Name: actin co-sedimentation assay; for the analysis of protein binding to f-actin
Uploaded: 2008-03-28T01:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin at JoVE.com

आप HaCAT कोशिकाओं में actin की फिल्म के लिए UCSF में Wittman प्रयोगशाला में डा. प्रवीण कुमार के लिए धन्यवाद.

1. Actin की तैयारी इस परख में इस्तेमाल किया actin के स्रोत गैर मांसपेशी मानव (β-actin) प्लेटलेट्स cytoskeleton इंक स्टॉक aliquots 10 मिलीग्राम / एमएल -70 º सी फ्रीजर में रखा जाता है से प्राप्त किया गया था. परख के लिए, actin 0.4 मिलीग...

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	<li>Senetar, M. A., Foster, S. J., McCann, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrasteric+inhibition+mediates+the+interaction+of+the+I/LWEQ+module+proteins+Talin1,+Talin2,+Hip1,+and+Hip12+with+actin.">Intrasteric inhibition mediates the interaction of the I/LWEQ module proteins Talin1, Talin2, Hip1, and Hip12 with actin.</a> Biochemistry. 14, 15418-15428 (2004).</li><li>Goldmann, W. H., Hess, D., Isenberg, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+intact+talin+and+talin+tail+fragment+on+actin+filament+dynamics+and+structure+depends+on+pH+and+ionic+strength.">The effect of intact talin and talin tail fragment on actin filament dynamics and structure depends on pH and ionic strength.</a> Eur J Biochem. 260, 439-445 (1999).</li><li>Lee, H., Bellin, R. M., Walker, D. L., Patel, B., Powers, P., Liu, H., Garcia-Alvarez, B., de Pereda, J., Liddington, R. C., Volkmann, N., Hanein, D., Critchley, D. R., Robson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+an+Actin-binding+Site+within+the+Talin+FERM+Domain.">Characterization of an Actin-binding Site within the Talin FERM Domain.</a> J Mol Biol. 22, 771-784 (2004).</li></ol>

सह - अवसादन actin इन विट्रो परख में एक सरल specfic एफ actin बंधनकारी प्रोटीन का विश्लेषण है. इस वीडियो में, हम कैसे एक साधारण सह अवसादन actin के बाहर किया जा सकता है एक उदाहरण प्रदर्शित करता है. हम बताते हैं कि कैसे एफ actin तैयार करन...

actin co-sedimentation assay; for the analysis of protein binding to f-actin

सेल के भीतर actin cytoskeleton actin filaments के एक नेटवर्क है कि कोशिकाओं और सेलुलर प्रक्रियाओं के आंदोलन की अनुमति देता है है, और है कि तनाव उत्पन्न करता है और मदद करता है सेलुलर आकार रखता है. हालांकि actin cytoskeleton एक कठोर संरचना है, यह एक गतिशील संरचना है कि लगातार remodeling है. प्रोटीन का एक संख्या actin cytoskeleton करने के लिए बाध्य कर सकते हैं. एफ actin के लिए एक विशेष प्रोटीन के बंधन अक्सर सेल जैविक टिप्पणियों का समर्थन या आगे actin cytoskeleton की remodeling के कारण गतिशील प्रक्रियाओं को समझने के लिए वांछित है. actin परख सह - अवसादन इन विट्रो परख में एक नियमित रूप से एफ actin के साथ विशिष्ट प्रोटीन या प्रोटीन डोमेन के बंधन का विश्लेषण करने के लिए प्रयोग किया जाता है. परख के बुनियादी सिद्धांतों के हित के प्रोटीन का एक ऊष्मायन (पूर्ण लंबाई या डोमेन) एफ actin के साथ, गोली और प्रोटीन एफ actin के साथ सह - sedimenting के एफ actin के विश्लेषण के लिए ultracentrifugation कदम शामिल है. Actin सह अवसादन assays के अनुसार बनाया जा सकता है actin बाध्यकारी समानताएं और प्रतियोगिता assays के उपाय.

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Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

प्रोटीन अलग actin बाध्यकारी मॉड्यूल के माध्यम से filamentous actin (एफ actin) करने के लिए बाध्य. इस वीडियो में हम actin की प्रक्रिया सह अवसादन है, जो इन विट्रो परख में एक नियमित रूप से प्रोटीन या विशिष्ट डोमेन है कि एफ actin बाँध का विश्लेषण किया जाता है प्रदर्शित करता है.

एफ actin के लिए बाइंडिंग प्रोटीन का विश्लेषण के लिए, actin सह अवसादन परख

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

Neurotoxicity के उच्च सामग्री विश्लेषण के लिए एक neuronal और astrocyte सह संस्कृति परख

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Detection of Protein Ubiquitination

प्रोटीन ubiquitination की जांच

Ubiquitination, the covalent attachment of the polypeptide ubiquitin to target proteins, is a key posttranslational modification carried out by a set of ...

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy (FSM)

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy FSM

एफ actin प्रतिदीप्त के माध्यम से गतिशीलता का लाइव सेल इमेजिंग माइक्रोस्कोपी धब्बा (FSM)

In this protocol we describe the use of Fluorescent Speckle Microscopy (FSM) to capture high-resolution images of actin dynamics in PtK1 cells. A unique ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

आण्विक Fractionation वजन के आधार के लिए तरल चरण रिकवरी के साथ GELFREE 8100 Fractionation प्रणाली का उपयोग

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Linearization of the Bradford Protein Assay

ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परख के linearization

Determination of microgram quantities of protein in the Bradford Coomassie brilliant blue assay is accomplished by measurement of absorbance at 590 nm. ...

PAR-CliP - A Method to Identify Transcriptome-wide the Binding Sites of RNA Binding Proteins

बराबर क्लिप - एक विधि transcriptome चौड़ा शाही सेना बंधनकारी प्रोटीन की बाइंडिंग साइटें पहचानें

RNA transcripts are subjected to post-transcriptional gene regulation by interacting with hundreds of RNA-binding proteins (RBPs) and microRNA-containing ...

Study of the Actin Cytoskeleton in Live Endothelial Cells Expressing GFP-Actin

Actin cytoskeleton के लाइव Endothelial GFP-actin व्यक्त कक्ष में अध्ययन

The microvascular endothelium plays an important role as a selectively permeable barrier to fluids and solutes. The adhesive junctions between endothelial ...

A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

एक तरल चरण आत्मीयता कब्जा चुंबकीय मोती का उपयोग करने के लिए प्रोटीन से प्रोटीन सहभागिता अध्ययन परख: उदाहरण पोलियो वायरस Nanobody

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

A High Throughput MHC II Binding Assay for Quantitative Analysis of Peptide Epitopes

पेप्टाइड epitopes के मात्रात्मक विश्लेषण के लिए एक उच्च Throughput MHC द्वितीय बंधन परख

Biochemical assays with recombinant human MHC II molecules can provide rapid, quantitative insights into immunogenic epitope identification, deletion, or ...

Reporter-based Growth Assay for Systematic Analysis of Protein Degradation

प्रोटीन गिरावट के व्यवस्थित विश्लेषण के लिए रिपोर्टर-आधारित विकास परख

Protein degradation by the ubiquitin-proteasome system (UPS) is a major regulatory mechanism for protein homeostasis in all eukaryotes. The standard ...