Name: actin co-sedimentation assay; for the analysis of protein binding to f-actin
Uploaded: 2008-03-28T01:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin at JoVE.com

HaCaT細胞におけるアクチンの映画のためにUCSFのウィットマンラボで博士プラビーンクマールに感謝します。

1。アクチンの調製このアッセイで使用されているアクチンのソースを10 mg / mlで細胞骨格（株）株式のアリコートから得られた非筋ヒト血小板（β-アクチン）は-70 º Cの冷凍庫に保管されていた。アッセイのために、アクチンは、4℃で10分間、20,000 gで遠心分離5mMトリスpHが8を含有する緩衝液で0.4 mg / mlの、0.2mMのCaCl 2を 、0.2mMのATP、0.5 mMのDTT、に希釈され単量体ア?...

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	<li>Senetar, M. A., Foster, S. J., McCann, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrasteric+inhibition+mediates+the+interaction+of+the+I/LWEQ+module+proteins+Talin1,+Talin2,+Hip1,+and+Hip12+with+actin.">Intrasteric inhibition mediates the interaction of the I/LWEQ module proteins Talin1, Talin2, Hip1, and Hip12 with actin.</a> Biochemistry. 14, 15418-15428 (2004).</li><li>Goldmann, W. H., Hess, D., Isenberg, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+intact+talin+and+talin+tail+fragment+on+actin+filament+dynamics+and+structure+depends+on+pH+and+ionic+strength.">The effect of intact talin and talin tail fragment on actin filament dynamics and structure depends on pH and ionic strength.</a> Eur J Biochem. 260, 439-445 (1999).</li><li>Lee, H., Bellin, R. M., Walker, D. L., Patel, B., Powers, P., Liu, H., Garcia-Alvarez, B., de Pereda, J., Liddington, R. C., Volkmann, N., Hanein, D., Critchley, D. R., Robson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+an+Actin-binding+Site+within+the+Talin+FERM+Domain.">Characterization of an Actin-binding Site within the Talin FERM Domain.</a> J Mol Biol. 22, 771-784 (2004).</li></ol>

アクチンの共沈降は、F -アクチンへの結合specficタンパク質を解析するin vitroアッセイ簡単です。このビデオでは、我々は単純なアクチンの共沈降を行うことができる方法の一例を示す。我々は、F -アクチンを準備する方法を示し、試験されるタンパク質とアクチンの手続き共同沈降を準備。アクチンの共沈降アッセイを行う際のポイントの数を考慮する必要があります。例えば、インキュベーション用緩衝?...

actin co-sedimentation assay; for the analysis of protein binding to f-actin

細胞内のアクチン細胞骨格は細胞と細胞プロセスの動きを可能にするアクチンフィラメントのネットワークであり、それは緊張を生成し、細胞の形状を維持するのに役立ちます。アクチン細胞骨格が剛構造であるが、それは絶えず改造された動的な構造です。タンパク質の数は、アクチン細胞骨格に結合することができる。 F -アクチンへの特定のタンパク質の結合は、しばしば、細胞生物学的な観察をサポートするために、またはさらに、アクチン細胞骨格のリモデリングによる動的なプロセスを理解することが望まれている。アクチンの共沈降アッセイは、in vitroアッセイで日常的にF -アクチンと特異的タンパク質またはタンパク質ドメインの結合を分析するために使用される。アッセイの基本原則は、F -アクチンと目的のタンパク質のインキュベーション（の全長またはドメイン）、F -アクチンとの共沈降タンパク質のペレットF -アクチンと分析への超遠心ステップを含む。アクチンの共沈降アッセイはアクチン結合親和性との競合アッセイを測定するためにそれに応じて設計することができます。

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Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

タンパク質は、異なるアクチン結合モジュールを介して繊維状アクチン（F -アクチン）に結合する。このビデオでは、in vitroアッセイで日常的にF -アクチンを結合するタンパク質または特定のドメインを分析するために使用されているアクチンの共堆積、の手順を示しています。

アクチン共沈降アッセイ、F -アクチンへの結合タンパク質の解析のための

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

神経毒性の高いコンテンツ分析のための神経とアストロサイト共培養アッセイ

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Detection of Protein Ubiquitination

タンパク質のユビキチン化の検出

Ubiquitination, the covalent attachment of the polypeptide ubiquitin to target proteins, is a key posttranslational modification carried out by a set of ...

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy (FSM)

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy FSM

蛍光を経由してF -アクチンダイナミクスの生細胞イメージングでは、顕微鏡のスペックル（FSM）

In this protocol we describe the use of Fluorescent Speckle Microscopy (FSM) to capture high-resolution images of actin dynamics in PtK1 cells. A unique ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

液相の回復と分子量ベース画用GELFREE 8100分別システムの使用

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Linearization of the Bradford Protein Assay

ブラッドフォードプロテインアッセイの線形化

Determination of microgram quantities of protein in the Bradford Coomassie brilliant blue assay is accomplished by measurement of absorbance at 590 nm. ...

PAR-CliP - A Method to Identify Transcriptome-wide the Binding Sites of RNA Binding Proteins

PAR -クリップ - RNA結合タンパク質のトランスクリプトーム全体の結合部位を同定する方法

RNA transcripts are subjected to post-transcriptional gene regulation by interacting with hundreds of RNA-binding proteins (RBPs) and microRNA-containing ...

Study of the Actin Cytoskeleton in Live Endothelial Cells Expressing GFP-Actin

GFP -アクチンを発現するライブ内皮細胞におけるアクチン細胞骨格の研究

The microvascular endothelium plays an important role as a selectively permeable barrier to fluids and solutes. The adhesive junctions between endothelial ...

A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

タンパク質 - タンパク質相互作用を研究するために磁気ビーズを用いて液相アフィニティキャプチャーアッセイ：ポリオ-nanobodyの例

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

A High Throughput MHC II Binding Assay for Quantitative Analysis of Peptide Epitopes

ペプチドエピトープの定量分析のための高スループット、MHC II結合アッセイ

Biochemical assays with recombinant human MHC II molecules can provide rapid, quantitative insights into immunogenic epitope identification, deletion, or ...

Reporter-based Growth Assay for Systematic Analysis of Protein Degradation

タンパク質分解の体系的な分析のためのレポーターベースの成長アッセイ

Protein degradation by the ubiquitin-proteasome system (UPS) is a major regulatory mechanism for protein homeostasis in all eukaryotes. The standard ...