Name: actin co-sedimentation assay; for the analysis of protein binding to f-actin
Uploaded: 2008-03-28T01:00:00
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Obrigado a Dr. Praveen Kumar no laboratório Wittman em UCSF para o filme de actina em células HaCAT.

1. Preparação de actina A fonte de actina utilizado neste ensaio foi não-muscular plaquetas humanas (β-actina) obtido a partir de alíquotas Citoesqueleto Inc. Ações em 10 mg / ml são mantidas no congelador -70 º C. Para o ensaio, a actina é diluído a 0,4 mg / ml em tampão contendo 5 mM Tris pH 8, 0,2 mM CaCl 2, 0,2 mM ATP e 0,5 mM DTT, centrifugado a 20.000 g por 10 minutos a 4 º C. O sobrenadante, que é actina monomérica está pronto para ser polimerizada. Polimeriza?...

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	<li>Senetar, M. A., Foster, S. J., McCann, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrasteric+inhibition+mediates+the+interaction+of+the+I/LWEQ+module+proteins+Talin1,+Talin2,+Hip1,+and+Hip12+with+actin.">Intrasteric inhibition mediates the interaction of the I/LWEQ module proteins Talin1, Talin2, Hip1, and Hip12 with actin.</a> Biochemistry. 14, 15418-15428 (2004).</li><li>Goldmann, W. H., Hess, D., Isenberg, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+intact+talin+and+talin+tail+fragment+on+actin+filament+dynamics+and+structure+depends+on+pH+and+ionic+strength.">The effect of intact talin and talin tail fragment on actin filament dynamics and structure depends on pH and ionic strength.</a> Eur J Biochem. 260, 439-445 (1999).</li><li>Lee, H., Bellin, R. M., Walker, D. L., Patel, B., Powers, P., Liu, H., Garcia-Alvarez, B., de Pereda, J., Liddington, R. C., Volkmann, N., Hanein, D., Critchley, D. R., Robson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+an+Actin-binding+Site+within+the+Talin+FERM+Domain.">Characterization of an Actin-binding Site within the Talin FERM Domain.</a> J Mol Biol. 22, 771-784 (2004).</li></ol>

Actina co-sedimentação é um simples ensaio in vitro para analisar proteínas specfic ligação a F-actina. Neste vídeo, demonstramos um exemplo de como um simples actina co-sedimentação pode ser realizada. Vamos mostrar como preparar F-actina, prepare a proteína a ser testada e do procedimento de actina co-sedimentação. Um número de pontos devem ser considerados na realização de actina co-sedimentação ensaios. Por exemplo, os componentes do tampão para a incubação pode variar de acordo com a proteína a ser testada e pH, te...

actin co-sedimentation assay; for the analysis of protein binding to f-actin

O citoesqueleto de actina no interior da célula é uma rede de filamentos de actina que permite o movimento de células e processos celulares, e que gera tensão e ajuda a manter a forma celular. Embora o citoesqueleto de actina é uma estrutura rígida, é uma estrutura dinâmica que está em constante remodelação. Uma série de proteínas pode se ligar ao citoesqueleto de actina. A ligação de uma proteína particular para F-actina é muitas vezes desejada para suporte de células observações biológicas ou para entender melhor os processos dinâmicos, devido à remodelação do citoesqueleto de actina. O ensaio de actina co-sedimentação é um ensaio in vitro rotineiramente usados ​​para analisar a ligação de proteínas específicas ou domínios de proteína com F-actina. Os princípios básicos do ensaio envolve um período de incubação da proteína de interesse (comprimento total ou de domínio de) com F-actina, passo ultracentrifugação para pellet F-actina e análise da proteína co-sedimentação com F-actina. Actina co-sedimentação ensaios podem ser desenvolvidos de acordo com medida afinidades de ligação de actina e ensaios na competição.

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Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

Proteínas se ligam à actina filamentosa (F-actina) através de módulos de actina de ligação distinto. Neste vídeo podemos demonstrar o procedimento de actina co-sedimentação, que é um ensaio in vitro rotineiramente usado para analisar proteínas ou domínios específicos que se ligam F-actina.

Actina Ensaio Co Sedimentação; para a Análise da proteína de ligação a F-Actina

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Research

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Biology

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