Name: actin co-sedimentation assay; for the analysis of protein binding to f-actin
Uploaded: 2008-03-28T01:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin at JoVE.com

תודה ד&quot;ר פדרו קומאר במעבדה ויטמן באוניברסיטת קליפורניה בסן פרנסיסקו לסרט של אקטין בתאים HaCAT.

1. הכנת אקטין מקור אקטין בשימוש assay זה היה בלתי אנושי שריר טסיות (β-אקטין) המתקבל cytoskeleton aliquots בע&quot;מ במלאי ב 10 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​נשמרים במקפיא -70 מעלות צלזיוס. עבור assay, אקטין הוא מדולל ל 0.4 מ&quot;ג / מ&quot;ל במאגר המכיל 5 מ&quot;מ טריס pH 8, 0.2 מ&quot;?...

<ol>
	<li>Senetar, M. A., Foster, S. J., McCann, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrasteric+inhibition+mediates+the+interaction+of+the+I/LWEQ+module+proteins+Talin1,+Talin2,+Hip1,+and+Hip12+with+actin.">Intrasteric inhibition mediates the interaction of the I/LWEQ module proteins Talin1, Talin2, Hip1, and Hip12 with actin.</a> Biochemistry. 14, 15418-15428 (2004).</li><li>Goldmann, W. H., Hess, D., Isenberg, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+intact+talin+and+talin+tail+fragment+on+actin+filament+dynamics+and+structure+depends+on+pH+and+ionic+strength.">The effect of intact talin and talin tail fragment on actin filament dynamics and structure depends on pH and ionic strength.</a> Eur J Biochem. 260, 439-445 (1999).</li><li>Lee, H., Bellin, R. M., Walker, D. L., Patel, B., Powers, P., Liu, H., Garcia-Alvarez, B., de Pereda, J., Liddington, R. C., Volkmann, N., Hanein, D., Critchley, D. R., Robson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+an+Actin-binding+Site+within+the+Talin+FERM+Domain.">Characterization of an Actin-binding Site within the Talin FERM Domain.</a> J Mol Biol. 22, 771-784 (2004).</li></ol>

אקטין שיתוף שקיעה היא פשוטה assay במבחנה לנתח חלבונים specfic מחייב אקטין-F. בסרטון הזה, אנחנו מראים דוגמה אחת לאופן שבו אקטין פשוט שיתוף שקיעה יכול להתבצע. אנחנו מראים איך להכין את ה-F-אקטין, להכין את חלבון להיבדק לבין הליך של אקטין שיתוף שקיעה. מספר נקודות צריך להיחשב בעת ביצוע אקטין ש?...

actin co-sedimentation assay; for the analysis of protein binding to f-actin

Cytoskeleton אקטין בתוך התא היא רשת של סיבי אקטין המאפשר תנועה של תאים תהליכים תאיים, וזה יוצר מתח ומסייעת שומרת צורה הסלולר. למרות cytoskeleton אקטין הוא מבנה נוקשה, היא מבנה דינמי כי היא כל הזמן שיפוץ. מספר חלבונים יכולים להיקשר cytoskeleton אקטין. הכריכה של חלבון מסוים ל-F-אקטין הוא הרצוי לעתים קרובות כדי לתמוך תצפיות תא ביולוגי או יותר להבין תהליכים דינמיים עקב שיפוץ cytoskeleton אקטין. Assay שיתוף שקיעה אקטין הוא ב assay חוץ גופית בשימוש שגרתי לנתח את הכריכה של חלבונים ספציפיים או תחומים עם החלבון אקטין-F. העקרונות הבסיסיים של assay לערב דגירה של החלבון של עניין (אורך תחום מלא או של) עם ה-F-אקטין, צעד ultracentrifugation ל-F אקטין גלולה וניתוח של החלבון שיתוף sedimenting עם אקטין-F. אקטין שיתוף שקיעה מבחני יכול להיות מתוכנן בהתאם למדידת זיקות אקטין מחייב מבחני התחרות.

Watch this Scientific Journal Video about Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin at JoVE.com

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

חלבונים הנקשרים אקטין פילמנטיות (F-אקטין) באמצעות מודולים שונים אקטין מחייב. בסרטון הזה אנחנו מדגימים את ההליך של אקטין שיתוף שקיעה, אשר מהווה ב assay חוץ גופית בשימוש שגרתי לנתח חלבונים או תחומים ספציפיים הנקשרים F-אקטין.

אקטין Co-Assay שקיעה, כי ניתוח של חלבון מחייב את ה-F-אקטין

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

עצב Astrocyte שותף תרבות Assay לניתוח תכולה גבוהה של neurotoxicity

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Detection of Protein Ubiquitination

זיהוי של חלבון Ubiquitination

Ubiquitination, the covalent attachment of the polypeptide ubiquitin to target proteins, is a key posttranslational modification carried out by a set of ...

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy (FSM)

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy FSM

דימות של תא חי F-אקטין Dynamics באמצעות פלורסנט מיקרוסקופית רבב (FSM)

In this protocol we describe the use of Fluorescent Speckle Microscopy (FSM) to capture high-resolution images of actin dynamics in PtK1 cells. A unique ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

באמצעות מערכת GELFREE 8100 ההיפוך חלוקה על ההיפוך חלוקה משקל מבוסס מולקולרית עם שלב החילוץ נוזלי

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Linearization of the Bradford Protein Assay

לינאריזציה של assay חלבון ברדפורד

Determination of microgram quantities of protein in the Bradford Coomassie brilliant blue assay is accomplished by measurement of absorbance at 590 nm. ...

PAR-CliP - A Method to Identify Transcriptome-wide the Binding Sites of RNA Binding Proteins

PAR-Clip - שיטה לזהות Transcriptome רחב אתרי קישור של חלבונים RNA הכבילה

RNA transcripts are subjected to post-transcriptional gene regulation by interacting with hundreds of RNA-binding proteins (RBPs) and microRNA-containing ...

Study of the Actin Cytoskeleton in Live Endothelial Cells Expressing GFP-Actin

עיון cytoskeleton אקטין ב לתאי אנדותל חיים הבעת GFP-אקטין

The microvascular endothelium plays an important role as a selectively permeable barrier to fluids and solutes. The adhesive junctions between endothelial ...

A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

שלב נוזלי זיקה לכידת Assay באמצעות חרוזים מגנטיים ללמוד חלבונים אינטראקציה: דוגמה poliovirus-Nanobody

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

A High Throughput MHC II Binding Assay for Quantitative Analysis of Peptide Epitopes

Assay עקידת התפוקה גבוה MHC II לניתוח כמותי של פפטיד אפיטופים

Biochemical assays with recombinant human MHC II molecules can provide rapid, quantitative insights into immunogenic epitope identification, deletion, or ...

Reporter-based Growth Assay for Systematic Analysis of Protein Degradation

Assay צמיחה מבוסס כתב ניתוח שיטתי של פירוק חלבונים

Protein degradation by the ubiquitin-proteasome system (UPS) is a major regulatory mechanism for protein homeostasis in all eukaryotes. The standard ...