Name: Author Spotlight: Insights into the Effect of Ischemia Reperfusion on Lung Transplantation
Uploaded: 2024-04-12T13:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Author Spotlight: Insights into the Effect of Ischemia Reperfusion on Lung Transplantation at JoVE.com

Este trabajo no recibió ninguna subvención específica de ninguna agencia de financiación en los sectores público, comercial o sin fines de lucro.

Todos los estudios fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Facultad de Medicina de la Universidad de Washington. Los animales recibieron cuidados humanitarios de acuerdo con la Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio,8ª edición21 preparada por la Academia Nacional de Ciencias y publicada por los Institutos Nacionales de Salud, y los Principios de cuidado de animales de laboratorio formulados por la Sociedad Nacional de Investigac...

Mouse Model for Studying Lung Ischemia-Reperfusion Injury

<ol>
	<li>Bharat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+link+between+primary+graft+dysfunction+and+chronic+lung+allograft+rejection.">Immunological link between primary graft dysfunction and chronic lung allograft rejection.</a> Ann Thorac Surg. 86 (1), 189-195 (2008).</li><li>Daud, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+immediate+primary+lung+allograft+dysfunction+on+bronchiolitis+obliterans+syndrome.">Impact of immediate primary lung allograft dysfunction on bronchiolitis obliterans syndrome.</a> Am J Respir Crit Care Med. 175 (5), 507-513 (2007).</li><li>Halazun, K. J., Al-Mukhtar, A., Aldouri, A., Willis, S., Ahmad, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Warm+ischemia+in+transplantation:+search+for+a+consensus+definition.">Warm ischemia in transplantation: search for a consensus definition.</a> Transplant Proc. 39 (5), 1329-1331 (2007).</li><li>Warnecke, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Warm+or+cold+ischemia+in+animal+models+of+lung+ischemia-reperfusion+injury:+is+there+a+difference+.">Warm or cold ischemia in animal models of lung ischemia-reperfusion injury: is there a difference .</a> Thorac Cardiovasc Surg. 52 (3), 174-179 (2004).</li><li>Hasenauer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+cold+or+warm+ischemia+and+ex-vivo+lung+perfusion+on+the+release+of+damage+associated+molecular+patterns+and+inflammatory+cytokines+in+experimental+lung+transplantation.">Effects of cold or warm ischemia and ex-vivo lung perfusion on the release of damage associated molecular patterns and inflammatory cytokines in experimental lung transplantation.</a> J Heart Lung Transplant. 40 (9), 905-916 (2021).</li><li>Iskender, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+warm+versus+cold+ischemic+donor+lung+preservation+on+the+underlying+mechanisms+of+injuries+during+ischemia+and+reperfusion.">Effects of warm versus cold ischemic donor lung preservation on the underlying mechanisms of injuries during ischemia and reperfusion.</a> Transplantation. 102 (5), 760-768 (2018).</li><li>Santos, P., Teixeira, P. J. Z., Moraes Neto, D. M., Cypel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donation+after+circulatory+death+and+lung+transplantation.">Donation after circulatory death and lung transplantation.</a> J Bras Pneumol. 48 (2), e20210369 (2022).</li><li>Moskowitzova, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+transplantation+enhances+murine+lung+viability+and+recovery+after+ischemia-reperfusion+injury.">Mitochondrial transplantation enhances murine lung viability and recovery after ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 318 (1), L78-L88 (2020).</li><li>Nakata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+blockage+of+S100A8/A9+ameliorates+ischemia-reperfusion+injury+in+the+lung.">Functional blockage of S100A8/A9 ameliorates ischemia-reperfusion injury in the lung.</a> Bioengineering (Basel). 9 (11), 673 (2022).</li><li>Nakata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+anti-HMGB1+monoclonal+antibody+on+lung+ischemia+reperfusion+injury+in+mice.">Protective effects of anti-HMGB1 monoclonal antibody on lung ischemia reperfusion injury in mice.</a> Biochem Biophys Res Commun. 573, 164-170 (2021).</li><li>Wang, Q., Li, Y., Wu, C., Wang, T., Wu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-1+inhibition+exacerbates+ischemia-reperfusion-induced+lung+injury+in+mouse.">Aquaporin-1 inhibition exacerbates ischemia-reperfusion-induced lung injury in mouse.</a> Am J Med Sci. 365 (1), 84-92 (2023).</li><li>Gielis, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+lung+ischemia+and+reperfusion+injury:+tricks+of+the+trade.">A murine model of lung ischemia and reperfusion injury: tricks of the trade.</a> J Surg Res. 194 (2), 659-666 (2015).</li><li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitogen-activated+protein+kinases+regulate+HO-1+gene+transcription+after+ischemia-reperfusion+lung+injury.">Mitogen-activated protein kinases regulate HO-1 gene transcription after ischemia-reperfusion lung injury.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 283 (4), L815-L829 (2002).</li><li>Sharma, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenosine+A2A+receptor+activation+on+CD4++T+lymphocytes+and+neutrophils+attenuates+lung+ischemia-reperfusion+injury.">Adenosine A2A receptor activation on CD4+ T lymphocytes and neutrophils attenuates lung ischemia-reperfusion injury.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 139 (2), 474-482 (2010).</li><li>Yang, Z., Sharma, A. K., Linden, J., Kron, I. L., Laubach, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD4++T+lymphocytes+mediate+acute+pulmonary+ischemia-reperfusion+injury.">CD4+ T lymphocytes mediate acute pulmonary ischemia-reperfusion injury.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 137 (3), 695-702 (2009).</li><li>Sayah, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps+are+pathogenic+in+primary+graft+dysfunction+after+lung+transplantation.">Neutrophil extracellular traps are pathogenic in primary graft dysfunction after lung transplantation.</a> Am J Respir Crit Care Med. 191 (4), 455-463 (2015).</li><li>Okazaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+orthotopic+vascularized+aerated+lung+transplantation.">A mouse model of orthotopic vascularized aerated lung transplantation.</a> Am J Transplant. 6 (7), 1672-1679 (2007).</li><li>Hsiao, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spleen-derived+classical+monocytes+mediate+lung+ischemia-reperfusion+injury+through+IL-1beta.">Spleen-derived classical monocytes mediate lung ischemia-reperfusion injury through IL-1beta.</a> J Clin Invest. 128 (7), 2833-2847 (2018).</li><li>Sharma, A. K., Mulloy, D. P., Le, L. T., Laubach, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NADPH+oxidase+mediates+synergistic+effects+of+IL-17+and+TNF-alpha+on+CXCL1+expression+by+epithelial+cells+after+lung+ischemia-reperfusion.">NADPH oxidase mediates synergistic effects of IL-17 and TNF-alpha on CXCL1 expression by epithelial cells after lung ischemia-reperfusion.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 306 (1), L69-L79 (2014).</li><li>Zanotti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+critical+role+of+Toll-like+receptor+4+in+lung+ischemia-reperfusion+injury+and+edema.">Novel critical role of Toll-like receptor 4 in lung ischemia-reperfusion injury and edema.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 297 (297), L52-L63 (2009).</li><li>National Research Council. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide for the care and use of laboratory animals. , (2011).</li><li>Saito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pirfenidone+alleviates+lung+ischemia-reperfusion+injury+in+a+rat+model.">Pirfenidone alleviates lung ischemia-reperfusion injury in a rat model.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 158 (1), 289-296 (2019).</li><li>Tanaka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+Imatinib+on+ischemia/reperfusion+injury+in+rat+lung.">Protective effects of Imatinib on ischemia/reperfusion injury in rat lung.</a> Ann Thorac Surg. 102 (5), 1717-1724 (2016).</li><li>Kreisel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+two-photon+imaging+reveals+monocyte-dependent+neutrophil+extravasation+during+pulmonary+inflammation.">In vivo two-photon imaging reveals monocyte-dependent neutrophil extravasation during pulmonary inflammation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (42), 18073-18078 (2010).</li><li>Koletsis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+cooling+in+a+lung+hilar+clamping+model+of+ischemia-reperfusion+injury.">In situ cooling in a lung hilar clamping model of ischemia-reperfusion injury.</a> Exp Biol Med (Maywood). 231 (8), 1410-1420 (2006).</li><li>Hermsen, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+landscape+of+rat+strain+and+substrain+variation.">Genomic landscape of rat strain and substrain variation.</a> BMC Genomics. 16 (1), 357 (2015).</li><li>Beck, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genealogies+of+mouse+inbred+strains.">Genealogies of mouse inbred strains.</a> Nat Genet. 24 (1), 23-25 (2000).</li><li>Liao, W. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+orotracheal+intubation+and+ventilated+lung+ischemia+reperfusion+surgery.">A mouse model of orotracheal intubation and ventilated lung ischemia reperfusion surgery.</a> J Vis Exp. (187), 64383 (2022).</li><li>Murata, T., Nakazawa, H., Mori, I., Ohta, Y., Yamabayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reperfusion+after+a+two-hour+period+of+pulmonary+artery+occlusion+causes+pulmonary+necrosis.">Reperfusion after a two-hour period of pulmonary artery occlusion causes pulmonary necrosis.</a> Am Rev Respir Dis. 146 (4), 1048-1053 (1992).</li><li>Ukita, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+large+animal+model+for+pulmonary+hypertension+and+right+ventricular+failure:+Left+pulmonary+artery+ligation+and+progressive+main+pulmonary+artery+banding+in+sheep.">A large animal model for pulmonary hypertension and right ventricular failure: Left pulmonary artery ligation and progressive main pulmonary artery banding in sheep.</a> J Vis Exp. (173), 62694 (2021).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+right+ventricular+failure+by+pulmonary+artery+constriction+and+evaluation+of+right+ventricular+function+in+mice.">Induction of right ventricular failure by pulmonary artery constriction and evaluation of right ventricular function in mice.</a> J Vis Exp. (147), 59431 (2019).</li><li>Welbourn, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+ischaemia+reperfusion+injury:+central+role+of+the+neutrophil.">Pathophysiology of ischaemia reperfusion injury: central role of the neutrophil.</a> Br J Surg. 78 (6), 651-655 (1991).</li></ol>

Describimos una técnica de pinzamiento hiliar que consiste en la aplicación de un nudo corredizo en el hilio izquierdo que ocluye la arteria pulmonar y las venas y bronquios para inducir isquemia caliente seguida de reperfusión. Después del pinzamiento hiliar, se puede extraer el pulmón izquierdo para una variedad de técnicas experimentales como histología, citometría de flujo, secuenciación masiva o de una sola célula y reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa. Además, la sangre y el bazo pueden util...

This corrects the article <a href="https://dx.doi.org/10.3791/66232">10.3791/66232</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/66232">Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury</a>. The Protocol and Representative Results&#160;sections were&#160;updated.

Erratum: Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury

La IRI durante el trasplante de órganos es un factor de riesgo importante para la disfunción primaria del injerto y los episodios posteriores de rechazo del injerto 1,2. Durante el trasplante, el tiempo de isquemia caliente se define como el período de tiempo que transcurre desde el pinzamiento cruzado de la aorta del donante hasta el inicio de la perfusión fría y desde la extracción del órgano desde el hielo hasta la implantación del órgano. El tiempo de almacenamiento en frío se define como el período de tiempo que transcurre desde el inicio de la perfusión en frío hasta la extracción del órgano del hielo3. La isquemia caliente es más deletérea para la función orgánica posterior que la isquemia fría 4,5,6, y sus mecanismos subyacentes justifican estudios adicionales en modelos preclínicos. Además, el trasplante de órganos por donación después de la muerte cardíaca (DCD) se asocia con tiempos isquémicos cálidos más largos que la donación tradicional después de la muerte encefálica (DBD)7. Si bien el uso de donantes con DCD puede ampliar el grupo de donantes y aumentar la utilización pulmonar, se necesitan más estudios preclínicos para evaluar los efectos de la isquemia caliente en la función pulmonar posterior al trasplante. A continuación, describimos un modelo de IRI caliente en ratones a través de la pinza hiliar pulmonar izquierda.
En los últimos años se han desarrollado y adaptado varios modelos animales de pinzamiento hiliar pulmonar que pueden incluir el uso de una pinza microvascular atraumática 8,9,10,11,12,13, un torniquete de Rumel 14,15 o una ligadura de sutura16 como la pinza hiliare. El quid de la pinza hiiar es que debe ser reversible y causar un daño mínimo o nulo a las estructuras hiliares para que se pueda lograr la reperfusión. Aquí, describimos nuestra técnica de pinzamiento hiliar en ratones que implica la ligadura reversible de sutura del hilio pulmonar izquierdo con un nudo corredizo. Este método ocluye el flujo arterial pulmonar de entrada, el flujo venoso de salida y el flujo de aire dentro y fuera del bronquio principal. El principal beneficio de un nudo corredizo sobre una pinza vascular, un clip o un torniquete es que el tórax puede cerrarse durante períodos prolongados de isquemia, minimizando así la pérdida de líquido insensible y calor en el ratón. Proporcionamos un protocolo para obtener mediciones fiables de la gasometría arterial (GAB) y para medir la extravasación celular después del pinzamiento hiliar.
Esta técnica de pinzamiento hiliar ocupa un lugar importante en el estudio más amplio del trasplante de pulmón. En comparación con los modelos de trasplante pulmonar ortotópico de animales pequeños, la técnica de pinzamiento hiliar puede aislar los efectos de la IRI sin la adición de trauma anastomótico quirúrgico o alogenicidad17. Además, la técnica de pinzamiento hiliar puede dominarse más fácil y rápidamente que el trasplante de pulmón de ratón. De hecho, utilizando técnicas de pinzamiento hiliar, se han identificado en la última década varios mecanismos importantes en la patogénesis de la IRI, como TLR4, NADPH oxidasa y el receptor de adenosina A2A 14,18,19,20. En el siguiente protocolo, presentamos un método fiable, enseñable y reproducible de pinzamiento hiliar como herramienta para el estudio de la IRI pulmonar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Medications</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% povidone-iodine solution</td>
			<td>Aplicare</td>
			<td>NDC 52380-0126-2</td>
			<td>For disinfectant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine 1.3 mg/mL</td>
			<td>Fidelis Animal Health</td>
			<td>NDC 86084-100-30</td>
			<td>For pain control</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Cronus Pharma</td>
			<td>NDC 69043-027-18</td>
			<td>For pain control</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin 1000 units/mL</td>
			<td>Sagent</td>
			<td>NDC 25021-404-01</td>
			<td>For obtaining arterial blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane 1%-1.5%</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>26675-46-7</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine hydrochloride 100 mg/mL</td>
			<td>Vedco</td>
			<td>NDC 50989-996-06</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Vet eye ointment</td>
			<td>Medi-Vet.com</td>
			<td>11897</td>
			<td>To prevent eye dessiccation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine 20 mg/mL</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC 59399-110-20</td>
			<td>For pain control</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tools and Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Argent High Temp Fine Tip Cautery Pen</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>231</td>
			<td>To coagulate blood vessels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved mosquito clamp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13009-12</td>
			<td>For surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine curved forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11274-20</td>
			<td>For surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15040-11</td>
			<td>For surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intubation clamp set-up</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18374-44, 18144-30</td>
			<td>For holding mouse vertically by the tongue during intubation. See Supplementary Figure 1A.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic rib retractors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18200-01, 18200-10</td>
			<td>For retraction of thoracotomy. Magnetic fixator and retractor should be connected by micro latex tubing below.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical Grade Plastic Optical Fiber Unjacketed, 500&#956;m</td>
			<td>Edmund Optics</td>
			<td>02-532</td>
			<td>To make the introducer for the endotracheal tube. See Supplemental Figure 1B. A 1.5-inch length of this optical fiber should have a piece of silk tape secured to one end. It can then be used as an introducer for the endotracheal tube. The end of the introducer should be curves slightly.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power Pro Ultra clipper</td>
			<td>Oster</td>
			<td>078400-020-001</td>
			<td>To clip hair</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14370-22</td>
			<td>For surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal heating pad</td>
			<td>K&#38;H Pet Products</td>
			<td>Thermo-Peep Heated Pad</td>
			<td>To maintain normothermia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal ventilator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>55-0000</td>
			<td>For ventilation (TV 0.35 cc, PEEP 1 cm H2O, RR 100-105/min, FiO2 100%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spearit Micro Latex Rubber Tubing (1/8 in outside diameter, 1/16 in inside diameter)</td>
			<td>Amazon.com</td>
			<td>https://www.amazon.com/Rubber-Tubing-CONTINUOUS-Select-Length/dp/B00H4MT7V0?th=1</td>
			<td>For retraction of thoracotomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stat Profile Prime Critical Care Blood Gas Analyzer</td>
			<td>Nova Biomedical</td>
			<td>https://novabiomedical.com/prime-plus-critical-care-blood-gas-analyzer/index.php?gad=1&#38;gclid=Cj0KCQjwmICoBhDx 
			ARIsABXkXlInZX--R3ezBkc304nS_GVGI9Z2T3Esr33 
			2aM8WGPiUVhicPQZ 
			Wj2AaAqhDEALw_wcB&#160;&#160;</td>
			<td>For retraction of thoracotomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight clamp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13008-12</td>
			<td>For surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91113-10</td>
			<td>For surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td>Wild Heerbrugg</td>
			<td>no longer produced</td>
			<td>For intubation and surgical procedure; recommend replacement with Leica surgical microscopes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#189; cc syringe with &#189; inch 29G needle</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>942665</td>
			<td>For injecting ketamine/xylazine intraperitoneally</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#189; inch 31G needle on a 1 cc tuberculin syringe</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>16-SNT1C2705</td>
			<td>For aspiration of arterial blood from left ventricle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-inch 20G IV catheter</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SROX2025CA</td>
			<td>For endotracheal tube (ETT)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-inch silk tape</td>
			<td>Durapore</td>
			<td>3M ID 7100057168</td>
			<td>To tape ETT to nose and to secure limbs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3/10 cc syringe with 5/16 inch 31G needle</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>102-SN310C31516P</td>
			<td>For antibody injection into the inferior vena cava</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 monofilament suture on a P-10 needle</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>S697GX</td>
			<td>For closure of thoracotomy, muscle layer, and skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 silk tie</td>
			<td>Surgical Specialties Look</td>
			<td>SP102</td>
			<td>To make slipknot for hilar clamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pointed cotton-tipped applicators</td>
			<td>Solon</td>
			<td>56225</td>
			<td>To manipulate lung and for blunt dissection</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine left pulmonary hilar clamp model of lung ischemia reperfusion injury

La lesión por isquemia-reperfusión (IRI) durante el trasplante de pulmón es un factor de riesgo importante para las complicaciones posteriores al trasplante, incluida la disfunción primaria del injerto, el rechazo agudo y crónico y la mortalidad. Los esfuerzos para estudiar los fundamentos de la IRI condujeron al desarrollo de un modelo de ratón fiable y reproducible de pinzamiento hiliar del pulmón izquierdo. Este modelo consiste en un procedimiento quirúrgico realizado en un ratón anestesiado e intubado. Se realiza una toracotomía izquierda, seguida de una movilización pulmonar cuidadosa y disección del hilio pulmonar izquierdo. La pinza hiliar implica la ligadura reversible del hilio pulmonar con un nudo corredizo, que detiene la entrada arterial, la salida venosa y el flujo de aire a través del bronquio principal izquierdo. La reperfusión se inicia mediante la extracción cuidadosa de la sutura. Nuestro laboratorio utiliza 30 min de isquemia y 1 h de reperfusión para el modelo experimental en las investigaciones actuales. Sin embargo, estos períodos de tiempo pueden modificarse dependiendo de la pregunta experimental específica. Inmediatamente antes del sacrificio, se puede obtener gasometría arterial del ventrículo izquierdo después de un período de 4 minutos de pinzamiento del hilar derecho para garantizar que los valores dePaO2 obtenidos se atribuyan solo al pulmón izquierdo lesionado. También describimos un método para medir la extravasación celular con citometría de flujo, que implica la inyección intravenosa de un anticuerpo marcado con fluorocromo específico para la(s) célula(s) que se va a estudiar antes del sacrificio. A continuación, se puede extraer el pulmón izquierdo para la citometría de flujo, congelado o fijo, inmunohistoquímica incluida en parafina y reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa. Esta técnica de pinzamiento hiliar permite un estudio detallado de los mecanismos celulares y moleculares que subyacen a la IRI. Los resultados representativos revelan una disminución de la oxigenación del pulmón izquierdo y evidencia histológica de lesión pulmonar después del pinzamiento hiliare. Esta técnica puede ser fácilmente aprendida y reproducida por personal con y sin experiencia microquirúrgica, lo que conduce a resultados confiables y consistentes y sirve como un modelo ampliamente adoptable para el estudio de la IRI pulmonar.

IRI during organ transplantation is a major risk factor for primary graft dysfunction and later episodes of graft rejection1,2. During transplantation, warm ischemia time is defined as the period of time from donor aortic cross-clamp to initiation of cold perfusion and from organ removal from ice to organ implantation. Cold storage time is defined as the period of time from the start of cold perfusion to the removal of the organ from ice3. Warm ischemia is more deleterious for later organ function than cold ischemia4,5,6, and its underlying mechanisms warrant further study in pre-clinical models. Additionally, organ transplantation from donation after cardiac death (DCD) is associated with longer warm ischemic times than traditional donation after brain death (DBD)7. While the use of DCD donors can expand the donor pool and increase lung utilization, further pre-clinical studies to evaluate the effects of warm ischemia on post-transplant lung function are needed. Below, we describe a model of warm IRI in mice via the left pulmonary hilar clamp.
Several animal models of lung hilar clamping have been developed and adapted over the last several years and may include the use of an atraumatic microvascular clamp8,9,10,11,12,13, a Rumel tourniquet14,15, or suture ligation16 as the hilar clamp. The crux of the hilar clamp is that it must be reversible and cause minimal or no damage to the hilar structures so that reperfusion can be achieved. Here, we describe our hilar clamp technique in mice that involves reversible suture ligation of the left pulmonary hilum with a slipknot. This method occludes the pulmonary arterial inflow, venous outflow, and airflow in and out of the mainstem bronchus. The main benefit of a slipknot over a vascular clamp, clip, or tourniquet is that the chest can be closed during prolonged periods of ischemia, thereby minimizing insensible fluid and heat loss in the mouse. We provide a protocol for obtaining reliable arterial blood gas (ABG) measurements and for measuring cell extravasation after hilar clamping.
This hilar clamp technique holds an important place in the wider study of lung transplantation. Compared to small animal models of orthotopic lung transplantation, the hilar clamp technique can isolate the effects of IRI without the addition of surgical anastomotic trauma or allogenicity17. Additionally, the hilar clamp technique can be more easily and quickly mastered than the mouse lung transplant. In fact, using hilar clamp techniques, several important mechanisms in the pathogenesis of IRI have been identified in the past decade, such as TLR4, NADPH oxidase, and adenosine A2A receptor14,18,19,20. In the following protocol, we present a reliable, teachable, and reproducible method of hilar clamping as a tool for studying lung IRI.

Author Spotlight: Insights into the Effect of Ischemia Reperfusion on Lung Transplantation

Modelo murino de pinzamiento del hiliar pulmonar izquierdo de lesión por isquemia pulmonar y reperfusión

Después del pinzamiento hiliar izquierdo, la presión parcial de oxigenación en la sangre arterial (PaO2) atribuida al pulmón izquierdo es de ~100 mmHg, significativamente menor en comparación con los ~500 mmHg después de la toracotomía simulada (Figura 7A, n = 6-7). Cabe destacar que se realizaron toracotomías simuladas en ratones B6 con medición de la GAB tomada después de 4 min de pinzamiento hiliar derecho, lo que representa valores atribuidos solo al pulmón izquierd...

Watch this Scientific Journal Video about Author Spotlight: Insights into the Effect of Ischemia Reperfusion on Lung Transplantation at JoVE.com

El protocolo describe un método factible, fiable y reproducible de pinzamiento del hiliar pulmonar izquierdo que puede utilizarse para estudiar la lesión por isquemia-reperfusión pulmonar en modelos de ratón.

Ischemia reperfusion injury (IRI) during lung transplantation is a major risk factor for post-transplant complications, including primary graft ...

Estamos interesados en estudiar los efectos de la lesión por isquemia-reperfusión en los resultados después del trasplante pulmonar con el objetivo de comprender los mecanismos celulares y moleculares subyacentes. Los neutrófilos que ingresan al pulmón contribuyen a la lesión por isquemia-reperfusión (IRI, por sus siglas en inglés). Recientemente hemos descubierto que las células B preceden a los neutrófilos en la entrada al pulmón, y desempeñan un papel en el reclutamiento de neutrófilos después de la IRI.El trasplante de pulmón izquierdo en el ratón es técnicamente desafiante y requiere un entrenamiento dedicado a tiempo completo durante varios meses para lograr resultados consistentes. Además, introduce la alergenicidad y el trauma anastomótico quirúrgico. Por lo tanto, necesitamos una técnica más accesible que pueda aislar el estudio de la lesión por isquemia-reperfusión.Utilizando nuestro modelo de pinza hiliar, hemos descubierto que las células B entran en el pulmón poco después de la lesión por isquemia-reperfusión, y reclutan monocitos clásicos en un receptor de células B de forma dependiente de TLR4. En última instancia, esto da como resultado un aumento de la extravasación de neutrófilos al pulmón. Nuestro protocolo consiste en la ligadura reversible de sutura del hilio pulmonar izquierdo con un nudo corredizo.La naturaleza flexible y discreta de la sutura permite el cierre del tórax, lo que es útil para estudiar períodos más largos de isquemia caliente, ya que el cierre del tórax minimiza el calor y las pérdidas insensibles de líquido en el ratón.