणविक दृष्टिकोण से, बी कोशिकाएं ऑटोएंटिजेन प्रस्तुति, प्रो-भड़काऊ साइटोकिन स्राव और ऑटोरिएक्टिव एंटीबॉडी उत्पादन के माध्यम से बीमारी में योगदान कर सकती हैं।
जटिल एमएस फेनोटाइप की विशिष्ट विशेषताओं को पुन: व्यवस्थित करने के लिए कई पशु मॉडल विकसित किए गए हैं। उनमें से, प्रयोगात्मक ऑटोइम्यून एन्सेफैलोमाइलाइटिस (ईएई) विवो प्रतिमान में सबसे व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है और माइलिन ऑलिगोडेंड्रोसाइट ग्लाइकोप्रोटीन (एमओजी) और माइलिन बेसिक प्रोटीन (एमबीपी)7जैसे माइलिन प्रोटीन से प्राप्त छोटे पेप्टाइड्स के साथ प्रयोगात्मक जानवरों के टीकाकरण पर निर्भर करता है। ईएई प्रतिरक्षित जानवरों एक demyelinating विकृति है कि कई पहलुओं में एमएस जैसा दिखता है, एन्सेफैलिटोजेनिक पेप्टाइड8 के खिलाफ एक मजबूत हास्य प्रतिक्रिया सहित. इस कारण से, ईएई अध्ययन रोग के संदर्भ में बी कोशिकाओं और ऑटोएंटिबॉडी के कार्य को विच्छेदित करने में सहायक रहे हैं। उदाहरण के लिए, यह प्रदर्शित किया गया था कि एमएस रोगियों से अलग एमओजी-विशिष्ट एंटीबॉडी ईएई मॉडल9 में नैदानिक पाठ्यक्रम को बढ़ा सकते हैं। विशेष रूप से, मानव एमओजी में स्थिति 42 पर प्रोलाइन अवशेष ऑटोएन्टीबॉडी रोगजनकता10 निर्धारित करने के लिए महत्वपूर्ण दिखाया गया था। हाल ही में, एमओजी-विशिष्ट ऑटोएंटिबॉडी को न केवल माइलिन हानि की मध्यस्थता करके बल्कि सीएनएस11 के भीतर ऑटोरिएक्टिव टी कोशिकाओं के पुनर्सक्रियन को बढ़ावा देने के माध्यम से बीमारी को बढ़ावा देने के लिए पाया गया है। 
सीएनएस ऑटोइम्यूनिटी में एंटीबॉडी प्रतिक्रियाओं के महत्व को ध्यान में रखते हुए, यह लेख एमओजी35-55 पेप्टाइड के साथ प्रतिरक्षित सी 57 बीएल / 6 जे चूहों ईएई में ऑटोरिएक्टिव एंटीबॉडी के सीरम स्तर को कुशलतापूर्वक मापने के लिए एक एलिसा-आधारित प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है। प्रोटोकॉल के पहले भाग में, इंट्राकार्डिक पंचर के माध्यम से सीरम इकट्ठा करने की विधि का वर्णन किया जाएगा। इसके बाद, एलिसा परख स्थापित करने और डेटा प्राप्त करने की प्रक्रियाओं का विवरण दिया जाएगा। अंत में, डेटा विश्लेषण और व्याख्या पर चर्चा की जाएगी।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>05-408-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G needles</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3,3&#39;,5,5&#39;-tetramethylbenzidine (TMB) substrate</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>N301</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive seals</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>AB0558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7906</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J female mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>000664</td>
			<td>Animals between 8-10 weeks of age should be used for EAE experiments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryogenic tubes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>10-500-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection tray</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S111022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissector scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14082-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA coating buffer</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>421701</td>
			<td>Store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel software</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td>Analysis spreadsheet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11152-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-Mouse IgG, Human ads-HRP</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>1030-05</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED light source</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AMPSILED21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate reader</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-377-575&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular biology grade water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-000-Cl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse MOG35-55 peptide</td>
			<td>EZBiolab</td>
			<td>cp7203</td>
			<td>Store at -80 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multichannel pipette</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>AP-12-200-P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noyes spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15011-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MaxiSorp 96-well plates</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>423501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>88-861-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oven</td>
			<td>VWR</td>
			<td>445-0024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer saline (PBS)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerated tabletop centrifuge</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>75002441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stop solution</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>N600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1706531</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of autoreactive antibodies in mice upon experimental autoimmune encephalomyelitis

प्रायोगिक ऑटोइम्यून एन्सेफैलोमाइलाइटिस (ईएई) एक रोग मॉडल है जो हिस्टोपैथोलॉजिकल और आणविक स्तरों पर ऑटोइम्यून डिसऑर्डर मल्टीपल स्केलेरोसिस (एमएस) को पुन: व्यवस्थित करता है। ईएई प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को बढ़ावा देने के लिए विशिष्ट सहायक के साथ लघु माइलिन पेप्टाइड्स के चमड़े के नीचे इंजेक्शन के माध्यम से प्रयोगात्मक जानवरों को प्रतिरक्षित करके प्रेरित किया जाता है। मानव समकक्ष की तरह, ईएई चूहों में डिमाइलेटिंग घाव, केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) में प्रतिरक्षा कोशिका घुसपैठ, ग्लिया सक्रियण और न्यूरोनल चोट विकसित होती है। साक्ष्य का एक सुसंगत शरीर एमएस और ईएई दोनों के एटियलजि में बी सेल डिसफंक्शन के लिए एक यंत्रवत भूमिका का भी समर्थन करता है। बी कोशिकाएं एंटीजन-प्रेजेंटिंग कोशिकाओं के साथ-साथ प्रो-इंफ्लेमेटरी साइटोकिन्स और ऑटोएंटिबॉडी के प्राथमिक स्रोत के रूप में काम कर सकती हैं। ईएई में, माइलिन पेप्टाइड्स के खिलाफ एंटीबॉडी उत्पन्न होते हैं जो रोग को प्रेरित करने के लिए नियोजित किए गए थे। इस तरह के ऑटोएंटिबॉडी को सीएनएस में माइलिन हानि या रोगजनक टी सेल पुनर्सक्रियन में मध्यस्थता करने के लिए दिखाया गया है। यह लेख माइलिन ऑलिगोडेंड्रोसाइट ग्लाइकोप्रोटीन 35-55 (MOG35-55) पेप्टाइड के साथ प्रतिरक्षित C57BL/6J चूहों के सीरम में ऑटोएंटिबॉडी की मात्रा निर्धारित करने के लिए एक कुशल एलिसा-आधारित प्रोटोकॉल का वर्णन करता है। प्रस्तावित विधि ऑटोइम्यून डिमाइलिनेशन के संदर्भ में असामान्य हास्य प्रतिक्रिया की विशिष्टता और परिमाण की जांच करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण के रूप में कार्य करती है।

Multiple sclerosis (MS) is a chronic autoimmune disease of the central nervous system (CNS) characterized by focal infiltration of immune cells into the brain parenchyma, breakdown of myelin sheaths wrapping axons, glia activation, and neuronal loss1. In addition to the well-established role of pathogenic T cells, multiple lines of evidence have highlighted the involvement of B cells in mediating the autoimmune response against the CNS. B cells undergo clonal expansion in the MS brain and antibodies against myelin components have been detected within demyelinated lesions2,3. The selective activation of peripheral B cells at disease onset has been recently documented, suggesting a putative role for this immune cell compartment in disease initiation as well4. The success of B cell-depleting therapies such as anti-CD20 monoclonal antibodies further corroborates the mechanistic connection between aberrant B cell functioning and autoimmune demyelination5,6. From a molecular standpoint, B cells can contribute to disease via autoantigen presentation, pro-inflammatory cytokine secretion, and autoreactive antibody production.
Multiple animal models have been developed to recapitulate specific features of the complex MS phenotype. Among them, experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most widely used in vivo paradigm and relies on the immunization of experimental animals with short peptides derived from myelin proteins such as myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) and myelin basic protein (MBP)7. EAE immunized animals develop a demyelinating pathology that resembles MS in many aspects, including a robust humoral response against the encephalitogenic peptide8. For this reason, EAE studies have been instrumental in dissecting the function of B cells and autoantibodies in the context of disease. For instance, it was demonstrated that MOG-specific antibodies isolated from MS patients can aggravate the clinical course in EAE models9. Notably, the proline residue at position 42 in human MOG was shown to be critical for determining autoantibody pathogenicity10. More recently, MOG-specific autoantibodies have been found to promote disease not only by mediating myelin loss but also via boosting the reactivation of autoreactive T cells within the CNS11. 
Considering the importance of antibody responses in CNS autoimmunity, this article presents an ELISA-based protocol to efficiently measure the serum levels of autoreactive antibodies in C57BL/6J mice EAE immunized with MOG35-55 peptide. In the first part of the protocol, the method to collect serum via intracardiac puncture will be described. Subsequently, the procedures to set up the ELISA assay and acquire the data will be detailed. Lastly, data analysis and interpretation will be discussed.

लेखक स्पॉटलाइट: मल्टीपल स्केलेरोसिस रिसर्च में बी-सेल प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए उपन्यास परख

प्रायोगिक ऑटोइम्यून एन्सेफैलोमाइलाइटिस पर चूहों में ऑटोरिएक्टिव एंटीबॉडी की मात्रा का ठहराव

So the focus of our laboratory is to understand the molecular basis of multiple sclerosis, a immune disease of the central nervous system that is characterized by demyelination, neuroinflammation, and axonal injury. So this protocol represent an economical and flexible alternatives to commercial kits. Our can be easily adjusted to test B-cell antibody responses against different EEA peptides.My lab is devoted to further understanding the connection between neuroinflammation and neurodegeneration in chronic neurological diseases such as multiple sclerosis.

वर्तमान एलिसा परख की मजबूती को प्रदर्शित करने के लिए, विधि का परीक्षण 20 दिनों के बाद टीकाकरण (डीपीआई) में सी 57 बीएल/6 जे महिला चूहों के एक समूह से अलग सीरम नमूनों पर किया गया था, जिसमें पूर्ण फ्रायंड के सहाय?...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Autoreactive Antibodies in Mice upon Experimental Autoimmune Encephalomyelitis at JoVE.com

प्रायोगिक ऑटोइम्यून एन्सेफेलोमाइलाइटिस (ईएई) मल्टीपल स्केलेरोसिस (एमएस) का एक पशु मॉडल है, जो मानव रोग के साथ एक मजबूत हास्य ऑटोइम्यून प्रतिक्रिया साझा करता है। यहां, हम ईएई प्रतिरक्षित चूहों के सीरम में ऑटोएंटिबॉडी की मात्रा निर्धारित करने के लिए एक सरल और लचीले एलिसा प्रोटोकॉल की रिपोर्ट करते हैं।

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a disease model that recapitulates the autoimmune disorder multiple sclerosis (MS) at histopathological ...

इसलिए हमारी प्रयोगशाला का ध्यान मल्टीपल स्केलेरोसिस के आणविक आधार को समझना है, केंद्रीय तंत्रिका तंत्र की एक प्रतिरक्षा बीमारी जो डिमाइलिनेशन, न्यूरोइन्फ्लेमेशन और एक्सोनल चोट की विशेषता है। तो यह प्रोटोकॉल वाणिज्यिक किट के लिए एक किफायती और लचीला विकल्प का प्रतिनिधित्व करता है। विभिन्न ईईए पेप्टाइड्स के खिलाफ बी-सेल एंटीबॉडी प्रतिक्रियाओं का परीक्षण करने के लिए हमारे आसानी से समायोजित किया जा सकता है।मेरी प्रयोगशाला मल्टीपल स्केलेरोसिस जैसे पुराने न्यूरोलॉजिकल रोगों में न्यूरोइन्फ्लेमेशन और न्यूरोडीजेनेरेशन के बीच संबंध को और समझने के लिए समर्पित है।

quantification-autoreactive-antibodies-mice-upon-experimental

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Quantification of Autoreactive Antibodies in Mice upon Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a disease model that recapitulates the autoimmune disorder multiple sclerosis (MS) at histopathological and molecular levels. EAE is induced by immunizing experimental animals via subcutaneous injection of short myelin peptides together with specific adjuvants to boost the immune response. Like the human counterpart, EAE mice develop demyelinating lesions, immune cell infiltration into the central nervous system (CNS), glia activation and neuronal injury. A consistent body of evidence also supports a mechanistic role for B cell dysfunction in the etiology of both MS and EAE. B cells can serve as antigen-presenting cells as well as a primary source of pro-inflammatory cytokines and autoantibodies. In EAE, antibodies are generated against the myelin peptides that were employed to induce the disease. Such autoantibodies have been shown to mediate either myelin loss or pathogenic T cell reactivation into the CNS. This article describes an efficient ELISA-based protocol to quantify autoantibodies in the serum of C57BL/6J mice immunized with the myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55 (MOG35-55) peptide. The proposed method serves as a powerful tool to investigate the specificity and magnitude of the aberrant humoral response in the context of autoimmune demyelination.

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an animal model of multiple sclerosis (MS), which shares with the human disease a robust humoral autoimmune response. Here, we report a simple and flexible ELISA protocol to quantify autoantibodies in the serum of EAE immunized mice.

Serum Collection via Intracardiac Puncture in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Immunized Mice

प्रायोगिक ऑटोइम्यून एन्सेफेलोमाइलाइटिस (ईएई) प्रतिरक्षित चूहों में इंट्राकार्डिक पंचर के माध्यम से सीरम संग्रह

Quantification of Autoantibodies in the Serum of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Immunized Mice Using ELISA

Begin by re-suspending the lyophilized MOG 35 55 peptide in water. Dilute the peptide stock to 10 micrograms per milliliter in coating buffer before the experiment. Now pipette 100 microliters of the final solution into wells of a 96 well plate.Simultaneously coat an equal number of wells with 100 microliters of BSA dissolved in coating buffer. Seal the plate with an adhesive film to prevent evaporation and incubate the plate overnight at four degrees Celsius. The next day, perform three washes of the plate with 200 microliters of PBS supplemented with 0.5%tween 20.Subsequently add 100 microliters per well of a blocking solution composed of 3%BSA in PBS. Incubate the sealed plate for one hour at 37 degrees Celsius in a hybridization oven. After incubation, wash the plate three times with 200 microliters per well of PBST.Dilute each serum sample obtained from the blood of EAE immunized mice in blocking solution and add 100 microliters per well to both MOG 35 55 and BSA coated wells. Add the same volume of blocking solution to designated blank wells. Incubate the sealed plate for two hours at room temperature with constant shaking.After incubation, remove the plate from the incubator and rinse the plate three times with 200 microliters per well of PBST. Dilute the HRP conjugated secondary antibody in a solution consisting of 0.2%BSA in PBST and add 100 microliters to each well. Incubate the sealed plate for one hour at room temperature maintaining constant shaking.Wash the plate three times with 200 microliters per well of PBST. Add 100 microliters of three, three prime, five, five prime tetramethyl benzidine substrate to each well. Incubate in the dark for one to five minutes monitoring the development of a blue color.Add 100 microliters of stop solution to each well. Then use a plate reader set at a wavelength of 450 nanometers to measure the optical density in each well. The optical density values of the EAE samples were significantly higher than the control samples indicating a robust immunoglobulin G response against the MOG peptide.